張鐵剛，馮志剛，陳 慧，任 旭

(1.黑龍江護(hù)理高等?？茖W(xué)校口腔醫(yī)學(xué)系, 哈爾濱 150086； 2.遼寧省錦州市中心醫(yī)院口腔科，遼寧 錦州 121000)

0 引言

浸襲和轉(zhuǎn)移是惡性腫瘤最明顯的特征之一，口腔頜面部的惡性腫瘤以鱗狀細(xì)胞癌最為多見，一般占80%以上，而口腔頜面部血液和淋巴循環(huán)比較豐富，為腫瘤侵襲轉(zhuǎn)移提供了便利條件。近年來的研究表明，S100A9蛋白與許多實(shí)體腫瘤的發(fā)生發(fā)展關(guān)系緊密，尤其在腫瘤的侵襲和轉(zhuǎn)移中起著重要作用。本研究采用免疫組化SP法檢測35例口腔鱗癌組織中S100A9蛋白的表達(dá)情況，并探討它與口腔鱗癌臨床病理參數(shù)之間的關(guān)系。

1 材料與方法

1.1 材料

1.1.1 組織標(biāo)本

收集某醫(yī)院病理科2013年1月～2015年9月手術(shù)切除的口腔鱗癌標(biāo)本35例。所有患者均有詳細(xì)的臨床病例和病理資料,術(shù)前均未接受放療和化療,并同意標(biāo)本用于科學(xué)實(shí)驗(yàn)研究。其中男性21例,女性14例,年齡60歲以上16例，60歲以下19例。根據(jù)2002年UICC的TNM分期標(biāo)準(zhǔn)分為:Ⅰ、Ⅱ期共12例,Ⅲ、IV期共23例。結(jié)合臨床表現(xiàn)、手術(shù)記錄、病理和閱片結(jié)果判斷病理分級情況：低分化9例、中分化11例、高分化15例；淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移16例，未轉(zhuǎn)移19例。

1.1.2 實(shí)驗(yàn)試劑

兔抗人蛋白S100A9多克隆抗體和二抗試劑盒均采購自福州邁新生物技術(shù)公司。免疫組織化學(xué)染色SP法檢測S100A9的基因表達(dá)。

1.2 實(shí)驗(yàn)方法

所有標(biāo)本均在同一條件下采用SP法進(jìn)行免疫組化染色檢測S100A9的基因表達(dá)。

1.2.1 判斷標(biāo)準(zhǔn)

S100A9蛋白的陽性部位主要出現(xiàn)在細(xì)胞膜和細(xì)胞漿，以腫瘤細(xì)胞出現(xiàn)棕黃色顆粒為陽性。三者陽性判斷方法：所有切片均由2位病理醫(yī)師雙盲閱片。在顯微鏡下以細(xì)胞出現(xiàn)棕黃色顆粒判定為免疫組化陽性結(jié)果。在400倍視野下取細(xì)胞密集的5個不同視野，計(jì)數(shù)陽性細(xì)胞占細(xì)胞總數(shù)的百分比，并根據(jù)陽性細(xì)胞數(shù)和顯色強(qiáng)度分為：陰性(-)：無顯色；弱陽性(+)：陽性細(xì)胞5%～50%或顯色淺；強(qiáng)陽性(++)：陽性細(xì)胞>50%或顯色深。

1.2.2 統(tǒng)計(jì)學(xué)處理

采用SPSS12.0軟件分析各種因素與鈣結(jié)合蛋白S100A9的基因表達(dá)關(guān)系。統(tǒng)計(jì)學(xué)差異顯著性用卡方檢驗(yàn)或精確概率計(jì)算法，兩者之間的相關(guān)性采用Spaermna相關(guān)分析，P<0.05有顯著性差異，有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

S100A9蛋白基因主要表達(dá)于腫瘤細(xì)胞的胞膜和胞質(zhì)內(nèi)。35例口腔鱗癌標(biāo)本中，S100A9蛋白陽性表達(dá)率為65.71%(23/35，其中強(qiáng)陽性12例，弱陽性11例)。

2.1 S100A9蛋白表達(dá)與臨床病理參數(shù)之間的關(guān)系

結(jié)合免疫組化情況和患者臨床病理資料進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)分析，結(jié)果顯示在口腔鱗癌不同年齡組間和性別、部位、大小組間S100A9蛋白表達(dá)無統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P>0. 05)；不同病理分級組間、臨床分期組間S100A9蛋白表達(dá)差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P>0. 05)，腫瘤發(fā)生轉(zhuǎn)移組的S100A9蛋白表達(dá)均明顯強(qiáng)于無轉(zhuǎn)移組(P<0.05)。

2.1.1 性別

S100A9蛋白表達(dá)在21例男性中：陰性4例、弱陽性10例、強(qiáng)陽性7例，陽性率占80.95%；14例女性中：陰性8例、弱陽性1例、強(qiáng)陽性5例，陽性率占42.86%(P=0.218)。

2.1.2 年齡

S100A9蛋白表達(dá)在16例大于等于60歲的病例中：陰性6例、弱陽性7例、強(qiáng)陽性3例，陽性率占62.50%；19例小于60歲的病例中：表達(dá)陰性6例、弱陽性4例、強(qiáng)陽性9例，陽性率占68.42%(P=0.226)。

