張潔婷，云 璐，李海僖，楊 海

(山東省青島市中心醫(yī)院，山東 青島 266042)

5-氟尿嘧啶(5-Fu)屬于細(xì)胞毒類藥物，是腫瘤化學(xué)治療的重要藥物，其抗瘤譜較廣，主要用于治療消化道腫瘤、乳腺癌、卵巢癌、肺癌、宮頸癌、膀胱癌及皮膚癌等[1]。但是由于5-Fu殺滅腫瘤細(xì)胞的非特異性，致使該藥物毒副反應(yīng)較大，患者治療過(guò)程中耐受性差。近些年中藥用于腫瘤治療的研究越來(lái)越多，發(fā)現(xiàn)中藥可通過(guò)降低化療藥物的毒性反應(yīng)和/或提高化療藥物的敏感性等發(fā)揮減毒增效作用[2-4]。解毒化瘀方是臨床使用多年的驗(yàn)方，可提高患者化療耐受性及依從性，增強(qiáng)患者機(jī)體免疫力[5]，且實(shí)驗(yàn)研究發(fā)現(xiàn)該組方具有促進(jìn)小鼠淋巴細(xì)胞增殖、增強(qiáng)NK細(xì)胞殺傷力作用[6-7]。本研究觀察了解毒化瘀方對(duì)S180荷瘤小鼠5-Fu化療效果及毒副作用的影響，旨在為該方的臨床應(yīng)用提供更多依據(jù)。

1 實(shí)驗(yàn)資料

1.1實(shí)驗(yàn)動(dòng)物及瘤株 雄性昆明種健康小鼠，體質(zhì)量22～24 g，購(gòu)自濟(jì)南朋悅實(shí)驗(yàn)動(dòng)物繁育有限公司，許可證號(hào)：SCXK(魯)20140007，動(dòng)物實(shí)驗(yàn)經(jīng)醫(yī)學(xué)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物管理委員會(huì)批準(zhǔn)。S180肉瘤腫瘤株由首都醫(yī)科大學(xué)提供，并于青島海洋生物醫(yī)藥研究院新藥篩選與評(píng)價(jià)中心實(shí)驗(yàn)室由昆明小鼠體內(nèi)腹水傳代保存。

1.2實(shí)驗(yàn)藥物 5-Fu購(gòu)于阿拉丁(批號(hào)：J1330022)。解毒化瘀方組成：黃芪、白術(shù)各18 g，茯苓、仙鶴草、魚(yú)腥草、茵陳、虎杖、淫羊藿、海藻各15 g，龍葵30 g，姜半夏、制大黃各10 g，經(jīng)傳統(tǒng)方法煎煮后原液濃縮至480 mg/mL。每次給藥現(xiàn)用現(xiàn)取，混勻后使用，給藥期間藥物儲(chǔ)存在4 ℃條件下。

1.3主要實(shí)驗(yàn)儀器 超凈臺(tái)(SW-CJ-2F)：蘇州凈化設(shè)備有限公司；倒置顯微鏡(BX53):日本奧林帕斯公司；十萬(wàn)分之一天平(MS105DU)：瑞士梅特勒公司；離心機(jī)Thermo 21R：美國(guó)Thermo公司；超低溫冰箱(DW-86L388A):中國(guó)海爾公司；高壓滅菌鍋(MLS-3781L)：日本三洋公司；超凈純水器(AdvantageA5):美國(guó)密理博公司。

1.4實(shí)驗(yàn)方法

1.4.1腫瘤接種 參照文獻(xiàn)[8]方法。腫瘤細(xì)胞均采用3次傳代后活化的S180肉瘤細(xì)胞，小鼠經(jīng)斷頸處死后，抽取腹水，收集S180肉瘤腹水細(xì)胞，并用無(wú)菌生理鹽水稀釋成1 000萬(wàn)/mL 細(xì)胞懸液。抽取細(xì)胞懸液，常規(guī)消毒后按每只0.2 mL接種于小鼠右前肢腋部皮下，每只小鼠接種200萬(wàn)細(xì)胞，制備S180小鼠肉瘤的實(shí)體瘤動(dòng)物模型。

