全細(xì)云 ， 李 明 ， 陳棟良，鄧 燚，彭 曼

1. 湖南省株洲市中心醫(yī)院病理科(株洲412000)；2.湖南省株洲市中心醫(yī)院急診科(株洲 412000)

胃癌是一種嚴(yán)重危害人們生命健康的惡行腫瘤。隨著社會(huì)和經(jīng)濟(jì)的發(fā)展，工業(yè)的不斷進(jìn)步，周圍環(huán)境污染越來越嚴(yán)重，胃癌的患病人數(shù)越來越多，嚴(yán)重影響了人們的生活質(zhì)量[1]。據(jù)相關(guān)資料顯示，胃癌的發(fā)病率在消化系統(tǒng)癌癥中的發(fā)病率越來越高?？旃?jié)奏的生活使得人們的飲食極其不規(guī)律，進(jìn)而導(dǎo)致胃癌的發(fā)病率越來越高，嚴(yán)重影響了人們的生活質(zhì)量。對(duì)于該種疾病不易進(jìn)行診斷，導(dǎo)致治療不及時(shí)，延誤治療的最佳時(shí)期，不利于患者的病情恢復(fù)。在臨床的診斷過程中，由于癌癥病癥的特殊性，容易在身體各處進(jìn)行轉(zhuǎn)移，這樣會(huì)加大診斷結(jié)果的難度，使得醫(yī)生對(duì)患者的病情不能準(zhǔn)確了解?；颊叩貌坏接行У闹委?，導(dǎo)致患者的病情延誤[2-3]。microRNA可以調(diào)節(jié)基因的表達(dá)活性，被應(yīng)用于腫瘤發(fā)病機(jī)制中。因此，microRNA-214和MGAT5可以調(diào)控多個(gè)靶細(xì)胞來控制疾病的發(fā)展與發(fā)生。對(duì)于microRNA-214和MGAT5的研究尚不透徹，仍有一些問題沒有解決，作用的機(jī)制尚未明朗。因此該文章就隨機(jī)選取在我院治療的80例胃癌患者探究胃癌組織中microRNA-214和MGAT5的表達(dá)及預(yù)后的相關(guān)性分析。

資料與方法

1 一般資料 隨機(jī)選取2015年6月至2017年6月在我院治療的80例胃癌的患者作為研究對(duì)象，收集其進(jìn)行手術(shù)切除的胃組織標(biāo)本作為研究對(duì)象，患者的胃癌組織作為研究組，患者的癌旁正常胃黏膜組織作為對(duì)照組。患者的平均年齡(39.1±6.3)歲；男41例，女39例，<60歲的患者為45例,>60歲的患者為35例；腫塊大小>5 cm的患者為55例,腫塊大小<5 cm的患者為25例；按WHO國際組織分類標(biāo)準(zhǔn):管狀腺癌(高、中分化型)35例，低分化及未分化型腺癌45例；按國際抗癌聯(lián)盟(UICC)臨床TNM分期:Ⅰ、Ⅱ期30例，Ⅲ、Ⅳ期50例；出現(xiàn)淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的患者為45例，未出現(xiàn)淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的患者為35例；患者術(shù)前均未接受過放化療及其它針對(duì)腫瘤的治療。

納入標(biāo)準(zhǔn)：所有的患者在進(jìn)行手術(shù)后病情較為穩(wěn)定，還有意識(shí)，能夠配合醫(yī)生的治療。沒有其他的疾病。排除標(biāo)準(zhǔn)：患有其他的疾病，例如腎功能不全、下肢深靜脈血栓、關(guān)節(jié)脫位、心肺的功能不全以骨折以及有精神方面的問題等等。沒有其他的疾病。

