李曉波，付 瑞，王 吉，王淑菁，王莎莎，李 威，秦 驍，黃宗文，賀爭(zhēng)鳴，岳秉飛

(中國(guó)食品藥品檢定研究院實(shí)驗(yàn)動(dòng)物資源研究所，北京 102629)

小鼠諾如病毒在實(shí)驗(yàn)小鼠中有很高的感染率，其對(duì)動(dòng)物本身及實(shí)驗(yàn)結(jié)果均會(huì)產(chǎn)生較大影響，目前我國(guó)還沒(méi)有制定小鼠諾如病毒的相關(guān)標(biāo)準(zhǔn)。中國(guó)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物學(xué)會(huì)結(jié)合實(shí)際需求提出了小鼠諾如病毒檢測(cè)方法團(tuán)體標(biāo)準(zhǔn)的研究和撰寫(xiě)，由中國(guó)食品藥品檢定研究院和廣東省實(shí)驗(yàn)動(dòng)物監(jiān)測(cè)所共同完成。本文介紹了該標(biāo)準(zhǔn)編制的背景、法律法規(guī)依據(jù)，并對(duì)標(biāo)準(zhǔn)內(nèi)容的設(shè)置進(jìn)行了解釋。

1 編制背景

2003年Karst等人通過(guò)腦內(nèi)連續(xù)傳代的方法，從死亡的先天免疫缺陷小鼠(RAG2-/-/STAT1-/-) 體內(nèi)分離得到一種新的病原體，經(jīng)鑒定該病原體屬于杯狀病毒科，諾如病毒屬，命名為小鼠諾如病毒1型(murine norovirus,MNV-1)。小鼠死于腦炎、腦膜炎、肝炎以及肺炎等致死性感染[1]。隨后其他MNV毒株相繼被分離，這些新發(fā)現(xiàn)的毒株其病原特性與原始分離株不盡相同[2]。

MNV在實(shí)驗(yàn)小鼠中有很高的感染率。其作為一種胃腸道病原體，主要通過(guò)糞口途徑傳播，也可經(jīng)呼吸道傳播，小鼠經(jīng)口感染MNV后可持續(xù)通過(guò)糞便向外排毒，排毒時(shí)間可達(dá)8周以上，病毒可在糞便中及潮濕物體表面存活40 d以上，同時(shí)各種品系小鼠均易感，因此很容易在實(shí)驗(yàn)小鼠群體中形成爆發(fā)流行，據(jù)稱(chēng)MNV是目前實(shí)驗(yàn)小鼠中感染率最高的病毒，其感染率是排在第二位的小鼠細(xì)小病毒的10倍[3]。Masaaki等于2009年首次報(bào)道了MNV在日本的感染，其對(duì)來(lái)自6個(gè)實(shí)驗(yàn)小鼠種群的37份小鼠糞便樣本進(jìn)行檢測(cè)，MNV陽(yáng)性率為22%(8/37)[4]。Kim等對(duì)來(lái)自韓國(guó)的15個(gè)動(dòng)物設(shè)施的11個(gè)近交系或封閉群的745份小鼠血清調(diào)查表明，總MNV抗體陽(yáng)性率為15%(112/745)，其中包括內(nèi)部繁殖種群，外購(gòu)動(dòng)物及基因修飾動(dòng)物[5]。Ohsugi對(duì)來(lái)自日本和美國(guó)的29個(gè)動(dòng)物設(shè)施的96只小鼠調(diào)查表明，日本普通級(jí)小鼠和SPF級(jí)小鼠中MNV抗體陽(yáng)性率分別為67.3%(37/55)和39.1%(9/23)；美國(guó)普通級(jí)小鼠陽(yáng)性率為62.5%(10/16)，SPF級(jí)小鼠中未檢出(0/2)[6]。Charles River對(duì)客戶(hù)送檢的42000份小鼠血清中的MNV進(jìn)行檢測(cè)發(fā)現(xiàn)其陽(yáng)性率為32.4%[3]。Mahler等對(duì)來(lái)自西歐的100多個(gè)動(dòng)物設(shè)施中實(shí)驗(yàn)大、小鼠流行的24種病毒及支原體的檢測(cè)顯示，在眾多病原體中，MNV是感染率最高的病原體，陽(yáng)性率為31.8%(2670/8394)[7]。我國(guó)MNV的感染情況也不容樂(lè)觀，袁文于2010年首次報(bào)道我國(guó)廣東省實(shí)驗(yàn)小鼠MNV感染率為37.38(77/206)，且不同設(shè)施來(lái)源的病毒基因型有差異[8]。中國(guó)食品藥品檢定研究院對(duì)2014和2015年來(lái)自全國(guó)17個(gè)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物生產(chǎn)和使用單位的實(shí)驗(yàn)小鼠進(jìn)行了MNV的監(jiān)測(cè)，結(jié)果顯示MNV抗體陽(yáng)性率為18.3%(204/1114)，核酸陽(yáng)性率為34.8%(181/520)[9]。有報(bào)道對(duì)北京地區(qū)的600只小鼠檢測(cè)顯示MNV感染率為11.67%，陽(yáng)性小鼠主要來(lái)自動(dòng)物實(shí)驗(yàn)設(shè)施(陽(yáng)性率30.94%)，而商品小鼠的感染率僅為0.27%[10]。

