歐珠朗杰 米瑪潘多 孫澤韌

摘 要 以梭砂貝母鱗莖為外植體，研究梭砂貝母組織培養(yǎng)中不同種類和濃度的植物生長(zhǎng)調(diào)節(jié)劑對(duì)愈傷組織的誘導(dǎo)效果。從多個(gè)濃度梯度組合中探尋出適合梭砂貝母組織生長(zhǎng)愈傷的最佳種類和濃度。結(jié)果表明，適宜誘導(dǎo)梭砂貝母鱗莖的植物生長(zhǎng)調(diào)節(jié)劑組合及濃度為MS+NAA（0.5 mg·L-1）+6-BA（1.5 mg·L-1），這一結(jié)果為梭砂貝母組培擴(kuò)繁工作提供了技術(shù)參數(shù)。

關(guān)鍵詞 梭沙貝母;鱗莖;植物生長(zhǎng)調(diào)節(jié)劑;組織培養(yǎng)

中圖分類號(hào)：S 文獻(xiàn)標(biāo)志碼：B DOI：10.19415/j.cnki.1673-890x.2019.27.067

梭砂貝母（Fritillaria delavayi Franch.）屬百合科（Liliaceae）貝母屬（Fritillaria），藏語(yǔ)為阿皮卡，是百合科多年生草本植物[1]。梭砂貝母又名爐貝，鱗莖外表白色或淺黃棕色，有些具棕色斑點(diǎn)。梭砂貝母在西藏有廣泛出產(chǎn)，四川省西部、云南省西北部和青海省南部也均有出產(chǎn)[2]，具有潤(rùn)肺清熱、化痰等功效。梭砂貝母價(jià)值高、藥效好，但其繁殖系數(shù)低、生長(zhǎng)環(huán)境特殊、分布分散。隨著市場(chǎng)上對(duì)梭砂貝母的需求量增大，其生長(zhǎng)環(huán)境和種群自然更新遭到了破壞，致使梭砂貝母資源陷入?yún)T乏[3]。

為了縮短生長(zhǎng)周期，提高無(wú)性繁殖系數(shù)，加強(qiáng)對(duì)野生資源的保護(hù)和利用，應(yīng)從外植體的消毒方式、植物生長(zhǎng)調(diào)節(jié)劑的組合及濃度配比等方面探索梭砂貝母的無(wú)性繁殖技術(shù)[4]。這一研究有利于梭砂貝母資源及其棲息地的環(huán)境保護(hù)，能夠有效緩解資源利用與環(huán)境保護(hù)的矛盾，對(duì)解決藥材供需矛盾和保護(hù)瀕危藏藥材種質(zhì)資源具有一定的現(xiàn)實(shí)意義[5]。

1 材料與方法

1.1 實(shí)驗(yàn)材料

2019年8月，在西藏山南地區(qū)扎囊縣念薩村海拔4 500 m的高山滑坡巖縫中采集梭砂貝母。從其鱗莖中選取無(wú)病害乳白色鱗莖進(jìn)行實(shí)驗(yàn)室無(wú)菌處理，并切成適宜大小的鱗莖小塊接種于不同種類、不同濃度植物生長(zhǎng)調(diào)劑的培養(yǎng)基上進(jìn)行調(diào)控培養(yǎng)。

1.2 實(shí)驗(yàn)方法

1.2.1 植物生長(zhǎng)調(diào)節(jié)劑的選擇與組合配比設(shè)計(jì)

以MS培養(yǎng)基為基本培養(yǎng)基加入30 g·L-1的蔗糖、

7 g·L-1的瓊脂，pH指調(diào)至5.8，添加不同濃度的6-芐基氨基嘌呤（6-BA）、萘乙酸（NAA）[6]，以備外植體的接種。如表1所示，對(duì)6-BA和NAA分別設(shè)置4個(gè)梯度、16個(gè)組合進(jìn)行外植體接種。

1.2.2 外植體的選擇與消毒

選取外植體的最適宜時(shí)間為每年夏末，以梭砂貝母花謝結(jié)果時(shí)的鱗莖作為外植體效果較好，其中尤以新鱗莖最佳[7]。應(yīng)先刮除鱗片上的栓皮和褐色部分，以乳白色為佳，再用自來(lái)水長(zhǎng)時(shí)間沖洗干凈并用適宜的消毒液進(jìn)行消毒[8]。

在接種之前用75%酒精擦洗超凈工作臺(tái)，鱗莖整體充分清洗后移入超凈工作臺(tái)，在滅菌的濾紙上切成0.5 cm3大小的接種塊[9]，用75%酒精浸泡材料30 s，用0.1%氯化汞浸泡10 min，再轉(zhuǎn)入到無(wú)菌水中漂洗4次后取出材料放到無(wú)菌紙上吸干用于接種[5]。

1.2.3 滅菌

培養(yǎng)基和接種器具在121 ℃、0.15×106 MPa的高壓蒸汽滅菌鍋中滅菌20 min。滅菌結(jié)束冷卻后取出培養(yǎng)基并放置在培養(yǎng)箱中，48 h后無(wú)污染的用于接種[10]。

1.2.4 接種

接種前30 min打開超凈工作臺(tái)紫外燈，滅菌的培養(yǎng)瓶和接種器具放入超凈工作臺(tái)內(nèi)，用75%酒精擦拭工作臺(tái)桌面及內(nèi)壁，30 min后關(guān)閉紫外燈，把接種用外植體移入超凈工作臺(tái)，在酒精燈火焰上方嚴(yán)格規(guī)范操作，直至切好的外植體植入培養(yǎng)瓶中，一般一個(gè)培養(yǎng)瓶植入3～4個(gè)適當(dāng)大小的外植體。

1.2.5 培養(yǎng)

接種后的培養(yǎng)基在溫度為22 ℃、空氣相對(duì)濕度為50%～60%的光照培養(yǎng)箱內(nèi)培養(yǎng)25 d，每天光照時(shí)間為10 h、光照強(qiáng)度為1 500 Lx[11]。

2 結(jié)果與分析

在添加了不同濃度植物激素的MS組合培養(yǎng)基上接種培養(yǎng)梭砂貝母鱗莖，其愈傷組織的誘導(dǎo)結(jié)果存在明顯差異，結(jié)果如表2所示。Aa、Ba、Bb、Bc、Cb、Cc、Cd、Da、Db、Dc、Dd組合均不能形成愈傷組織，Ab、Ad、Bd、Ca組合能夠誘導(dǎo)出少量的愈傷組織，Ac組合能形成豐富愈傷組織。因此，適合誘導(dǎo)梭砂貝母鱗莖愈傷組織的培養(yǎng)基為MS+NAA（0.5 mg·L-1）+6-BA（1.5 mg·L-1），其愈傷組織及分化幼苗如圖1所示。

3 結(jié)論

本研究以梭砂貝母的鱗莖為外植體，研究6-芐基氨基嘌呤（6-BA）和萘乙酸（NAA）的不同濃度組合對(duì)愈傷組織的誘導(dǎo)效果，為克服梭砂貝母組織培養(yǎng)與擴(kuò)繁試驗(yàn)的盲目性提供了依據(jù)，并為解決梭砂貝母原料的供求矛盾及其資源的合理開發(fā)和保護(hù)做出了基礎(chǔ)性工作。

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（責(zé)任編輯：趙中正）