2 檢驗(yàn)方法 首先，對(duì)胃癌患者的胃癌組織以及胃黏膜組織進(jìn)行切除保存。使用10%的福爾馬林液進(jìn)行固定，使用石蠟進(jìn)行包裹，制成切片，進(jìn)而進(jìn)行后續(xù)的病理分析實(shí)驗(yàn)。進(jìn)行病理分析的樣本均要經(jīng)過2名或者以上的高級(jí)稱職的病理分析師進(jìn)行相應(yīng)的病理分析，選取的胃癌患者均未進(jìn)行放化療的治療[4-5]。 免疫組織化學(xué)染色及分析的方法：免疫組織化學(xué)生物素，親和素一酶結(jié)合物(ABC)法按照說明書上的指示嚴(yán)格執(zhí)行，將石蠟切片去除蠟之后，進(jìn)行水化，然后置于3%的過氧化鈉溶液中靜置10 min 左右，在室溫下靜置，去除組織中內(nèi)源性過氧化物酶，將其放入0．01 mol/L檸檬酸鹽緩沖液中進(jìn)行浸泡，并采用微波法對(duì)組織進(jìn)行抗原修復(fù)10 min左右；接著在室溫下采用5%山羊血清進(jìn)行封閉處理30 min；加一抗?jié)窈性?℃下進(jìn)行孵育過夜；加即用型二抗，在室溫條件下進(jìn)行孵育30 min左右；接著使用二氨基聯(lián)苯胺(DAB)進(jìn)行顯色3 min左右，使用蘇木素進(jìn)行復(fù)染操作，進(jìn)行封片。對(duì)于最后的染色結(jié)果由2位高級(jí)職稱的病理分析師進(jìn)行讀片，得出結(jié)果[6-8]。若讀片過程中，出現(xiàn)兩者不一致的結(jié)果時(shí)，需要雙方進(jìn)行協(xié)商得到最后的結(jié)果。免疫組織化學(xué)染色結(jié)果的判斷：在400倍的光鏡下對(duì)4個(gè)不同的視野進(jìn)行計(jì)數(shù)，若細(xì)胞質(zhì)中出現(xiàn)棕黃色顆粒，則結(jié)果計(jì)數(shù)為陽性，最終染色的結(jié)果要與陽性的細(xì)胞數(shù)以及染色的強(qiáng)度相結(jié)合，進(jìn)行半定量的分析[9]。

染色強(qiáng)度：陰性(0分)，染色弱但結(jié)果高于陰性對(duì)照(1分)，染色結(jié)果清晰，容易辨認(rèn)(2分)，染色強(qiáng)(3分)。陽性細(xì)胞數(shù)：≤25%(1分)，26%～≤50%(2分)，51%～≤75%(3分)，>76%(4分)。MGAT5低表達(dá)組為0～8分，MGAT5高表達(dá)組為9～12分[10]。

結(jié) 果

1 研究組和對(duì)照組microRNA-214和MGAT5水平的對(duì)比 患者胃癌組織中的microRNA-214和MGAT5表達(dá)率要比患者胃黏膜組織中的microRNA-214和MGAT5表達(dá)率要明顯高(P<0.05)，見表1。

表1 研究組和對(duì)照組microRNA-214 和MGAT5水平的對(duì)比

2 是否出現(xiàn)淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的胃癌患者的的對(duì)比 在胃癌中出現(xiàn)淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的患者的microRNA-214和MGAT5表達(dá)率要比未出現(xiàn)淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移患者的量要明顯的高(P<0.05)， 見表2。

3 胃癌不同的時(shí)期患者microRNA-214和MGAT5水平的對(duì)比 在胃癌患者中Ⅰ期、Ⅱ期的血清中的microRNA-214和MGAT5表達(dá)率要比Ⅲ期的表達(dá)率要明顯的高(P<0.05)；在胃癌患者中Ⅰ期、Ⅱ期的microRNA-214和MGAT5表達(dá)率要比Ⅳ期的水平要明顯的高(P<0.05)，在胃癌患者中Ⅲ期的microRNA-214和MGAT5表達(dá)率要比Ⅳ期的表達(dá)率要明顯的高(P<0.05)。見表3。

表2 是否出現(xiàn)淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的胃癌患者中 microRNA-214和MGAT5水平的對(duì)比