MNV的感染會(huì)對(duì)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物造成很大危害。MNV感染會(huì)導(dǎo)致免疫缺陷小鼠(如Stat1-/-和IfnR-/-小鼠)組織發(fā)生系統(tǒng)性病變，導(dǎo)致肝、脾、肺、小腸等產(chǎn)生炎癥和壞死[11]；免疫功能正常小鼠感染MNV后雖然大部分不表現(xiàn)臨床癥狀，但有報(bào)道野生型129小鼠在感染MNV后出現(xiàn)肝的輕到中度損傷，小腸淋巴結(jié)生發(fā)中心增大，脾紅髓增生，白髓活化等病理改變[12]。很多研究通過(guò)免疫組化，免疫熒光，原位雜交等方法證實(shí)MNV能夠感染不同組織里的巨噬細(xì)胞和樹(shù)突狀細(xì)胞，包括肝、肺、腸系膜淋巴結(jié)、腹膜、小腸、脾和主動(dòng)脈等，說(shuō)明不論免疫缺陷小鼠還是正常小鼠均可能發(fā)生MNV的全身性播散[13-15]。以上事實(shí)表明MNV感染對(duì)小鼠組織的損傷不容忽視。

MNV的感染會(huì)對(duì)實(shí)驗(yàn)結(jié)果產(chǎn)生較大影響。隨著對(duì)MNV研究的深入，MNV感染對(duì)實(shí)驗(yàn)的影響越來(lái)越受到重視，一些研究表明MNV感染會(huì)對(duì)實(shí)驗(yàn)造成一定影響，嚴(yán)重的會(huì)導(dǎo)致結(jié)果出現(xiàn)偏離。Doom等報(bào)道小鼠巨細(xì)胞病毒(MCMV)模型在同時(shí)感染MNV后，雖然并不影響MCMV的感染滴度也沒(méi)有引起MCMV的再活化，但會(huì)導(dǎo)致CD8+T細(xì)胞對(duì)MCMV的免疫優(yōu)勢(shì)表位的應(yīng)答減弱[16]。Lencioni等發(fā)現(xiàn)MNV的急性感染可通過(guò)增強(qiáng)樹(shù)突狀細(xì)胞的抗原遞呈活性來(lái)改變腸炎小鼠模型的疾病進(jìn)程，如會(huì)加重Mdrla-/-小鼠細(xì)菌性腸炎的進(jìn)程，但對(duì)Smad3-/-小鼠影響不大[17-18]。還有報(bào)道發(fā)現(xiàn)MNV-1的感染會(huì)加重重復(fù)感染大腸桿菌小鼠模型的炎癥反應(yīng)，導(dǎo)致其死亡率明顯提高[19]。有趣的是在某些動(dòng)物模型中MNV的感染會(huì)對(duì)動(dòng)物起到保護(hù)作用，Thepaut等報(bào)道MNV的共感染會(huì)延長(zhǎng)綠膿桿菌所致急性肺損傷小鼠的存活期，減少體內(nèi)促炎因子的產(chǎn)生，但這也說(shuō)明MNV的感染會(huì)顯著改變傳統(tǒng)動(dòng)物感染模型的實(shí)驗(yàn)參數(shù)，從而導(dǎo)致錯(cuò)誤的實(shí)驗(yàn)結(jié)果[20]。

