劉艷平
(河北省灤平縣農業(yè)農村局,068250)
豬瘟(swine fever,SF),又稱古典豬瘟(classical swine fever,CSF)、“爛腸瘟”,是由豬瘟病毒(classical swine fever virus,CSFV)引起的傳染性疾病[1]。豬瘟傳染源多是由豬瘟病毒感染的家豬、野豬,病發(fā)并沒有顯著的季節(jié)性,但是多發(fā)于寒冷、高溫氣候。豬瘟的發(fā)生,表現(xiàn)出非典型化的病癥特點,在多地區(qū)表現(xiàn)出散發(fā)性流行的態(tài)勢,其產生原因較為復雜,出現(xiàn)混合感染的情況較多,同時妊娠母豬帶毒,存在著嚴重的繁殖障礙,且多是呈現(xiàn)出持續(xù)感染的情況,急性死亡案例較少。
(1)調查材料。使用由美國IDEXX 公司生產的IDEXX CSFV Ab ELISA 試劑盒,開展豬瘟病毒檢測工作,同時還需要使用到德國SIGMA 3-18K高速冷凍離心機,美國BIOTEK ELX405 全自動洗板機等器材[2]。
(2)檢測方法。首先,從河北省生豬養(yǎng)殖產業(yè)發(fā)展狀況、養(yǎng)殖規(guī)模、區(qū)域分布、養(yǎng)殖數(shù)量因素入手,通過隨機分布,從河北省11 個地級市,42 個市轄區(qū)、20 個縣級市、104 個縣、6 個自治縣設置出620 個豬瘟監(jiān)測采樣點。從生豬的養(yǎng)殖、屠宰到流通等全流程,都需要被納入到監(jiān)測范圍之中。其次,按照安全的原則,采集豬群血樣,作為監(jiān)測樣品,并貼好標簽,保存在-20℃的環(huán)境下[3]。
(3)開展血清樣品中的豬瘟病毒抗原檢測工作。根據(jù)試劑盒中的說明書要求實施檢測活動,標記好樣品位置,將微量反應板取出,將50μL檢測豬瘟單克隆抗體加入每孔中,同時還要做好相應的對照孔處理工作,確保陽性對照和陰性對照結果真實有效。在事先標記好的檢測孔中,放好被檢測樣品,且每一個樣品都需要更換吸頭。在判斷檢測結果的過程中,主要是按照被檢測樣品的修正OD 值加以對比,當修正OD 值≤0.100,可以認為豬瘟病毒抗原顯示為陰性;而如果修正OD 值>0.300,則說明病毒呈現(xiàn)陽性。具體檢測過程中,如果檢測結果不在這兩者范圍內,即0.100<修正OD 值≤0.300,就說明檢測結果存在著一定的不準確性,需要開展重復檢測工作,或者使用豬瘟病毒特異性方法予以有效確認。
(4)結果與分析。針對2013~2018年河北省豬瘟病原檢測結果進行細致分析和統(tǒng)計,發(fā)現(xiàn)當?shù)刎i瘟病原陽性率呈現(xiàn)出了一定的下降趨勢。其在5年間共檢測豬瘟病毒病原學樣品22361 份,檢測出病原學陽性樣品為751 份,整體陽性率為3.36%。期間整體的豬瘟防控形勢表現(xiàn)出逐漸好轉的情況,但是在2017年病原學陽性率出現(xiàn)了上升情況,表明河北省依然面臨著嚴峻的豬瘟防控形勢。
河北省部分養(yǎng)豬場發(fā)生了豬病現(xiàn)象,以高熱稽留為顯著特征,病豬的發(fā)病率和死亡率都較高。為有效檢測出病豬血清中的免疫抗體,需要開展豬瘟病原學調查與免疫抗體相關性研究工作。本次研究過程中,主要是河北省病豬淋巴結、血清、扁桃體、腎臟、脾臟等多個組織部分采集樣品,并保存在-20℃環(huán)境中。檢測工作間進行中,需要針對組織樣品進行處理,開展豬瘟病毒RNA提取工作。其中需要將已經處理好的樣品開展對照工作,分別從陰性、陽性對照兩種方式入手,將750μL Trizol 加入到相應的對照樣品之中,并開展充分振搗工作,保持著20s 的時間。需要注意到的是,在晾干離心管中殘余液體之后,將20μL RNA 溶解液,針對RNA 進行溶解,完成溶解之后,需要將其保存在-20℃環(huán)境中。針對河北省2018年上半年豬瘟病毒抗體陽性率統(tǒng)計情況進行分析,能夠得出以下數(shù)據(jù)信息,結合豬瘟病原學調查與免疫抗體相關性的研究,能夠得到一定的檢測結果。實施豬瘟病毒抗原檢測工作的過程中,將所有采集的病料,開展實時熒光RT-PCR檢測工作,得到的結果為總陽性率為34.72%。而在豬瘟病毒抗體檢測過程中,發(fā)現(xiàn)豬瘟病毒免疫抗體陽性,所得到的抗體陽性率為51.36%。
表1 河北省2018年上半年豬瘟病毒抗體陽性率統(tǒng)計情況
在實際檢測工作間進行中,發(fā)現(xiàn)已經接受過豬瘟疫苗接種的豬群之中,還存在著一定的豬瘟病毒,有潛在的豬瘟隱患。想要針對豬瘟免疫抗體和豬瘟病原檢出率之間的關系進行分析,需要強化豬瘟免疫抗體的檢測工作,探討其病原檢出率情況。具體檢測工作過程中,監(jiān)測點、監(jiān)測樣品的選擇和采集,都和上述病原學調查情況一致。檢測結果顯示,河北省豬瘟免疫抗體的合格率保持著持續(xù)上升的趨勢,從2013年到2018年,免疫抗體合格率總體上生了10.42%。
豬瘟這種動物疫病,擁有著較高的發(fā)病率和死亡率,將會給養(yǎng)殖業(yè)造成較大的經濟損失,影響到當?shù)氐慕洕l(fā)展情況??谇火つな秦i瘟病毒傳染的主要途徑,大部分情況下,豬瘟潛伏期保持在1~10d 范圍內。病豬初期主要是表現(xiàn)在了白細胞減少癥、結膜炎情況,會給豬群造成較大的損傷?;疾〕潭戎饾u增加,表現(xiàn)出了較多臨床癥狀,如便秘、中樞神經系統(tǒng)紊亂、腹瀉方面,影響到病豬的生長情況。豬瘟病毒的傳播性較高,大多通過直接接觸的健康豬都會被受到感染,從血清、組織之中,開展酶聯(lián)免疫吸附試驗和熒光RT-PCR 試驗工作,將能夠檢測出其中的豬瘟病毒抗原[4]。分析河北省豬瘟免疫效果的血清學情況,針對豬瘟病毒免疫效果不佳的原因進行分析,能夠發(fā)現(xiàn)主要是由于:(1)豬群帶毒。這種情況出現(xiàn)之后,將會導致垂直感染的情況出現(xiàn),存在著惡性循環(huán),仔豬在母豬的感染下存在豬瘟病毒。(2)免疫程序不夠合理。養(yǎng)殖戶在接種豬瘟疫苗之后,沒有開展及時有效的免疫抗體檢測工作,避免抗體效果不佳的情況。