劉艷平

（河北省灤平縣農(nóng)業(yè)農(nóng)村局，068250）

1 前言

豬瘟(swine fever，SF)，又稱古典豬瘟（classical swine fever，CSF）、“爛腸瘟”，是由豬瘟病毒（classical swine fever virus，CSFV）引起的傳染性疾病[1]。豬瘟傳染源多是由豬瘟病毒感染的家豬、野豬，病發(fā)并沒(méi)有顯著的季節(jié)性，但是多發(fā)于寒冷、高溫氣候。豬瘟的發(fā)生，表現(xiàn)出非典型化的病癥特點(diǎn)，在多地區(qū)表現(xiàn)出散發(fā)性流行的態(tài)勢(shì)，其產(chǎn)生原因較為復(fù)雜，出現(xiàn)混合感染的情況較多，同時(shí)妊娠母豬帶毒，存在著嚴(yán)重的繁殖障礙，且多是呈現(xiàn)出持續(xù)感染的情況，急性死亡案例較少。

2 河北省豬瘟流行情況的病原學(xué)檢測(cè)

2.1 健康豬群豬瘟病原學(xué)調(diào)查

（1）調(diào)查材料。使用由美國(guó)IDEXX 公司生產(chǎn)的IDEXX CSFV Ab ELISA 試劑盒，開(kāi)展豬瘟病毒檢測(cè)工作，同時(shí)還需要使用到德國(guó)SIGMA 3-18K高速冷凍離心機(jī)，美國(guó)BIOTEK ELX405 全自動(dòng)洗板機(jī)等器材[2]。

（2）檢測(cè)方法。首先，從河北省生豬養(yǎng)殖產(chǎn)業(yè)發(fā)展?fàn)顩r、養(yǎng)殖規(guī)模、區(qū)域分布、養(yǎng)殖數(shù)量因素入手，通過(guò)隨機(jī)分布，從河北省11 個(gè)地級(jí)市，42 個(gè)市轄區(qū)、20 個(gè)縣級(jí)市、104 個(gè)縣、6 個(gè)自治縣設(shè)置出620 個(gè)豬瘟監(jiān)測(cè)采樣點(diǎn)。從生豬的養(yǎng)殖、屠宰到流通等全流程，都需要被納入到監(jiān)測(cè)范圍之中。其次，按照安全的原則，采集豬群血樣，作為監(jiān)測(cè)樣品，并貼好標(biāo)簽，保存在-20℃的環(huán)境下[3]。

（3）開(kāi)展血清樣品中的豬瘟病毒抗原檢測(cè)工作。根據(jù)試劑盒中的說(shuō)明書(shū)要求實(shí)施檢測(cè)活動(dòng)，標(biāo)記好樣品位置，將微量反應(yīng)板取出，將50μL檢測(cè)豬瘟單克隆抗體加入每孔中，同時(shí)還要做好相應(yīng)的對(duì)照孔處理工作，確保陽(yáng)性對(duì)照和陰性對(duì)照結(jié)果真實(shí)有效。在事先標(biāo)記好的檢測(cè)孔中，放好被檢測(cè)樣品，且每一個(gè)樣品都需要更換吸頭。在判斷檢測(cè)結(jié)果的過(guò)程中，主要是按照被檢測(cè)樣品的修正OD 值加以對(duì)比，當(dāng)修正OD 值≤0.100，可以認(rèn)為豬瘟病毒抗原顯示為陰性；而如果修正OD 值＞0.300，則說(shuō)明病毒呈現(xiàn)陽(yáng)性。具體檢測(cè)過(guò)程中，如果檢測(cè)結(jié)果不在這兩者范圍內(nèi)，即0.100＜修正OD 值≤0.300，就說(shuō)明檢測(cè)結(jié)果存在著一定的不準(zhǔn)確性，需要開(kāi)展重復(fù)檢測(cè)工作，或者使用豬瘟病毒特異性方法予以有效確認(rèn)。

（4）結(jié)果與分析。針對(duì)2013～2018年河北省豬瘟病原檢測(cè)結(jié)果進(jìn)行細(xì)致分析和統(tǒng)計(jì)，發(fā)現(xiàn)當(dāng)?shù)刎i瘟病原陽(yáng)性率呈現(xiàn)出了一定的下降趨勢(shì)。其在5年間共檢測(cè)豬瘟病毒病原學(xué)樣品22361 份，檢測(cè)出病原學(xué)陽(yáng)性樣品為751 份，整體陽(yáng)性率為3.36%。期間整體的豬瘟防控形勢(shì)表現(xiàn)出逐漸好轉(zhuǎn)的情況，但是在2017年病原學(xué)陽(yáng)性率出現(xiàn)了上升情況，表明河北省依然面臨著嚴(yán)峻的豬瘟防控形勢(shì)。