鑒于MNV的上述特征，國(guó)際上的一些實(shí)驗(yàn)動(dòng)物權(quán)威監(jiān)管和檢測(cè)機(jī)構(gòu)如歐盟實(shí)驗(yàn)動(dòng)物科學(xué)聯(lián)合會(huì)(FELASA)、Charles River實(shí)驗(yàn)室、杰克遜實(shí)驗(yàn)室等均將其列為實(shí)驗(yàn)小鼠的常規(guī)必檢項(xiàng)目[21]，遺憾的是我國(guó)的實(shí)驗(yàn)動(dòng)物國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)和其他相關(guān)標(biāo)準(zhǔn)均不包括MNV，為提高實(shí)驗(yàn)小鼠質(zhì)量，適應(yīng)我國(guó)目前實(shí)驗(yàn)動(dòng)物科學(xué)的發(fā)展水平和應(yīng)用要求，與國(guó)際標(biāo)準(zhǔn)接軌，亟需制定小鼠諾如病毒檢測(cè)技術(shù)的相關(guān)標(biāo)準(zhǔn)。

2 法規(guī)依據(jù)

質(zhì)檢總局、國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)委、民政部于2017年底發(fā)布的《團(tuán)體標(biāo)準(zhǔn)管理規(guī)定(試行)》對(duì)團(tuán)體標(biāo)準(zhǔn)的制定、實(shí)施和監(jiān)督進(jìn)行了詳細(xì)的規(guī)定[22]，第三條對(duì)團(tuán)體標(biāo)準(zhǔn)進(jìn)行了定義：“團(tuán)體標(biāo)準(zhǔn)是依法成立的社會(huì)團(tuán)體為滿(mǎn)足市場(chǎng)和創(chuàng)新需要，協(xié)調(diào)相關(guān)市場(chǎng)主體共同制定的標(biāo)準(zhǔn)”。小鼠諾如病毒檢測(cè)方法團(tuán)體標(biāo)準(zhǔn)的制定均嚴(yán)格遵照該規(guī)定的要求執(zhí)行。

《團(tuán)體標(biāo)準(zhǔn)管理規(guī)定(試行)》第十三條“團(tuán)體標(biāo)準(zhǔn)的編寫(xiě)參照GB/T 1.1《標(biāo)準(zhǔn)化工作導(dǎo)則第1部分：標(biāo)準(zhǔn)的結(jié)構(gòu)和編寫(xiě)》的規(guī)定執(zhí)行”。本標(biāo)準(zhǔn)的編寫(xiě)也嚴(yán)格參照了本導(dǎo)則的規(guī)定進(jìn)行。

本標(biāo)準(zhǔn)收集、整理了國(guó)內(nèi)外有關(guān)組織、地方和實(shí)驗(yàn)動(dòng)物專(zhuān)業(yè)生產(chǎn)公司的實(shí)驗(yàn)小鼠諾如病毒檢測(cè)的先進(jìn)標(biāo)準(zhǔn)，在研究分析質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)和控制要求的異同點(diǎn)后，在我國(guó)現(xiàn)有的實(shí)驗(yàn)小鼠目前微生物質(zhì)量控制研究基礎(chǔ)之上制定。在確定本標(biāo)準(zhǔn)各項(xiàng)指標(biāo)時(shí)，以國(guó)家科委第2號(hào)令《實(shí)驗(yàn)動(dòng)物管理?xiàng)l例》和國(guó)家科委與國(guó)家技術(shù)監(jiān)督局聯(lián)合頒發(fā)的《實(shí)驗(yàn)動(dòng)物質(zhì)量管理辦法》為依據(jù)，同時(shí)參考了國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)《實(shí)驗(yàn)動(dòng)物 微生物學(xué)等級(jí)及監(jiān)測(cè)》、《實(shí)驗(yàn)動(dòng)物 微生物學(xué)檢測(cè)方法》，以及國(guó)際公認(rèn)的具有權(quán)威性的資料如FELASA及世界動(dòng)物衛(wèi)生組織(OIE)等資料，使本標(biāo)準(zhǔn)的各項(xiàng)指標(biāo)與國(guó)際水平接軌，符合國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)的要求，使標(biāo)準(zhǔn)具有一定的可操作性。

