陸夢圓 田莎莎

浙江中醫(yī)藥大學(xué)藥學(xué)院，浙江 杭州 311400

野馬追為菊科植物輪葉澤蘭 (EupatoriumlindleyanumDC.)的干燥地上部分，又名白鼓釘、化食草、毛澤蘭。野馬追藥用資源分布廣泛，除新疆外全國各地均有分布，主要產(chǎn)于江蘇、甘肅、山東、湖南等，道地產(chǎn)區(qū)為江蘇盱眙，多為野生，有少量栽培[1-2]。據(jù) 2015 年版《中國藥典》記載：本品味苦、性平，歸肺經(jīng)，主治痰多咳嗽氣喘、高血壓、慢性氣管炎、支氣管炎等，其枝葉入藥有解表祛濕、和中化濕之效，主治勞傷咳嗽、無名腫痛等[3-4]。臨床上應(yīng)用的制劑品種現(xiàn)有野馬追片、顆粒劑、糖漿劑等[5]。近年來，隨著野馬追的化學(xué)成分及藥理活性等方面研究的開展，科研工作者發(fā)現(xiàn)其活性成分豐富，其有效部位及單體在抗腫瘤、抗炎、呼吸系統(tǒng)、心血管系統(tǒng)等方面顯示出重要的藥用價值。本文就近年來野馬追化學(xué)成分、藥理活性的研究成果進(jìn)行綜述。

1 化學(xué)成分

目前為止，國內(nèi)外已對中藥野馬追的化學(xué)成分進(jìn)行了比較系統(tǒng)的研究，發(fā)現(xiàn)主要為倍半萜內(nèi)酯類、黃酮類、揮發(fā)油、甾體類、有機(jī)酸等，此外還含有二萜類、三萜類、微量元素、氨基酸及一些其他成分。

1.1 倍半萜內(nèi)酯類 倍半萜內(nèi)酯類是野馬追中最重要的活性成分，主要包括愈創(chuàng)木烷型、吉馬烷型、桉烷型、杜松烷型，其中，以吉馬烷型和愈創(chuàng)木烷型居多。1979年，Ito K等[6]首次從中藥野馬追中分離出了4個吉馬烷型化合物：Eupalinin A，Eupalinin B，Eupalinin C，Eupalinin D。隨后，Huo J等[7-8]從野馬追全草中分離得到13個愈創(chuàng)木烷型、7個吉馬烷型和1個桉烷型倍半萜內(nèi)酯。楊念云等[9-11]從野馬追地上全草中得到Eupalinolide A，Eupalinolide B，Eupalinolide C，Eupalinolide D，Eupalinolide E等9個吉馬烷型倍半萜內(nèi)酯類化合物；Ye G等[12]于2008年從野馬追全草的95%乙醇提取物中分離得到了1個杜松烷型倍半萜內(nèi)酯：Eupalinilide M；Yan G、吳雙慶等[13-14]于2012年從野馬追乙醇提取物中分離得到了7個吉馬烷型倍半萜內(nèi)酯：3β-hydroxy-8β-[4′-hydroxytigloyloxy]-costunolide，Eupalinolide F，Eupalinolide G，Eupalinolide H，Eupalinolide I，Eupalinolide J，Eupalinolide K；2016～2017年，仲歡歡、Yang B等[15-16]從中分離出了2個吉馬烷型倍半萜內(nèi)酯：Eupalinolide L，Eupalinolide M和1個新的吉馬烷型倍半萜內(nèi)酯類：Eupalinolide O。