表3 胃癌不同的時(shí)期患者microRNA-214 和MGAT5表達(dá)率的對(duì)比

4 microRNA-214表達(dá)率與胃癌患者臨床病例因素的相關(guān)性 胃癌患者中男性患者的microRNA-214表達(dá)率要比女性患者的要低(P<0.05)，<60歲的胃癌患者要比>60歲的患者的microRNA-214表達(dá)率要明顯低(P<0.05)；腫塊大小<5 cm的胃癌患者的microRNA-214表達(dá)率要比腫塊大小>5 cm的胃癌患者的表達(dá)率要明顯偏低(P<0.05)；分化程度呈高、中分化的胃癌患者的microRNA-214表達(dá)率要比分化程度呈低、未分化的含量要明顯偏低(P<0.05)。見表4。

表4 microRNA-214表達(dá)率與胃癌患者臨床 病例因素的相關(guān)性

討 論

隨著社會(huì)的不斷進(jìn)步，工業(yè)發(fā)展越來越快，環(huán)境污染越來越嚴(yán)重，最后導(dǎo)致癌癥的發(fā)病率越來越高[11]。該病癥在早期時(shí)癥狀不明顯，因此常規(guī)的檢測并不能及時(shí)診斷出。這也就導(dǎo)致了患者病情的延誤，錯(cuò)過了最佳治療時(shí)間，導(dǎo)致癌癥的病死率增加。該種病癥后期會(huì)出現(xiàn)病情轉(zhuǎn)移的現(xiàn)象，這就更加加大了臨床診斷的困難性。胃癌癥要盡早治療，治療時(shí)間越早，患者的身體恢復(fù)情況就越好，對(duì)細(xì)胞表面糖蛋白的寡糖的改變引起細(xì)胞的粘附和遷移行為的顯著變化。在編碼蛋白的活性的增加可能與侵襲性惡性腫瘤的進(jìn)展相關(guān)[12]。

隨著胃癌表達(dá)率發(fā)病率越來越高，胃癌組織中microRNA-214和MGAT5的表達(dá)的研究迫在眉睫，該文章就隨機(jī)選取2015年6月至2017年6月在我院治療的80例患胃癌的患者探究胃癌組織中microRNA-214和MGAT5的表達(dá)及預(yù)后的相關(guān)性分析。據(jù)研究表明，胃癌患者在治療過程中microRNA-214和MGAT5的表達(dá)不同?；颊呶赴┙M織中的microRNA-214和MGAT5表達(dá)率要比患者胃黏膜組織中的microRNA-214和MGAT5表達(dá)率要明顯高。

腫瘤細(xì)胞在患者體內(nèi)不斷地快速增長，體內(nèi)的血管中的血液運(yùn)輸?shù)臓I養(yǎng)已經(jīng)不能維持腫瘤細(xì)胞的生長，因此，腫瘤細(xì)胞會(huì)誘導(dǎo)產(chǎn)生新的腫瘤血管，增加血管中血液運(yùn)輸?shù)乃俾剩瑸槟[瘤細(xì)胞提供更多的營養(yǎng)，促進(jìn)其的生長與浸潤。在腫瘤細(xì)胞生長過程中，會(huì)有淋巴液在身體中移動(dòng)，進(jìn)而加快腫瘤細(xì)胞的快速轉(zhuǎn)移，以便獲取更多的營養(yǎng)物質(zhì)供自己生長。MGAT5含量的變化與患者身體內(nèi)的許多病理以及生理變化有關(guān)系，當(dāng)細(xì)胞遷移、細(xì)胞分化、細(xì)胞增殖以及腫瘤的形成時(shí)人體內(nèi)的MGAT5含量會(huì)發(fā)生相應(yīng)的變化。在胃癌中出現(xiàn)淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的患者的microRNA-214和MGAT5的表達(dá)率明顯高于未出現(xiàn)淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的患者，Ⅲ、Ⅳ期的microRNA-214和MGAT5表達(dá)率明顯高于Ⅰ期、Ⅱ期患者；細(xì)胞表面的糖蛋白會(huì)參與腫瘤的一系列過程，在腫瘤發(fā)展的不同階段，患者體內(nèi)的MGAT5水平會(huì)明顯不同。MGAT5在人體內(nèi)的含量與各種病理與生理的過程有關(guān)系，例如：細(xì)胞分化、細(xì)胞的遷移、細(xì)胞的增殖以及腫瘤的形成這些過程。MGAT5的改變可以對(duì)腫瘤細(xì)胞之間的相互作用有一定的調(diào)節(jié)作用，對(duì)腫瘤細(xì)胞的運(yùn)動(dòng)有一定的促進(jìn)作用。MGAT5是一種高爾基體糖基轉(zhuǎn)移酶和Ⅱ型跨膜糖蛋白，可以決定復(fù)雜型糖鏈結(jié)構(gòu)。對(duì)于蛋白質(zhì)翻譯之后的蛋白質(zhì)的修飾起著一定的作用。