2.2 發(fā)病豬群豬瘟病原學(xué)調(diào)查與免疫抗體相關(guān)性分析

河北省部分養(yǎng)豬場(chǎng)發(fā)生了豬病現(xiàn)象，以高熱稽留為顯著特征，病豬的發(fā)病率和死亡率都較高。為有效檢測(cè)出病豬血清中的免疫抗體，需要開(kāi)展豬瘟病原學(xué)調(diào)查與免疫抗體相關(guān)性研究工作。本次研究過(guò)程中，主要是河北省病豬淋巴結(jié)、血清、扁桃體、腎臟、脾臟等多個(gè)組織部分采集樣品，并保存在-20℃環(huán)境中。檢測(cè)工作間進(jìn)行中，需要針對(duì)組織樣品進(jìn)行處理，開(kāi)展豬瘟病毒RNA提取工作。其中需要將已經(jīng)處理好的樣品開(kāi)展對(duì)照工作，分別從陰性、陽(yáng)性對(duì)照兩種方式入手，將750μL Trizol 加入到相應(yīng)的對(duì)照樣品之中，并開(kāi)展充分振搗工作，保持著20s 的時(shí)間。需要注意到的是，在晾干離心管中殘余液體之后，將20μL RNA 溶解液，針對(duì)RNA 進(jìn)行溶解，完成溶解之后，需要將其保存在-20℃環(huán)境中。針對(duì)河北省2018年上半年豬瘟病毒抗體陽(yáng)性率統(tǒng)計(jì)情況進(jìn)行分析，能夠得出以下數(shù)據(jù)信息，結(jié)合豬瘟病原學(xué)調(diào)查與免疫抗體相關(guān)性的研究，能夠得到一定的檢測(cè)結(jié)果。實(shí)施豬瘟病毒抗原檢測(cè)工作的過(guò)程中，將所有采集的病料，開(kāi)展實(shí)時(shí)熒光RT-PCR檢測(cè)工作，得到的結(jié)果為總陽(yáng)性率為34.72%。而在豬瘟病毒抗體檢測(cè)過(guò)程中，發(fā)現(xiàn)豬瘟病毒免疫抗體陽(yáng)性，所得到的抗體陽(yáng)性率為51.36%。

表1 河北省2018年上半年豬瘟病毒抗體陽(yáng)性率統(tǒng)計(jì)情況

3 河北省豬瘟免疫效果的血清學(xué)評(píng)價(jià)

在實(shí)際檢測(cè)工作間進(jìn)行中，發(fā)現(xiàn)已經(jīng)接受過(guò)豬瘟疫苗接種的豬群之中，還存在著一定的豬瘟病毒，有潛在的豬瘟隱患。想要針對(duì)豬瘟免疫抗體和豬瘟病原檢出率之間的關(guān)系進(jìn)行分析，需要強(qiáng)化豬瘟免疫抗體的檢測(cè)工作，探討其病原檢出率情況。具體檢測(cè)工作過(guò)程中，監(jiān)測(cè)點(diǎn)、監(jiān)測(cè)樣品的選擇和采集，都和上述病原學(xué)調(diào)查情況一致。檢測(cè)結(jié)果顯示，河北省豬瘟免疫抗體的合格率保持著持續(xù)上升的趨勢(shì)，從2013年到2018年，免疫抗體合格率總體上生了10.42%。

4 分析和討論

豬瘟這種動(dòng)物疫病，擁有著較高的發(fā)病率和死亡率，將會(huì)給養(yǎng)殖業(yè)造成較大的經(jīng)濟(jì)損失，影響到當(dāng)?shù)氐慕?jīng)濟(jì)發(fā)展情況。口腔黏膜是豬瘟病毒傳染的主要途徑，大部分情況下，豬瘟潛伏期保持在1～10d 范圍內(nèi)。病豬初期主要是表現(xiàn)在了白細(xì)胞減少癥、結(jié)膜炎情況，會(huì)給豬群造成較大的損傷?；疾〕潭戎饾u增加，表現(xiàn)出了較多臨床癥狀，如便秘、中樞神經(jīng)系統(tǒng)紊亂、腹瀉方面，影響到病豬的生長(zhǎng)情況。豬瘟病毒的傳播性較高，大多通過(guò)直接接觸的健康豬都會(huì)被受到感染，從血清、組織之中，開(kāi)展酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)和熒光RT-PCR 試驗(yàn)工作，將能夠檢測(cè)出其中的豬瘟病毒抗原[4]。分析河北省豬瘟免疫效果的血清學(xué)情況，針對(duì)豬瘟病毒免疫效果不佳的原因進(jìn)行分析，能夠發(fā)現(xiàn)主要是由于：（1）豬群帶毒。這種情況出現(xiàn)之后，將會(huì)導(dǎo)致垂直感染的情況出現(xiàn)，存在著惡性循環(huán)，仔豬在母豬的感染下存在豬瘟病毒。（2）免疫程序不夠合理。養(yǎng)殖戶在接種豬瘟疫苗之后，沒(méi)有開(kāi)展及時(shí)有效的免疫抗體檢測(cè)工作，避免抗體效果不佳的情況。