1.2 黃酮類 黃酮類化合物在植物界中廣泛分布，已發(fā)現(xiàn)的天然黃酮類化合物多數(shù)具有較強(qiáng)的生物活性，研究發(fā)現(xiàn)野馬追中有不少黃酮類化合物。楊念云等[17]對野馬追地上全草進(jìn)行化學(xué)成分研究，從中發(fā)現(xiàn)一個黃酮類化合物：槲皮素(quceritin)。錢士輝等[18]從野馬追中分離得到棕矢車菊素 (jaceosidin)、山柰酚(kaempferol)、黃芪苷(astragalin)、三葉豆苷(trifolin)、金絲桃苷(hy persoide)。肖晶等[19]用 95%乙醇做夾帶劑將野馬追藥材進(jìn)行CO2超臨界萃取，得到CO2萃取物，從中分離出澤蘭素(euparin)、山柰素(kaempferide)和蘆丁(Rutin)。Wu S等[20]從野馬追乙酸乙酯萃取物中分離鑒定出了澤蘭葉黃素(nepetin)、澤蘭黃素(eupatrin)、木犀草素(luteolin)、異槲皮苷(isoquerecitrin)、線薊素(cirsiliol)、蒙花苷(linarin)。另外，褚純雋[21]從野馬追中分離得到5,8,4′-三羥基-7,3′-二甲氧基黃酮。

1.3 揮發(fā)油 肖晶等[22]采用氣相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用儀對產(chǎn)自江蘇的野馬追全草揮發(fā)油的化學(xué)成分進(jìn)行了分析鑒定，發(fā)現(xiàn)了41種化學(xué)成分，主要成分為石竹烯內(nèi)脂、β-蒎烯和棕櫚酸。陳健和姚成[23-24]采用氣相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用技術(shù)對野馬追花蕾揮發(fā)油的化學(xué)組成進(jìn)行了分析，從中鑒定出了23種成分。

1.4 二萜、三萜類 吳雙慶[14]利用硅膠、ODS，Sephadex LH-20、重結(jié)晶、制備高效液相色譜等分離方法對野馬追的80%乙醇提取物進(jìn)行了化學(xué)成分分離鑒定，從中分離得到了3個二萜類化合物。楊念云等[9-17]應(yīng)用多種柱層析法分離野馬追的化學(xué)成分，并采用波譜學(xué)分析法進(jìn)行結(jié)構(gòu)鑒定，從野馬追地上全草中得到蒲公英甾醇乙酸酯(taraxasterol acetate)、偽蒲公英甾醇(Ψ-taraxasterol)、蒲公英甾醇棕櫚酸酯(taraxasterol palmitate)。肖晶等[19]從野馬追藥材CO2萃取物中分離出齊墩果烷醋酸酯(pulcherryl acetate)。 Wu S等[20]從野馬追乙酸乙酯萃取物中分離鑒定出了偽蒲公英甾醇乙酸酯(pseudotaraxasteryl acetate)。

1.5 甾體類 楊念云等[17]通過對野馬追地上全草進(jìn)行提取分離、結(jié)構(gòu)鑒定，從野馬追地上全草中得到β-谷甾醇(β-sitosterol)和胡蘿卜苷(daucosterol)。陳健等[25]用乙醇提取中藥野馬追中的有效成分，從中鑒定出了麥角甾烷-4,4-二甲基-6,22,24-三烯、5-烯-3-豆甾烷-3-乙酸酯。

1.6 有機(jī)酸 有機(jī)酸是分子結(jié)構(gòu)中含有羧基的化合物，一般認(rèn)為脂肪族有機(jī)酸無特殊生物活性，但有些特殊的有機(jī)酸是某些中草藥的有效成分。迄今為止，在野馬追中發(fā)現(xiàn)的有機(jī)酸有：正十六烷酸、咖啡酸、正十八酸、丁酸、正二十八烷酸和香草酸[9,17,20,25]。

1.7 微量元素 研究發(fā)現(xiàn)野馬追中含有K，Ca，Mg，F(xiàn)e，Sr，Zn，Cu，Al，Si，Mn，Ni，Cr等微量元素，而對生物體有害的重金屬元素Pb，Cr，Cd，As，Hg等含量很少。其中，全草中Ca含量最高，花蕾中K含量最高，幼嫩莖葉中礦物質(zhì)元素的含量最高[26-27]。

