何彥春，李旭蓉，李 珊，韓慶彥，郭慧琳，滾雙寶

（1.張掖市動(dòng)物疫病預(yù)防控制中心，甘肅 張掖 734000；2.甘肅省動(dòng)物疫病預(yù)防控制中心，甘肅蘭州730046；3.甘肅農(nóng)業(yè)大學(xué)，甘肅蘭州730000）

禽流感是由A 型流感病毒引起的禽類傳染病。H5、H7 亞型高致病性流感感染家禽后除引起家禽的高致病性和高死亡率外，還會(huì)感染人類，對(duì)公共衛(wèi)生安全構(gòu)成嚴(yán)重威脅。根據(jù)H7 流感在我國(guó)家禽中的流行態(tài)勢(shì)，為進(jìn)一步做好高致病性禽流感防控工作，保障養(yǎng)殖業(yè)生產(chǎn)安全和公共衛(wèi)生安全，農(nóng)業(yè)部適時(shí)調(diào)整高致病性禽流感免疫方案，下發(fā)了《農(nóng)業(yè)部關(guān)于切實(shí)做好全國(guó)高致病性禽流感秋季免疫工作的通知》（農(nóng)醫(yī)發(fā)〔2017〕24號(hào)）[1]，要求在2017年秋季統(tǒng)一用重組禽流感病毒（H5+H7）二價(jià)滅活疫苗（H5N1 Re-8 株+H7N9 H7-Re1 株）替代重組禽流感病毒H5 二價(jià)或三價(jià)滅活疫苗，對(duì)家禽實(shí)施免疫。為了切實(shí)掌握禽流感病毒（H5+H7）二價(jià)滅活疫苗的免疫效果，張掖市動(dòng)物疫病預(yù)防控制中心開展了小群免疫試驗(yàn)和2017年秋季、2018年春、秋季強(qiáng)制免疫后的抗體抽樣監(jiān)測(cè)，為高致病性禽流感預(yù)防工作提供了理論依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 小群試驗(yàn)

1.1.1 試驗(yàn)雞選擇

選擇30日齡京紅1 號(hào)蛋雛雞50 只。

1.1.2 所用疫苗

重組禽流感病毒（H5+H7）二價(jià)滅活苗（H5N1 Re-8 株+H7N9 H7-Re1 株），由乾元浩生物股份有限公司鄭州生物藥廠生產(chǎn)，批號(hào)：2017020。

1.1.3 免疫方法和和血樣采集

首次免疫前逐只翅靜脈采血，采用頸部皮下注射方法免疫，每只0.3 mL。免疫后21 d，逐只翅靜脈采血，并進(jìn)行第二次免疫。第二次免疫采用胸部肌內(nèi)注射，每只0.5 mL。第二次免疫后21 d，再次逐只翅靜脈采血。采集的血樣常規(guī)分離血清被檢。

1.1.4 試驗(yàn)試劑

禽流感病毒H7 亞型血凝抑制試驗(yàn)抗原（H7N9 株）、禽流感病毒H5 亞型血凝抑制試驗(yàn)抗原（Re-8 株）：均由哈爾濱維科生物技術(shù)開發(fā)有限公司生產(chǎn)，批號(hào)分別為：2017007、2017005，有效期均為2年。

1.1.5 抗體水平檢測(cè)方法

按照 《 高致病性禽流感診斷技術(shù)》（GB/T18936—2003）規(guī)定的血凝和血凝抑制試驗(yàn)進(jìn)行抗體檢測(cè)。當(dāng)被檢血清抗體滴度≥4 log2，判為免疫合格。

1.1.6 免疫后不良反應(yīng)的觀察

免疫后定時(shí)觀察試驗(yàn)雞精神狀態(tài)和采食飲水等表現(xiàn)，觀察有無副反應(yīng)發(fā)生。

1.2 全市所有雞群強(qiáng)制免疫后的抗體抽樣監(jiān)測(cè)

1.2.1 強(qiáng)制免疫所用疫苗

由省獸醫(yī)局集中招標(biāo)采購(gòu)的重組禽流感病毒（H5+H7）二 價(jià) 滅 活 苗（H5N1 Re-8 株+H7N9 H7-Re1 株），2017年秋季來自乾元浩生物股份有限公司鄭州生物藥廠，批號(hào)：2017020；2018年春季和秋季均來自廣東永順生物制藥股份有限公司，批號(hào)分別為2018005、2018060。

1.2.2 免疫方法

按照《農(nóng)業(yè)部關(guān)于切實(shí)做好全國(guó)高致病性禽流感秋季免疫工作的通知》（農(nóng)醫(yī)發(fā)〔2017〕24 號(hào)）附件《全國(guó)高致病性禽流感免疫方案》[1]執(zhí)行，頸部皮下或胸部肌注。14～35日齡雞，每只0.3 mL；35日齡以上雞，每只0.5mL，兩次免疫間隔3～4 周。

1.2.3 抽樣時(shí)間及數(shù)量

2017年秋季、2018年春季、2018年秋季集中免疫完成后，在甘州區(qū)、臨澤縣、高臺(tái)縣、山丹縣和民樂縣5 個(gè)縣（區(qū)）的規(guī)模養(yǎng)殖場(chǎng)（戶）中抽樣采集免疫血清，2017 秋季采集480 份，2018年春季采集765 份，2018年秋季采集775 份。

