羅麗

（連云港師范高等?？茖W(xué)校 海洋港口學(xué)院，江蘇連云港 222000）

許多研究和檢測(cè)都需要確定所采集樣品中細(xì)菌的數(shù)量，最常使用的就是細(xì)菌平板計(jì)數(shù)法。而當(dāng)中最重要的操作環(huán)節(jié)就是需要對(duì)樣品進(jìn)行逐級(jí)稀釋，直到稀釋的程度可以在平板上長出25～250個(gè)單菌落。不在此范圍之中，太少則不能滿足統(tǒng)計(jì)分析要求，超過則使得菌落密集不利于單個(gè)菌落的區(qū)分和計(jì)數(shù)?；炀坎计桨宀捎玫南♂尫秶鄶?shù)在10-3～10-8范圍，每個(gè)稀釋度做兩個(gè)重復(fù)以保障更高的精度。下面將使用3個(gè)例子介紹不同的稀釋操作[1-3]情況下該如何進(jìn)行正確的計(jì)算。

1 實(shí)驗(yàn)

1.1 常規(guī)10倍梯度稀釋法的計(jì)算

根據(jù)圖1展示的稀釋操作，計(jì)算最初樣品中的細(xì)菌量。

說明：1 mL表示1mL上一管樣品溶液，9 mL表示9mL生理鹽水

圖1 常規(guī)10倍梯度稀釋圖例

帶少量溶質(zhì)（樣品）的溶液常會(huì)用一定體積或重量的溶質(zhì)與稀釋液終濃度的比率來表示。如圖1中取1體積（mL）樣品添加到9體積（mL）溶劑中，得到1/10稀釋比率溶液，經(jīng)過4次稀釋，最后1管的中樣品的最終稀釋率為：

平板中涂布的是1mL的1/10000稀釋液，生長的單菌落數(shù)是138個(gè)，則最初的樣品中的細(xì)菌數(shù)為1.38×106個(gè)。計(jì)算方法如下：

細(xì)菌數(shù)/mL=最終平板菌落數(shù)/稀釋率=138/10-4=1.38×106

1.2 100倍梯度稀釋法的計(jì)算

根據(jù)圖2展示的稀釋操作，計(jì)算最初樣品中的細(xì)菌量。

圖2 100倍梯度稀釋圖例

如圖2中取0.1體積（mL）樣品添加到9.9體積（mL）溶劑中，得到1/100稀釋比率溶液，經(jīng)過3次稀釋，最后1管的中樣品的最終稀釋率為：

平板中涂布的是0.1 mL的1/10-6稀釋液，生長的單菌落數(shù)是58個(gè)，則最初的樣品中的細(xì)菌數(shù)為5.8×108個(gè)。計(jì)算方法如下：

細(xì)菌數(shù)/mL=（最終平板菌落數(shù)/稀釋率）÷涂布體積=（58/10-6）÷0.1 mL=5.88

1.3 無規(guī)律梯度稀釋法的計(jì)算

根據(jù)圖3展示的稀釋操作，計(jì)算最初樣品中的細(xì)菌量。

如圖3中取1體積（mL）樣品添加到9體積（mL）溶劑中，得到1/10稀釋比率溶液，第二次取3體積加入到27體積溶劑中，仍然得到1/10稀釋比率溶液。第三次1體積加入9體積溶劑中，得到的還是1/10稀釋比率。第四次取0.5體積加入4.5體積溶劑中；第五次2體積加入到8體積溶劑中，第六次1體積加入到9體積溶劑中，均得到的溶液稀釋比率為1/10。所以雖然操作中采用各種體積取樣稀釋，其實(shí)得到的都是相同的稀釋比率。經(jīng)過6次稀釋，最后1管的中樣品的最終稀釋率為：

圖3 無規(guī)律梯度稀釋圖例

平板中涂布的是0.01 mL的1/10-6稀釋液，生長的單菌落數(shù)是96個(gè)，則最初的樣品中的細(xì)菌數(shù)為9.6×109個(gè)。計(jì)算方法如下：

細(xì)菌數(shù)/mL=（最終平板菌落數(shù)/稀釋率）÷涂布體積=（96/10-6）÷0.01mL=9.6×109

2 結(jié)論

稀釋問題是微生物課程中必不可少的部分[4]，也是學(xué)生易計(jì)算錯(cuò)誤的地方。通過在課堂中展開不同稀釋操作實(shí)例計(jì)算，可以幫助學(xué)生理解樣品的多步稀釋計(jì)算問題。教師在開展教學(xué)過程中應(yīng)根據(jù)教學(xué)內(nèi)容、教學(xué)對(duì)象安排稀釋問題的講解并保障學(xué)生充足的課堂計(jì)算練習(xí)，從而切實(shí)地幫助學(xué)生掌握處理樣品的稀釋問題并能正確計(jì)算。