1.8 氨基酸 陳健等[28]采用柱前衍生反相高效液相色譜法測定了野馬追莖葉及其花蕾中的總氨基酸和游離氨基酸，發(fā)現(xiàn)野馬追莖葉及其花蕾中含17種氨基酸：天冬氨酸、谷氨酸、絲氨酸、組氨酸、甘氨酸、蘇氨酸、精氨酸、丙氨酸、酪氨酸、半胱氨酸、纈氨酸、蛋氨酸、苯丙氨酸、異亮氨酸、亮氨酸、賴氨酸、脯氨酸，其中7種為人體必需氨基酸。莖葉及花蕾中總氨基酸的含量分別為2.40%和6.51%，游離氨基酸含量分別為0.185%和0.508%，半胱氨酸和谷氨酸含量較高。

1.9 其他成分 楊念云等[9]還從野馬追地上全草中發(fā)現(xiàn)了腺苷。Wu S等[20]通過波譜分析和化學(xué)方法從野馬追乙酸乙酯萃取物鑒定出了東莨菪素(scopoletin)和6,7-二甲基香豆素(6, 7-dimethylesculetin)。仲歡歡[15]2017年研究野馬追抗炎成分時，首次從水煎液中分離出7種化學(xué)成分：浙貝素、梣皮樹脂醇、salicifoliol、5-羥基-3，4-二甲基-5-戊基-2 (5H) -呋喃酮、3- (2-羥基-4-甲基丁基) -4-甲氧基苯乙酮、松柏醇、對羥基苯甲醛，其中浙貝素、梣皮樹脂醇、salicifoliol具有抗炎活性。

2 藥理作用

目前發(fā)現(xiàn)野馬追可止咳、祛痰、平喘，對急性肺損傷、循環(huán)系統(tǒng)等疾病具有較好的療效，同時可降血壓、降血脂、預(yù)防動脈粥樣硬化，具有抗腫瘤、抗炎、抗菌等藥理作用。

2.1 抗呼吸系統(tǒng)感染 中藥野馬追抗呼吸系統(tǒng)感染是多成分、多途徑、多靶點(diǎn)協(xié)同作用的結(jié)果[29]。據(jù)報道野馬追糖漿濃縮液對濃氨水所致小鼠咳嗽和枸櫞酸所致豚鼠咳嗽有明顯止咳、祛痰作用，對致喘液所引起的哮喘有明顯的平喘作用[30]。唐春萍等[31]通過研究發(fā)現(xiàn)野馬追對豚鼠離體氣管平滑肌的靜息張力和乙酰膽堿(acetylcholine, ACH)、組胺(Histamine, His)、氯化鈣、氯化鉀、氯化鋇所致的收縮都有抑制作用。江舟等[32]通過靜脈注射油酸復(fù)制大鼠急性肺損傷模型，發(fā)現(xiàn)野馬追給藥組的炎癥因子腫瘤壞死因子(Tumor Necrosis Factor-α, TNF-α)、白細(xì)胞介素-6(interleukin-6, IL-6)、白細(xì)胞介素-8(interleukin-8, IL-8)和丙二醛(Malondialdehyde, MDA)含量與模型組相比降低，而血氧分壓和超氧化物歧化酶((Superoxide Dismutase, SOD)含量高于模型組，說明野馬追對急性肺損傷有明顯的保護(hù)作用。褚純雋、李顯倫等[33-36]發(fā)現(xiàn)野馬追醇提物、水層、氯仿、乙酸乙酯、正丁醇層、倍半萜部位和野馬追黃酮部位均能降低脂多糖誘導(dǎo)的急性肺損傷小鼠的炎癥因子TNF-α、I L-6水平，提高SOD活性并抑制髓過氧化物酶(myeloperoxidase, MPO)活性，有效地發(fā)揮了肺損傷保護(hù)作用。臨床研究發(fā)現(xiàn)野馬追糖漿具有較好的增強(qiáng)免疫功能、抗病毒等作用，用于小兒慢性支氣管炎可提高治愈率，且安全性較高[37]。

