熊伯立

（福建省上杭縣蛟洋鎮(zhèn)畜牧獸醫(yī)水產(chǎn)站 364200）

鴨瘟是鴨、鵝等水禽的一種常見傳染病，對養(yǎng)鴨生產(chǎn)威脅很大。生產(chǎn)上一般采取注射鴨疫苗的方法預(yù)防鴨瘟病。但采取注射的方法費工費時。偶然發(fā)現(xiàn)白砂鎮(zhèn)某農(nóng)戶長期采用鴨瘟活疫苗飲水方法免疫預(yù)防鴨瘟，但缺乏此方法效果方面相關(guān)數(shù)據(jù)，為了了解用鴨瘟活疫苗飲水方法免疫預(yù)防鴨瘟的效果組織了本次試驗。

1 材料與方法

1.1 試驗材料

試驗動物與分組：選取上杭縣來藩養(yǎng)鴨場1 日齡雛黑番鴨100 羽，隨機(jī)分成 5 組，每組 20 羽。即分為對照組、注射組、飲水1 組、飲水2 組、飲水3 組。5 個組分成獨立的單欄飼養(yǎng)，均采取厚墊料養(yǎng)殖，采取一致的飼養(yǎng)條件。

1.2 鴨瘟活疫苗

選用哈藥集團(tuán)生物疫苗有限公司生產(chǎn)的鴨瘟活疫苗，生產(chǎn)批號：201804，批準(zhǔn)文號：獸藥生字 【2016】 080072024。含鴨瘟病毒雞胚毒株（CVCC AV1222）。每羽份病毒含量不低于103.0ELD50，規(guī)格為 500 羽/瓶。

1.3 試劑

鴨瘟（DVE）酶聯(lián)免疫分析試劑盒 (深圳市綠詩源生物技術(shù)有限公司生產(chǎn))，用于測定鴨血清、血漿及相關(guān)液體中鴨瘟（DVE）表達(dá)。

1.4 檢測儀器

離心機(jī)、移液器、酶標(biāo)儀、微量振蕩器等。

1.5 檢測方法

1.5.1 編號

將離心處理好的血清樣品對應(yīng)微孔按序編號，設(shè)陰性對照2 孔、陽性對照 2 孔、空白對照 1 孔。

1.5.2 加樣

分別在陰、陽性對照孔中加入陰性對照、陽性對照孔中加入陰性對照、陽性對照50μl，然后在待測樣品孔先加樣品稀釋液40μl，然后再加待測樣品10μl，加樣將樣品加于酶標(biāo)板孔底部，盡量不觸及孔壁，輕輕晃動混勻。加樣后按試劑操作要求溫育、配液、洗滌、加酶、溫育、洗滌、顯色、終止，最后進(jìn)行測定。

1.6 結(jié)果判定

試驗有效性：陽性對照孔平均值≧1.00；陰性對對照平均值≦0.10 臨界值（CLT OFF）計算；臨界值=陰性對照孔平均值-0.15

陰性判定：樣品（OD 值）＜臨界值（CLT OFF）為鴨瘟（DVE）陰性陽性判定：樣品（OD 值）≧臨界值（CLT OFF）者為鴨瘟（DVE）陽性。

1.7 試驗方法

在雛鴨養(yǎng)至25 日齡時進(jìn)行試驗，對照組不使用鴨瘟活疫苗；注射組每羽腿部肌肉注射注射一羽份鴨瘟活疫苗，按瓶簽劑量將鴨瘟活疫苗用注射用水100ml 生理鹽水稀釋，每羽腿部肌肉注射0.2ml；飲水組雛鴨免疫前停水2h，飲水1 組飲水免疫2 頭份鴨瘟活疫苗、飲水2 組飲水免疫4 頭份鴨瘟活疫苗、飲水3 組飲水免疫8 頭份鴨瘟活疫苗。

在免疫20d 后每羽翅靜脈采血2ml 送上杭縣動物疫病預(yù)防控制中心進(jìn)行檢測。

2 結(jié)果與分析

對照組11 個送檢血樣，陽性合格率為0%；注射組20 個送檢血樣，陽性合格率為80%；飲水1 組20 個送檢血樣，陽性合格率為60%；飲水2 組20 個送檢血樣，陽性合格率為70%；飲水3 組20 個送檢血樣，陽性合格率為80%。

3 討論

鴨瘟活疫苗的飲水免疫目前可供查詢的資料很少，僅查到貴州省畜牧獸醫(yī)科學(xué)研究所的范存軍和譚詩文在《中國畜禽傳染病》（1990 年第1 期）發(fā)表的《鴨瘟弱毒疫苗對雛鴨的飲水免疫試驗》[1]，他們的做法是在雛鴨的 1、5、10、15 日齡時進(jìn)行飲水免疫，再在免疫在30d 和60d 進(jìn)行攻毒試驗，以驗證飲水免疫的效果。本次試驗采用不同劑量的鴨瘟活疫苗的飲水和注射免疫對比試驗，采用免疫后20d 后翅靜脈采血，直接檢測抗體，具有更直觀、更準(zhǔn)確的特點。

一般而言，15 日齡前的雛鴨有可能存在母源抗體，本試驗用鴨來自禽苗市場，來源復(fù)雜，因此在雛鴨25 日齡時開始試驗，較好地規(guī)避了母源抗體的干擾。

由于飲水免疫的影響因素較多，在采取飲水免疫時一般劑量要大于注射免疫，從本次試驗來看，采取8 頭份劑量的飲水免疫抗體合格率最高，這和生產(chǎn)做法一致，表明用8 頭份劑量的飲水免疫代替注射免疫鴨瘟是可行的。但由于試驗的樣本量較小，本次應(yīng)用飲水免疫代替注射免疫鴨瘟的數(shù)據(jù)是否有代表性仍需進(jìn)一步驗證。

由于采用的試劑盒只有96 孔，因此，對照組僅有11 個樣本，和其他組樣本數(shù)不一致。

用飲水代替肌肉注射免疫鴨瘟疫苗省工省力，且能達(dá)到效果，在生產(chǎn)上有一定的應(yīng)用價值。