3 內(nèi)容編制

3.1 檢測(cè)方法的設(shè)置

隨著對(duì)MNV研究的深入，MNV的檢測(cè)方法也越來(lái)越趨于成熟，目前已建立和應(yīng)用的主要實(shí)驗(yàn)室檢測(cè)技術(shù)有病毒的分離和鑒定、免疫熒光法(IFA)、酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)(ELISA)、聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)(PCR)及實(shí)時(shí)熒光PCR(qPCR)等。單一的檢測(cè)方法都有其優(yōu)缺點(diǎn)，考慮到既能檢測(cè)MNV抗原，又能檢測(cè)病毒抗體，我們參考了歐盟實(shí)驗(yàn)動(dòng)物科學(xué)聯(lián)合會(huì)(FELASA)有關(guān)MNV的檢測(cè)技術(shù)[21]，在本團(tuán)體標(biāo)準(zhǔn)中規(guī)定了病毒的分離培養(yǎng)、IFA、ELISA、PCR及qPCR等檢測(cè)方法?！秷F(tuán)體標(biāo)準(zhǔn)管理規(guī)定(試行)》第十條規(guī)定：“團(tuán)體標(biāo)準(zhǔn)的技術(shù)要求不得低于強(qiáng)制性標(biāo)準(zhǔn)的相關(guān)技術(shù)要求”。列入本標(biāo)準(zhǔn)的檢測(cè)方法主要有兩個(gè)來(lái)源，一是起草單位實(shí)驗(yàn)室建立并驗(yàn)證的方法，列入本標(biāo)準(zhǔn)的大部分方法均來(lái)自于此；另一部分是文獻(xiàn)報(bào)道的方法，這些方法經(jīng)起草單位實(shí)驗(yàn)室驗(yàn)證其敏感性、特異性及穩(wěn)定性等指標(biāo)，選擇指標(biāo)良好的方法列入本標(biāo)準(zhǔn)。沒(méi)有一種檢測(cè)方法是萬(wàn)能的，每種方法都有其優(yōu)缺點(diǎn)及檢測(cè)的局限性：病毒的分離和鑒定多用于急性病例的確診，IFA 和ELISA主要用于檢測(cè)MNV抗體，ELISA可用于大量樣本的篩查，IFA可做確認(rèn)試驗(yàn)。PCR和實(shí)時(shí)熒光PCR用于檢測(cè)病毒核酸，準(zhǔn)確快速，可在MNV抗體未出現(xiàn)陽(yáng)轉(zhuǎn)之前檢測(cè)到抗原，并且適用于不產(chǎn)生抗體的免疫缺陷動(dòng)物中MNV的檢測(cè)，同時(shí)小鼠糞便作為檢測(cè)樣本，取樣方便，不需處死動(dòng)物，符合實(shí)驗(yàn)動(dòng)物福利倫理的要求，因此目前應(yīng)用較廣泛。這兩種方法相比，PCR方法操作簡(jiǎn)便，但實(shí)驗(yàn)操作較費(fèi)時(shí)，并且PCR產(chǎn)物電泳步驟增加了交叉污染的風(fēng)險(xiǎn)；熒光PCR方法簡(jiǎn)便快捷，樣品反應(yīng)和結(jié)果觀察均在一個(gè)體系內(nèi)完成，減少了交叉污染的機(jī)會(huì)，被越來(lái)越多的廣泛應(yīng)用，但成本較高。在實(shí)際應(yīng)用中，可根據(jù)各個(gè)實(shí)驗(yàn)室的檢測(cè)需求和實(shí)驗(yàn)室的現(xiàn)有條件，從中選用1～2種方法應(yīng)用即可。各種檢測(cè)方法如果有合適的商品化試劑也可購(gòu)買(mǎi)使用，但必須對(duì)所購(gòu)買(mǎi)的試劑進(jìn)行質(zhì)控驗(yàn)證。