2.2 對心血管作用 野馬追有降低血壓、調(diào)節(jié)脂質(zhì)代謝紊亂、調(diào)節(jié)血脂水平和預(yù)防動脈粥樣硬化等作用。江濤等[38]用離體大鼠主動脈環(huán)進(jìn)行實(shí)驗(yàn)，發(fā)現(xiàn)野馬追水提物擴(kuò)血管的作用與其抑制外鈣內(nèi)流和內(nèi)鈣釋放密切相關(guān)。陳萬一等[39]發(fā)現(xiàn)野馬追總黃酮可調(diào)節(jié)脂質(zhì)代謝紊亂，其機(jī)制與降低高脂模型大鼠血漿總膽固醇、甘油三酯和低密度脂蛋白-膽固醇水平，升高高密度脂蛋白-膽固醇水平，提高脂代謝相關(guān)酶(卵磷脂膽固醇?；D(zhuǎn)移酶、脂蛋白脂酶和肝脂酶)活性，上調(diào)高脂血癥大鼠肝臟低密度脂蛋白受體水平有關(guān)。王柯靜等[40]用高脂飼料制備高脂血癥大鼠模型，發(fā)現(xiàn)野馬追可調(diào)節(jié)大鼠血脂水平，改善血管內(nèi)皮功能，其機(jī)制與降低血脂水平和血粘度、升高一氧化氮(nitric oxide, NO)含量及血清中SOD活力、降低過氧化脂質(zhì)產(chǎn)物MDA的含量有關(guān)，且有明顯的劑量-效應(yīng)關(guān)系。Zhou, X等[41]通過研究野馬追粗提物對高膽固醇飲食所致家兔高脂血癥及動脈粥樣硬化的預(yù)防作用，發(fā)現(xiàn)野馬追粗提物可通過降低血清總膽固醇、甘油三酯和低密度脂蛋白膽固醇水平，降低C-反應(yīng)蛋白和血管細(xì)胞黏附分子-1的表達(dá)，升高NO水平，抑制兔血管內(nèi)泡沫細(xì)胞的形成并抑制平滑肌細(xì)胞的遷移，預(yù)防高脂血癥和動脈粥樣硬化。遲棟[42]發(fā)現(xiàn)野馬追水煎液對自發(fā)性高血壓大鼠有明顯的降壓作用，其機(jī)制與升高大鼠血清中NO水平、降低血清中內(nèi)皮素和血管緊張素Ⅱ水平有關(guān)。

2.3 抗腫瘤 研究發(fā)現(xiàn)野馬追倍半萜內(nèi)酯類化合物有良好的體外抗腫瘤活性[14]。Yang B等[16,43]發(fā)現(xiàn)從野馬追中分離得到的新的倍半萜內(nèi)酯類物質(zhì)Eupalinolide O通過阻滯細(xì)胞周期于G2/M期、阻斷Akt通路、誘導(dǎo)依賴caspase的細(xì)胞凋亡抑制乳腺癌細(xì)胞MDA-MB-468的生長，并以谷胱甘肽為研究對象，建立了UPLC-MS篩選Michael反應(yīng)受體(Michael Reaction Acceptor, MRA)的方法，利用依賴STAT3的報告系統(tǒng)篩選出能夠抑制STAT3的MRAs，分離得到6個倍半萜內(nèi)酯，其中Eupalinolide J被鑒定為能降低STAT3熒光素酶活性的MRA。初步活性評價表明，Eupalinolide J能抑制三陰性乳腺癌細(xì)胞的活性，是一種典型的天然MRA，它對STAT3活性有明顯的抑制作用，對三陰性乳腺癌(triple negative breast cancer, TNBC)細(xì)胞有潛在的細(xì)胞毒活性。Tian S等[44]發(fā)現(xiàn)一種從野馬追中分離出來新的倍半萜內(nèi)酯類有效部位F1012-2通過激活細(xì)胞自噬，內(nèi)源性和外源性依賴caspase途徑誘導(dǎo)細(xì)胞凋亡，阻滯細(xì)胞周期于G2/M期，對三陰性乳腺癌細(xì)胞的生長有明顯的抑制作用，且對體內(nèi)移植瘤具有潛在的抗腫瘤作用，F(xiàn)1012-2在體外和體內(nèi)通過多種信號途徑抑制細(xì)胞生長，可能是治療三陰性乳腺癌的一種潛在的天然活性成分。