1.2.4 檢測(cè)試劑和檢測(cè)方法

同1.1.3 和1.1.5。

2 結(jié)果

2.1 小群試驗(yàn)結(jié)果

2.1.1 免疫后不良反應(yīng)

經(jīng)持續(xù)觀察，除免疫后當(dāng)天采食量稍有減少外，試驗(yàn)雞再未見免疫后不良反應(yīng)發(fā)生。

2.1.2 免疫前H5、H7 亞型禽流感抗體檢測(cè)結(jié)果

50 只試驗(yàn)雞免疫前H5、H7 亞型禽流感抗體檢測(cè)結(jié)果均＜1 log2

2.1.3 H5 亞型禽流感免疫抗體檢測(cè)結(jié)果

50份被檢血清中，首免疫21 d 后合格37份，合格率為74.00%；二免21 d 后合格50 份，合格率為100.00%。

2.1.4 H7 亞型禽流感免疫抗體檢測(cè)結(jié)果

50份被檢血清中，首免21 d 后合格38 份，合格率為78.00%；二免21 d 后合格50 份，合格率為100.00%。

2.2 強(qiáng)制免疫后的群體抗體抽樣監(jiān)測(cè)結(jié)果

2.2.1 H5 亞型禽流感免疫抗體監(jiān)測(cè)結(jié)果

2017年秋防、2018年春防、2018年秋防后各全市5 縣 （區(qū)）共采集規(guī)模場(chǎng)雞血清各480 份、765 份、775 份，抗體合格各420 份、706 份、725份。合格率分別為87.50%（420/480）、92.29%（706/765）、93.55%（725/775）。

2.2.2 H7 亞型禽流感免疫抗體監(jiān)測(cè)結(jié)果

2017年秋防、2018年春防、2018年秋防后全市5 縣（區(qū)）共采集規(guī)模場(chǎng)雞血清各480 份、765份、775 份，抗體合格各416 份、697 份、702 份。合格率分別為86.67%（416/480）、91.11%（697/765）、90.58%（702/775）。

3 結(jié)論

3.1 小群試驗(yàn)監(jiān)測(cè)結(jié)果表明：禽流感病毒（H5+H7）二價(jià)滅活疫苗 （H5N1 Re-8 株+H7N9 H7-Re1 株）免疫后H5、H7 亞型禽流感免疫抗體合格率均在70%以上，達(dá)到了農(nóng)業(yè)部規(guī)定標(biāo)準(zhǔn)。首次免疫后21 d ，H5 亞型禽流感抗體合格率為74.00%，H7 亞型禽流感抗體合格率為78.00%；二次免疫后21 d，H5 和H7 亞型禽流感抗體合格率均達(dá)到100.00%。

3.2 張掖市2017年秋防結(jié)束后H5、H7 免疫抗體合格率分別達(dá)到了87.50%和86.67%；2018年春防結(jié)束后H5 和H7 亞型禽流感抗體合格率分別達(dá)到了92.29%和91.11%；2018年秋防結(jié)束后H5和H7 亞型禽流感抗體合格率均分別達(dá)到了93.55%和90.58%。總體監(jiān)測(cè)結(jié)果與楊澤林等[2]報(bào)道的結(jié)果相近。從一年半的集中免疫抗體監(jiān)測(cè)結(jié)果來看，使用“H5+H7”二價(jià)滅活疫苗免疫效果確實(shí)，但還存在個(gè)別養(yǎng)殖場(chǎng)戶免疫抗體不達(dá)標(biāo)的問題。針對(duì)部分縣區(qū)的個(gè)別養(yǎng)殖場(chǎng)仍存在免疫抗體水平不達(dá)標(biāo)的情況，應(yīng)及時(shí)查找原因，采取及時(shí)補(bǔ)免、加強(qiáng)監(jiān)測(cè)等措施，確保免疫合格率保持較高水平。

3.3 2017年4月，張掖市衛(wèi)生部門在全市不同家禽交易市場(chǎng)中應(yīng)用PCR 方法對(duì)外環(huán)境樣品 （糞便、飲水、燙雞水、雞籠擦拭物等）開展抽樣監(jiān)測(cè)，檢出陽性樣品若干份。隨后有個(gè)別密切接觸人員發(fā)生H7N9 流感感染。接到衛(wèi)生部門通報(bào)后，全市動(dòng)物疫控部門立即在全市規(guī)模養(yǎng)禽場(chǎng)、屠宰交易戶、散養(yǎng)戶開展了H7N9 流感抗體檢測(cè)。在113 個(gè)規(guī)模養(yǎng)禽場(chǎng)的4639 份血樣中檢出血清學(xué)陽性樣品25 份；87 個(gè)屠宰交易戶1108 份雞血樣檢出血清學(xué)陽性樣品34 份；187 個(gè)散養(yǎng)戶的3402 份雞血樣未檢出血清學(xué)陽性樣品。對(duì)檢出血清學(xué)陽性樣品的雞群及時(shí)進(jìn)行了撲殺消毒等綜合性防控措施。2017年秋季全市用重組禽流感病毒（H5+H7）二價(jià)滅活苗免疫以來，全市在家禽交易市場(chǎng)和養(yǎng)禽場(chǎng)中再未檢出H7N9 流感病原學(xué)陽性樣品，再未發(fā)生人員感染情況。這充分說明，重組禽流感病毒（H5+H7）二價(jià)滅活苗的應(yīng)用有效阻斷了該流感病毒在家禽中的傳播，并成功阻斷了病毒由禽向人的傳播。