1.4.2分組處理 將接種腫瘤細(xì)胞后的小鼠隨機(jī)分為生理鹽水組、10 mg/kg 5-Fu組、20 mg/kg 5-Fu組、1 200 mg/kg中藥組、2 400 mg/kg中藥組、10 mg/kg 5-Fu聯(lián)合1 200 mg/kg中藥組、10 mg/kg 5-Fu聯(lián)合2 400 mg/kg中藥組，每組14只。接種24 h后開(kāi)始給予相應(yīng)干預(yù)13 d，5-Fu腹腔注射，隔日1次；中藥灌胃，每日1次；生理鹽水組灌胃中藥同等體積的生理鹽水。

1.4.3指標(biāo)觀察 ①在實(shí)驗(yàn)期間記錄各組小鼠的一般情況(飲食、外觀、行為、分泌物、排泄物、中毒表現(xiàn)和死亡情況等)，每日稱體質(zhì)量并記錄。②末次給藥后24 h處死各組小鼠，剝離其腫瘤組織，稱取腫瘤質(zhì)量，參照文獻(xiàn)[9]中公式計(jì)算腫瘤抑制率。腫瘤抑制率(%)=[1-(實(shí)驗(yàn)組平均瘤質(zhì)量/對(duì)照組平均瘤質(zhì)量)]×100%。③同時(shí)摘取各組小鼠的胸腺及脾臟，剝離被膜，分別稱取小鼠的胸腺及脾臟質(zhì)量，參照文獻(xiàn)[10]中公式計(jì)算胸腺及脾臟指數(shù)。胸腺指數(shù)=100×胸腺質(zhì)量/體質(zhì)量；脾臟指數(shù)=100×脾臟質(zhì)量/體質(zhì)量。

2 結(jié) 果

2.1各組S180荷瘤小鼠一般情況及體質(zhì)量變化 各中藥組給藥后小鼠精神狀態(tài)、被毛光澤度、日?；顒?dòng)情況均優(yōu)于生理鹽水組及單純5-Fu組，實(shí)驗(yàn)過(guò)程中無(wú)小鼠發(fā)生變態(tài)反應(yīng)。干預(yù)13 d后，20 mg/kg 5-Fu組小鼠體質(zhì)量明顯低于其他組(P均<0.05)，其他各組小鼠體質(zhì)量比較差異均無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P均>0.05)，見(jiàn)表1及圖1。

表1 各組S180荷瘤小鼠干預(yù)前及干預(yù)結(jié)束后體質(zhì)量比較

注：①與20 mg/kg 5-Fu組比較，P<0.05。

圖1 實(shí)驗(yàn)期間各組S180荷瘤小鼠體質(zhì)量變化

2.2各組S180荷瘤小鼠腫瘤質(zhì)量與腫瘤抑制率比較 10 mg/kg 5-Fu組、20 mg/kg 5-Fu組、10 mg/kg 5-Fu聯(lián)合1 200 mg/kg中藥組、10 mg/kg 5-Fu聯(lián)合2 400 mg/kg中藥組腫瘤質(zhì)量均明顯低于生理鹽水組和1 200 mg/kg中藥組、2 400 mg/kg中藥組(P均<0.05)，生理鹽水組、1 200 mg/kg中藥組、2 400 mg/kg中藥組腫瘤質(zhì)量比較差異均無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P均>0.05)。20 mg/kg 5-Fu組、10 mg/kg 5-Fu聯(lián)合1 200 mg/kg中藥組、10 mg/kg 5-Fu聯(lián)合2 400 mg/kg中藥組腫瘤抑制率均明顯高于10 mg/kg 5-Fu組(P均<0.05)，且10 mg/kg 5-Fu聯(lián)合1 200 mg/kg中藥組腫瘤抑制率明顯高于20 mg/kg 5-Fu組和10 mg/kg 5-Fu聯(lián)合2 400 mg/kg中藥組(P均<0.05)。見(jiàn)表2。

表2 各組S180荷瘤小鼠腫瘤質(zhì)量與腫瘤抑制率比較

注：①與生理鹽水組比較，P<0.05；②與10 mg/kg 5-Fu組比較，P<0.05；③與10 mg/kg 5-Fu聯(lián)合1 200 mg/kg中藥組比較，P<0.05。

2.3各組S180荷瘤小鼠胸腺指數(shù)、脾臟指數(shù)比較10 mg/kg 5-Fu組、20 mg/kg 5-Fu組胸腺指數(shù)均明顯低于生理鹽水組(P均<0.05)，2 400 mg/kg中藥組胸腺指數(shù)明顯高于生理鹽水組(P<0.05)，其他組胸腺指數(shù)與生理鹽水組比較差異均無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P均>0.05)。20 mg/kg 5-Fu組脾臟指數(shù)明顯低于生理鹽水組(P<0.05)，其他組脾臟指數(shù)比較差異均無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P均>0.05)。見(jiàn)表3。