2.4 抗炎 南京藥學(xué)院野馬追科研協(xié)作組臨床小組經(jīng)藥理試驗(yàn)，發(fā)現(xiàn)野馬追有增加白細(xì)胞的作用[45]。褚純雋[33]經(jīng)補(bǔ)體經(jīng)典途徑測試發(fā)現(xiàn)野馬追中倍半萜、二萜和黃酮化合物及三類化合物的富集部位有良好的抗補(bǔ)體活性，其中，倍半萜內(nèi)酯類可以作為一種新型的天然抗炎藥。Wang F等[46]通過體內(nèi)實(shí)驗(yàn)發(fā)現(xiàn)野馬追倍半萜成分減少了由二甲苯誘導(dǎo)的小鼠耳水腫。在體外實(shí)驗(yàn)中，野馬追倍半萜成分通過降低TNF-α及IL-6水平在脂多糖激活的小鼠巨噬細(xì)胞RAW 264.7中顯示出強(qiáng)大的抗炎活性。

2.5 抗菌和抗病毒 研究發(fā)現(xiàn)傳統(tǒng)中藥野馬追提取物的抗菌譜廣，對所有革蘭氏陽性菌和革蘭氏陰性菌均有較好的抑菌效果，且呈顯著的量效關(guān)系。野馬追注射液曾被用于治療鉤端螺旋體病32例，并取得滿意療效[47]。周遠(yuǎn)大等[30]通過體外抑菌試驗(yàn)，發(fā)現(xiàn)野馬追糖漿濃縮液對革蘭氏陽性和陰性菌及臨床分離的白色念株球菌有一定的抗菌作用。Ji Li-Lian等[48]的研究表明，野馬追提取物還可作為天然防腐劑來保存食品，通過水煎法得到的野馬追提取物對供試菌株的最低抑菌濃度和最低殺菌濃度為0.4～ 0.8 mg·mL-1。中國疾病預(yù)防控制中心病毒病預(yù)防控制研究所病毒資源中心提供的藥效試驗(yàn)報告證實(shí)野馬追糖漿具有預(yù)防冠狀病毒、抗甲型流感病毒和乙型流感病毒(同屬 RNA 型病毒)的功效[49]。另有文獻(xiàn)[50-51]報道復(fù)方野馬追膠囊體外能抑制流感病毒，體內(nèi)則能明顯延長流感病毒和副流感病毒感染小鼠的生存時間，顯著降低肺指數(shù)，減輕肺組織病變程度。此外復(fù)方野馬追膠囊還有明顯的體外抗呼吸道合胞病毒感染的作用，同時對呼吸道合胞病毒感染后引起的白細(xì)胞介素-8釋放也有明顯抑制作用[52]。

2.6 抗氧化 王乃馨等[53]用DPPH自由基分析法測定了超聲提取的野馬追類黃酮清除自由基作用的強(qiáng)弱，評價其抗氧化能力，發(fā)現(xiàn)野馬追類黃酮對DPPH自由基有很強(qiáng)的清除活性且清除率與濃度之間有量效關(guān)系，其DPPH自由基半清除劑量IC50為10.922 μg·mL-1。Yan G等[54]首次研究了野馬追水提物，醇提物，殘?jiān)嵛铮按继嵛锏氖兔?、乙酸乙酯、正丁醇、水餾分的抗氧化活性，并測定了所有提取物和餾分的總酚含量、DPPH自由基清除活性、超氧自由基清除活性、總還原能力和亞鐵離子螯合活性，發(fā)現(xiàn)各提取物和組分均表現(xiàn)出不同程度的抗氧化活性，結(jié)果表明野馬追提取物可能是一種潛在的天然抗氧化成分的有效來源。為開發(fā)天然高效、安全無毒、性能穩(wěn)定的天然防腐劑。李姿瑾和紀(jì)麗蓮[55]以野馬追干制品為原料制得粗提物，與現(xiàn)用食品防腐劑二丁基羥基甲苯(Butylated Hydroxytoluene, BHT)和丁基羥基茴香醚(Butyl Hydroxy Anisd, BHA)比較抗氧化活性，研究發(fā)現(xiàn)粗提物表現(xiàn)出較強(qiáng)的抗氧化活性，但不同方法粗提物的具體抗氧化活性指標(biāo)差異顯著。