近年來，隨著社會(huì)的高速發(fā)展，人們的飲食越來越不規(guī)律，消化系統(tǒng)的疾病的發(fā)病率越來越高，胃癌的發(fā)病率在消化系統(tǒng)癌癥中越來越高，嚴(yán)重影響了患者的生活質(zhì)量。胃癌極高的發(fā)病率不僅僅危害患者的生命健康，而且對(duì)于患者的家庭也帶來了沉重的經(jīng)濟(jì)和精神負(fù)擔(dān)[13]。 MicroRNAs 是近些年來出現(xiàn)的一種非蛋白質(zhì)編碼 RNAs ，該種物質(zhì)可以準(zhǔn)確的了解到腫瘤的發(fā)現(xiàn)進(jìn)程，為臨床上腫瘤的研究開拓了新的途徑，成熟的 microRNA 具有調(diào)節(jié)基因的表達(dá)活性的功能。據(jù)數(shù)據(jù)顯示， miRNA 的表達(dá)水平在不同種類的腫瘤中是不相同的它們會(huì)在體內(nèi)起到抑癌基因和原癌基因的作用。據(jù)相應(yīng)的數(shù)據(jù)表明， microRNA-214與腫瘤有些密切的聯(lián)系。microRNA-214可以通過和PTEN 的 3 ’ - 非翻譯端結(jié)合， 與下調(diào) PTEN 蛋白表達(dá)，活化 Akt 通路可以用來誘導(dǎo)細(xì)胞繼續(xù)存活，進(jìn)而產(chǎn)生順鉑的耐藥性[14]。

據(jù)相應(yīng)數(shù)據(jù)統(tǒng)計(jì)可以得到，microRNA-214 該種物質(zhì)在乳腺癌組織中表達(dá)極高，與腫瘤細(xì)胞的侵襲性有著密切的聯(lián)系。microRNA-214在患者體內(nèi)起到調(diào)控的作用，調(diào)控患者體內(nèi)腫瘤細(xì)胞。但是目前對(duì)于該種物質(zhì)在胃癌組織中的機(jī)理還不太明確，初步研究發(fā)現(xiàn)與患者的性別、年齡、腫塊的大小、分化的程度有關(guān)系。男性胃癌患者的microRNA-214和MGAT5表達(dá)率明顯低于女性患者；在年齡方面，<60歲的胃癌患者要比>60歲的患者的microRNA-214和MGAT5表達(dá)率要明顯低，腫塊<5cm的胃癌患者的microRNA-214和MGAT5表達(dá)率要比腫塊>5cm的胃癌患者要明顯偏低，分化程度呈高、中分化的胃癌患者的microRNA-214和MGAT5表達(dá)率要比分化程度呈低分化的要明顯偏低[15]。該實(shí)驗(yàn)運(yùn)用了免疫組化方法，對(duì)胃癌患者體內(nèi)的胃癌組織以及胃黏膜組織進(jìn)行測定，進(jìn)而分析microRNA-214與臨床病理因素的關(guān)系，了解microRNA-214胃癌組織中的表達(dá)與哪種因素存在關(guān)系。進(jìn)而應(yīng)用到臨床中，通過調(diào)節(jié)人體中microRNA-214的水平來達(dá)到抑制胃癌的發(fā)生。

綜上所述，microRNA-214和MGAT5在胃癌組織中高表達(dá)，能夠預(yù)測胃癌的發(fā)展、發(fā)生以及預(yù)后，在臨床診斷和治療過程中會(huì)起到一定的預(yù)示作用。