2.1.3 淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移

S100A9蛋白表達(dá)在19例淋巴結(jié)無轉(zhuǎn)移病例中：陰性10例、弱陽性6例、強(qiáng)陽性3例，陽性率占47.37%；淋巴結(jié)有轉(zhuǎn)移16例病例中(見圖1)：陰性2例、弱陽性5例、強(qiáng)陽性9例，陽性率占87.50%(P=0.005)。

圖1 淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移陽性(低分化)

圖2 癌旁正?？谇火つそM織

3 討論

S100家族屬于鈣離子結(jié)合蛋白，首先由Moore從牛腦中分離出來[1]。在結(jié)構(gòu)上具有25%～65%的同源性[2]。有相似的物理特性:分子量較小為10～12ku，能夠溶于100%的硫酸餒溶液，因此命名為鈣結(jié)合蛋白S100家族[3]。S100蛋白家族通過調(diào)節(jié)鈣離子和與靶蛋白的相互作用在體內(nèi)發(fā)揮各種生物學(xué)功能[4]。研究發(fā)現(xiàn)，S100蛋白家族的15個成員基因位于1號染色體長臂2區(qū)1帶(lq21)穩(wěn)定性差的部位，該區(qū)容易發(fā)生多種染色體重組[5]，并且S100家族中多個成員參與腫瘤的浸潤、轉(zhuǎn)移。在多種腫瘤中表達(dá)異常，因此它與腫瘤的發(fā)生發(fā)展密切相關(guān)[6]。

S100A9蛋白(S100 calcium-binding protein A9)屬于鈣結(jié)合蛋白S100家族成員，具有廣泛的細(xì)胞生物學(xué)功能[7]。研究發(fā)現(xiàn)它是一種與炎癥、創(chuàng)傷、腫瘤的發(fā)生發(fā)展關(guān)系密切的基因，在包括腫瘤等多種疾病的組織中表現(xiàn)出高表達(dá)[8]，具有一定的臨床研究價(jià)值。

腫瘤侵襲和轉(zhuǎn)移是一個復(fù)雜的過程，涉及細(xì)胞之間的粘附與分離、細(xì)胞外基因重組，細(xì)胞運(yùn)動增強(qiáng)和新血管形成。很多基因及表達(dá)的產(chǎn)物都參與這些過程?，F(xiàn)有的證據(jù)表明S100A9基因及表達(dá)產(chǎn)物參與了這些過程。

結(jié)果顯示：S100A9蛋白在口腔鱗狀細(xì)胞癌中的表達(dá)顯著高于鄰近正常口腔黏膜(見圖2)(P<0.05)，提示口腔正常黏膜癌變后S100A9蛋白基因表達(dá)上調(diào)。它通過發(fā)揮細(xì)胞內(nèi)和細(xì)胞外作用，影響腫瘤細(xì)胞的粘附、酶水解、運(yùn)動、增殖、凋亡和血管生成，促進(jìn)腫瘤細(xì)胞的浸潤和轉(zhuǎn)移。

本研究中S100A9基因在性別、年齡和腫瘤的大小中的表達(dá)率雖然有所差異，但都無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，并且國外也缺乏相關(guān)的報(bào)道，這仍需要大量樣本的實(shí)驗(yàn)進(jìn)一步研究證實(shí)。由此可見，S100A9基因與反映腫瘤預(yù)后的諸多因素相關(guān)，它有可能在腫瘤治療預(yù)后方面起到一定的作用，但仍要進(jìn)一步的研究證實(shí)。

研究還發(fā)現(xiàn)，口腔鱗癌組織S100A9基因的表達(dá)增強(qiáng)在發(fā)生淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移或遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移的病人中表現(xiàn)得更加顯著，從而也反映了惡性程度越高的口腔鱗癌，其侵襲性越強(qiáng)、浸潤擴(kuò)散嚴(yán)重，都可能與S100A9功能增強(qiáng)有關(guān)。因此，我們認(rèn)為S100A9基因可能作為一個預(yù)測口腔鱗狀細(xì)胞癌病情發(fā)展及指導(dǎo)臨床治療的標(biāo)記物之一。S100A9基因能否在口腔鱗癌的綜合治療中發(fā)揮作用還有賴于它作用機(jī)制的進(jìn)一步研究。

4 結(jié)語

鈣結(jié)合蛋白S100A9生物學(xué)功能在腫瘤特異性表達(dá)及淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移等方面都發(fā)現(xiàn)它與腫瘤發(fā)生發(fā)展關(guān)系密切。雖然S100A9蛋白在口腔鱗狀細(xì)胞癌中的臨床意義、分期及預(yù)后仍有待研究，但現(xiàn)有資料證明S100A9蛋白基因作為新型腫瘤標(biāo)志產(chǎn)物，可能對口腔鱗癌的早發(fā)現(xiàn)、早診斷、TNM分期及評估預(yù)后效果等方面提供有治療意義的信息。它被用作科學(xué)研究中的一種新的腫瘤標(biāo)志物，能為臨床治療提供新的思路和方法。據(jù)報(bào)道，國外已根據(jù)現(xiàn)有的研究成果，運(yùn)用多種S100家族的抗體對一些腫瘤進(jìn)行免疫組化的鑒定和分類；而國內(nèi)對S100家族研究、臨床科研及治療方面的報(bào)道較少。相信隨著科研發(fā)展，通過對S100蛋白家族深入研究，可以進(jìn)一步了解腫瘤發(fā)生和轉(zhuǎn)移的發(fā)病機(jī)制。