2.7 其他作用 野馬追對紫外線誘導(dǎo)的皮膚損傷和黑色素的產(chǎn)生具有抑制作用。Yamashita Y等[56-57]發(fā)現(xiàn)熱休克蛋白70(Heat Shock Protein 70, HSP 70)的表達(dá)抑制了黑色素的產(chǎn)生，他們從中草藥中尋找HSP 70的誘導(dǎo)劑，并從中篩選出了野馬追的乙醇提取物，進(jìn)一步研究發(fā)現(xiàn)野馬追提取物通過HSP 70依賴性和HSP 70非依賴性機(jī)制抑制酪氨酸酶和黑色素的表達(dá)，野馬追倍半萜內(nèi)酯類成分Eupalinolide A和B能協(xié)同應(yīng)激源誘導(dǎo)HSP 70的表達(dá)，EA或EB預(yù)處理可抑制黑色素的產(chǎn)生和應(yīng)激誘導(dǎo)的細(xì)胞凋亡。在體內(nèi)，經(jīng)皮注射EB可誘導(dǎo)HSP 70的表達(dá)，并抑制UVB輻射引起的皮膚損傷、炎癥反應(yīng)和黑色素生成。

3 副作用

南京藥學(xué)院野馬追科研協(xié)作組臨床小組經(jīng)藥理試驗(yàn)發(fā)現(xiàn)野馬追副反應(yīng)主要表現(xiàn)在消化道，如偶有上腹部不適或惡心、口干，但癥狀均較輕微[45]。周遠(yuǎn)大等[58]選用大、小鼠進(jìn)行自主活動、激怒反應(yīng)、爬桿運(yùn)動、心血管與呼吸系統(tǒng)以及急、慢性毒性試驗(yàn)，發(fā)現(xiàn)野馬追對大、小鼠自主活動、激怒反應(yīng)、爬竿運(yùn)動、心血管與呼吸系統(tǒng)均無明顯影響，慢性毒性試驗(yàn)中未見明顯毒性發(fā)生，說明野馬追對鼠正常生理活動和各組織器官無明顯影響。

4 結(jié)語

目前研究發(fā)現(xiàn)野馬追主要含有倍半萜內(nèi)酯類、黃酮類、揮發(fā)油、二萜類、三萜類、甾體類、氨基酸、微量元素、有機(jī)酸等成分，藥理作用廣泛，對呼吸系統(tǒng)、循環(huán)系統(tǒng)疾病有較好的療效，同時具有抗菌、抗炎、抗氧化、抗腫瘤等作用。臨床上野馬追被制成片劑、糖漿劑、顆粒劑、膠囊劑等，用于祛痰、止咳、平喘和降血壓。

從國內(nèi)外文獻(xiàn)中可以看出野馬追具有多種藥理活性，但其具體的作用機(jī)制還未被闡明，臨床應(yīng)用還僅僅依賴于傳統(tǒng)藥效，這使得野馬追的藥用價值受到限制。因此，對野馬追的進(jìn)一步開發(fā)與研究具有重要的現(xiàn)實(shí)意義。本文對近年來國內(nèi)外有關(guān)野馬追化學(xué)成分和藥理作用的研究成果進(jìn)行了較為系統(tǒng)的總結(jié)，希望能為廣大科研工作者提供進(jìn)一步研究野馬追的理論參考依據(jù)，使其更好地發(fā)揮藥用價值。