3.2 抗原檢測(cè)方法

3.2.1 病毒的分離培養(yǎng)[23]

病毒的分離培養(yǎng)作為病毒感染檢測(cè)的“金標(biāo)準(zhǔn)”，列入了本團(tuán)體標(biāo)準(zhǔn)。MNV是第一個(gè)能在體外通過(guò)細(xì)胞進(jìn)行分離培養(yǎng)的諾如病毒，本標(biāo)準(zhǔn)規(guī)定了MNV用RAW264.7細(xì)胞進(jìn)行分離培養(yǎng)的技術(shù)，RAW細(xì)胞分離自白血病病毒誘發(fā)的小鼠淋巴瘤，屬小鼠巨噬細(xì)胞系，易于傳代培養(yǎng)，感染MNV后會(huì)產(chǎn)生明顯的細(xì)胞病變，目前已被廣泛用于MNV的體外培養(yǎng)分離。

3.2.2 核酸檢測(cè)技術(shù)

(1)普通PCR方法：目前熒光PCR作為一種主流的核酸檢測(cè)技術(shù)，比普通PCR方法敏感性高1至2個(gè)數(shù)量級(jí)，且PCR產(chǎn)物無(wú)需瓊脂糖凝膠電泳，節(jié)省了實(shí)驗(yàn)時(shí)間，并且減少了污染的幾率，有著普通PCR不能比擬的優(yōu)勢(shì)，但其儀器較貴，并且PCR試劑的合成費(fèi)用較高，對(duì)一些還不具備熒光PCR實(shí)驗(yàn)條件實(shí)驗(yàn)室可采用成本較低的普通PCR方法。本標(biāo)準(zhǔn)所列的PCR方法包含單次PCR和套氏PCR兩種方法，單次PCR相比套氏PCR，PCR進(jìn)行一輪擴(kuò)增，所用時(shí)間短，但單次PCR的敏感性不如套氏PCR；套氏PCR敏感性高，但需要進(jìn)行兩輪擴(kuò)增，第2輪PCR反應(yīng)是以第1輪的PCR產(chǎn)物為模板，因而增加了污染的幾率，容易產(chǎn)生假陽(yáng)性結(jié)果。這兩種方法各有優(yōu)缺點(diǎn)，可根據(jù)實(shí)際情況任選一種即可。

(2)熒光PCR：本標(biāo)準(zhǔn)所列的熒光PCR方法包含染料法[9]和探針?lè)▋煞N方法，均可用來(lái)定量檢測(cè)MNV。染料法是在PCR反應(yīng)體系中加入熒光染料，利用熒光染料能特異的摻入DNA雙鏈從而發(fā)射熒光信號(hào)，而單鏈DNA則不會(huì)摻入結(jié)合的特點(diǎn)，熒光信號(hào)的增加與PCR產(chǎn)物的增加成正比，通過(guò)檢查熒光信號(hào)來(lái)判斷是否有產(chǎn)物擴(kuò)增。探針?lè)ㄖ饕遣捎靡粭l特異性探針，在其兩端分別標(biāo)記一個(gè)報(bào)告熒光基團(tuán)和一個(gè)淬滅熒光基團(tuán)。在探針完整時(shí)，報(bào)告基團(tuán)發(fā)射的熒光信號(hào)被淬滅基團(tuán)吸收；而在有特異PCR擴(kuò)增時(shí)，Taq酶的酶切活性將探針酶切降解，報(bào)告基團(tuán)和淬滅基團(tuán)分離，淬滅作用消失，因而產(chǎn)生熒光信號(hào)。從原理來(lái)看，染料法不含特異探針，只有一對(duì)特異性引物，其特異性會(huì)降低，因此結(jié)果判定需要結(jié)合溶解曲線來(lái)進(jìn)行，但染料法的敏感性高于探針?lè)?，最低可檢測(cè)到10拷貝/μL MNV核酸。兩種方法也是各有優(yōu)劣，同樣可根據(jù)需要選擇一種方法即可。