表3 各組S180荷瘤小鼠胸腺指數(shù)、脾臟指數(shù)比較

注：①與生理鹽水組比較，P<0.05 。

3 討 論

目前治療惡性腫瘤的方式主要有化療、放療、手術(shù)等，其中化療在腫瘤的綜合治療中占有重要地位。但是化療藥物在殺傷腫瘤細(xì)胞的同時(shí)也存在一定的毒副反應(yīng)，故如何提高治療效果、減輕毒副反應(yīng)一直是臨床亟待解決的問(wèn)題。相關(guān)研究表明，丹參、仙茅等多種中藥可影響腫瘤的生長(zhǎng)代謝過(guò)程，調(diào)控機(jī)體的免疫功能和內(nèi)分泌功能，可減輕腫瘤患者癥狀及化療藥物毒副作用，從而提高腫瘤患者生存周期和生活質(zhì)量[11-13]。本研究所選解毒化瘀方經(jīng)臨床應(yīng)用顯示出較好作用，為進(jìn)一步探討該方不同劑量單用和與5-Fu聯(lián)合應(yīng)用的效果，筆者進(jìn)行了相關(guān)動(dòng)物實(shí)驗(yàn)。

本實(shí)驗(yàn)過(guò)程中，各組小鼠均無(wú)過(guò)敏中毒等不良反應(yīng)，各中藥組小鼠的精神狀態(tài)和被毛的光澤度優(yōu)于生理鹽水組，說(shuō)明解毒化瘀方單用或聯(lián)合5-Fu對(duì)實(shí)驗(yàn)小鼠均無(wú)明顯的毒害作用。實(shí)驗(yàn)中20 mg/kg 5-Fu組小鼠體質(zhì)量明顯降低，而10 mg/kg 5-Fu和不同劑量解毒化瘀方聯(lián)合應(yīng)用小鼠體質(zhì)量與生理鹽水組相比差異不顯著；20 mg/kg 5-Fu組腫瘤抑制率明顯高于10 mg/kg 5-Fu組，不同劑量中藥單獨(dú)給藥均無(wú)明顯抗腫瘤作用，但是不同劑量中藥聯(lián)合10 mg/kg 5-Fu用藥后腫瘤抑制率明顯高于20 mg/kg 5-Fu組，其中中藥低劑量聯(lián)合5-Fu效果更好，呈明顯的增效作用，這可能與低濃度藥液小鼠吸收更好有關(guān)。10 mg/kg 5-Fu組和20 mg/kg 5-Fu組小鼠胸腺指數(shù)均顯著降低，表明5-Fu對(duì)胸腺具有明顯的毒害作用；不同劑量中藥聯(lián)合5-Fu組，小鼠胸腺指數(shù)略高于相同劑量的5-Fu組但差異不明顯，證明中藥聯(lián)合給藥對(duì)5-Fu造成的小鼠胸腺損害具有一定的緩解作用，提示在抗腫瘤過(guò)程中解毒化瘀方有減輕5-Fu對(duì)胸腺等免疫器官損害作用的趨勢(shì)；此外，2 400 mg/kg中藥組小鼠胸腺指數(shù)明顯增高，進(jìn)一步證明解毒化瘀方可提高免疫活性。對(duì)小鼠脾臟指數(shù)的觀察發(fā)現(xiàn)，20 mg/kg 5-Fu組脾臟指數(shù)明顯降低，而不同劑量中藥組和不同劑量中藥聯(lián)合5-Fu組脾臟指數(shù)與生理鹽水組比較差異不明顯，可見(jiàn)解毒化瘀方對(duì)脾臟指數(shù)影響不明顯。

綜上所述，解毒化瘀方單獨(dú)使用對(duì)S180荷瘤小鼠腫瘤生長(zhǎng)無(wú)抑制作用，與5-Fu聯(lián)合使用具有明顯抑制腫瘤生長(zhǎng)的作用，并可明顯降低5-Fu對(duì)免疫器官的毒害作用，為該中藥組方與化療藥物的聯(lián)合應(yīng)用提供了理論支持。但該中藥組方能否降低5-Fu所致的骨髓抑制作用及其增效減毒作用機(jī)制尚不明確，有待進(jìn)一步研究。