3.3 抗體檢測(cè)方法

3.3.1 ELISA

ELISA方法由于其操作簡(jiǎn)便易行的特點(diǎn)，是目前實(shí)驗(yàn)動(dòng)物國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)中檢測(cè)病毒抗體的主流方法，其操作步驟參考GB/T 14926.50-2001《實(shí)驗(yàn)動(dòng)物 酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)》。所用的檢測(cè)抗原既可以是重組抗原也可以是純化的病毒抗原，無(wú)論是重組抗原還是病毒抗原，都要求較高的純度。

3.3.2 IFA

在ELISA檢測(cè)為可疑結(jié)果的情況下(如OD值處于臨界值的情況)，可用IFA進(jìn)行確認(rèn)實(shí)驗(yàn)。本標(biāo)準(zhǔn)規(guī)定了MNV接種RAW264.7細(xì)胞的免疫熒光檢測(cè)方法，具體操作參照GB/T14926.52-2001 《實(shí)驗(yàn)動(dòng)物 免疫熒光試驗(yàn)》。

4 未來(lái)展望

實(shí)驗(yàn)動(dòng)物被譽(yù)為生命科學(xué)研究中的“活天平”和“活試劑”，實(shí)驗(yàn)動(dòng)物質(zhì)量關(guān)系到科學(xué)實(shí)驗(yàn)結(jié)果的可靠性和準(zhǔn)確性，從而影響藥品質(zhì)量評(píng)價(jià)和人民群眾的身體健康，因此對(duì)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物質(zhì)量尤其是微生物和寄生蟲(chóng)等的預(yù)防與控制，顯得尤為緊迫和需要。

我國(guó)目前對(duì)實(shí)驗(yàn)小鼠的微生物監(jiān)測(cè)主要參照實(shí)驗(yàn)動(dòng)物國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)“GB 14922.2-2011 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物 微生物學(xué)等級(jí)及監(jiān)測(cè)”，其中對(duì)清潔級(jí)小鼠病毒規(guī)定檢測(cè)5項(xiàng)，SPF級(jí)小鼠在清潔級(jí)小鼠的基礎(chǔ)上增加6項(xiàng)。國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)的歷次修訂均未考慮將MNV加入，這也造成了國(guó)內(nèi)大部分實(shí)驗(yàn)小鼠的MNV感染情況處于無(wú)監(jiān)管狀態(tài)，實(shí)際感染狀況堪憂(yōu)，對(duì)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物的質(zhì)量及實(shí)驗(yàn)結(jié)果造成的潛在影響不容忽視。

《團(tuán)體標(biāo)準(zhǔn)管理規(guī)定(試行)》第二十五條“團(tuán)體標(biāo)準(zhǔn)實(shí)施效果良好，且符合國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)、行業(yè)標(biāo)準(zhǔn)或地方標(biāo)準(zhǔn)制定要求的，團(tuán)體標(biāo)準(zhǔn)發(fā)布機(jī)構(gòu)可以申請(qǐng)轉(zhuǎn)化為國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)、行業(yè)標(biāo)準(zhǔn)或地方標(biāo)準(zhǔn)”。本團(tuán)體標(biāo)準(zhǔn)在將來(lái)的實(shí)施和實(shí)踐中也會(huì)不斷的改進(jìn)和提高，隨著實(shí)驗(yàn)動(dòng)物科學(xué)的發(fā)展，實(shí)驗(yàn)動(dòng)物質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)要求的越來(lái)越高，團(tuán)體標(biāo)準(zhǔn)轉(zhuǎn)化為國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)或地方標(biāo)準(zhǔn)勢(shì)在必行，將成熟的經(jīng)實(shí)踐檢驗(yàn)過(guò)的團(tuán)體標(biāo)準(zhǔn)轉(zhuǎn)化為實(shí)驗(yàn)動(dòng)物的國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)，從而填補(bǔ)國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)中MNV檢測(cè)的空白，也是促進(jìn)我們的國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)與國(guó)際接軌，提高我國(guó)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物質(zhì)量整體水平的必然要求。