羅 群，明俊男，蒲清榮，唐定洪，李能源，楊思進

（西南醫(yī)科大學附屬中醫(yī)醫(yī)院，四川瀘州 646000）

現(xiàn)代社會生活節(jié)奏較快，熬夜、飲食不規(guī)律等不健康的生活方式導致人體免疫力低下、肝功能受損、慢性胃病等。蘇伯維爾飲料由葛根、玉竹等五味中藥組成，這五味中藥均為藥食同源的中藥。該方為西南醫(yī)科大學附屬中醫(yī)醫(yī)院的經(jīng)驗方，葛根具有解肌退熱、透疹、生津止渴、升陽止瀉的功效，主要用于表證發(fā)熱、麻疹不透、熱病口渴、脾虛泄瀉等〔1〕。玉竹具有養(yǎng)陰潤燥、生津止渴的功效，主要用于肺、胃陰虛證，咳嗽、咽干痰結(jié)等〔2〕。五味藥配伍合用，具有養(yǎng)肝護胃、提神醒腦的功效，可供免疫力低下、肝功能受損、患有慢性胃病及植物神經(jīng)紊亂的人群使用。為了開發(fā)一種純中藥的現(xiàn)代中藥保健飲料，本實驗采用正交試驗法，以干浸膏重量和葛根素的含量為綜合評分指標，多指標優(yōu)選蘇伯維爾飲料水提的最佳工藝。

1 儀器與材料

LC-20A高效液相色譜儀（日本島津）；JPCT0328超聲波提取器（武漢嘉鵬電子有限公司）；JA203H電子天平（常州市幸運電子設(shè)備有限公司）；葛根（成都仁濟宏藥業(yè)有限公司，批號：171101）；玉竹（成都仁濟宏藥業(yè)有限公司，批號：170401）；葛根素對照品（中國食品藥品檢定研究院，批號：110752-200912，含量96.0%）；甲醇（成都市科隆化學品有限公司，批號：20170101）。

2 方法與結(jié)果

2.1 葛根素提取方法考察

2.1.1 色譜條件與系統(tǒng)適應(yīng)性試驗 以十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑；以甲醇-水（25：75）為流動相；檢測波長為250 nm；柱溫30℃；進樣量10 uL。理論塔板數(shù)按葛根素峰計算應(yīng)不低于4 000。

2.1.2 對照品溶液的制備 精密稱取干燥至恒重的葛根素對照品，加甲醇制成每1 mL含0.1 mg葛根素的溶液，搖勻，即得對照品溶液。

2.1.3 提取溶劑的考察 按照處方比例稱取藥材適量，加水煎煮，濾過，合并煎煮液，濃縮成流浸膏，水浴蒸干，置于105℃的恒溫干燥箱中，干燥至恒重，得蘇伯維爾浸膏。取4份浸膏粉末1 g，精密稱定，置具塞錐形瓶中，分別加入25 mL水〔3〕547、30%乙醇〔3〕715、70%乙醇〔3〕714、50%甲醇〔3〕717，密塞，稱定重量，超聲處理30 min，冷卻，再次稱重，分別用相應(yīng)的溶劑補足重量，搖勻，濾過，取續(xù)濾液，即得。按“2.1.1”項下進行含量測定。見表1。

表1 提取溶劑考察

由表1可知，采用30%乙醇和50%甲醇提取，葛根素含量較高。參照2015年版《中華人民共和國藥典》方法，故采用30%乙醇作為提取溶劑。

2.1.4 提取時間的考察 稱取3份上述浸膏粉末1 g，置100 mL具塞錐形瓶中，分別加入溶劑30%乙醇25 mL，密塞，稱重，分別超聲提取20、30、40 min，取出，放冷，再次稱重，用30%乙醇補足重量，搖勻，濾過，取續(xù)濾液，即得。見表2。

表2 提取時間考察

由表2可知，提取時間為30 min時，葛根素的含量最高，故采用提取時間為30 min。

2.1.5 提取方式的考察 稱取上述浸膏粉末2份，分別加入30%乙醇25 mL，密塞，稱重，分別超聲和回流30 min，放冷，再稱重，用30%乙醇補足重量，搖勻，濾過，取續(xù)濾液，即得。見表3。

表3 提取方式考察

由表3可知，超聲提取葛根素含量更高，故采用超聲提取方式。最終供試品的制備方法為：提取溶劑為30%乙醇，超聲提取30 min。

2.2 方法學考察

2.2.1 供試品溶液的制備 按照處方比例稱取藥材適量，水提后，將提取液濃縮成流浸膏，水浴蒸干，105℃恒溫干燥箱中至恒重，得浸膏。精密稱取浸膏粉末1 g，置具塞錐形瓶中，精密加入30%乙醇25 mL，密塞，稱重，超聲30 min，放冷，再稱重，用30%乙醇補足重量，搖勻，濾過，取續(xù)濾液，即得。

2.2.2 線性關(guān)系的考察 精密量取標準品母液（0.995mg∕mL）1、3、5、7、9、11mL加甲醇稀釋至25 mL，搖勻，分別制成濃度為 0.039 8、0.119 4、0.199 0、0.278 6、0.358 2、0.437 8 mg∕mL的對照品溶液。按“2.1.1”項下條件測定葛根素的峰面積。以峰面積為縱坐標（y）、葛根素濃度為橫坐標（x）進行線性回歸，得回歸方程y=45 960 982.05x-451 155.181（r2=0.999 2）。表明葛根素對照品在0.039 8～0.437 8 mg∕mL的范圍內(nèi)線性關(guān)系良好。

2.2.3 精密度試驗 精密吸取對照品溶液10 uL，連續(xù)進樣6次，記錄峰面積。結(jié)果，峰面積平均值為8 807 154.8，RSD值為0.62%，結(jié)果表明儀器精密度良好。

2.2.4 重復性試驗 取同批浸膏粉末1 g，精密稱定，按“2.2.1”項下方法制備供試品溶液，平行試驗6份，測定峰面積，計算葛根素的含量。結(jié)果葛根素的平均含量為3.81 mg∕g，RSD值為0.40%，表明該方法重復性良好。

2.2.5 穩(wěn)定性試驗 按照“2.2.1”項下的方法制備供試品溶液，分別于0、2、4、6、8、12、24 h進樣，精密吸取供試品溶液10 uL，注入液相色譜儀，記錄葛根素的峰面積。結(jié)果平均峰面積為7 592 098.7，RSD值為0.25%，表明樣品在24 h內(nèi)穩(wěn)定。

2.2.6 加樣回收試驗 精密稱取已知含量的同一份樣品9份，每份0.5 g（含葛根素3.78 mg∕g），分為3組，每組分別精密加入濃度為0.382 mg∕mL的葛根素對照溶液4、5、6 mL。按“2.2.1”項下方法制備供試品溶液，進樣，測定，結(jié)果平均回收率為100.50%，RSD值為0.70%。

2.3 正交試驗優(yōu)選水提工藝

2.3.1 水提工藝設(shè)計 以加水量、煎煮時間、煎煮次數(shù)為因素，選用L9（34）因素水平表安排正交試驗。見表4。

表4 水提正交因素水平

2.3.2 水提工藝正交試驗結(jié)果及統(tǒng)計分析 按照處方比例稱取藥材適量，根據(jù)L9（34）設(shè)計表進行9組試驗，將水提液濃縮后置于已恒重的蒸發(fā)皿中，水浴濃縮蒸干，移入105℃烘箱中，干燥至恒重，取出，置干燥器中冷卻30 min后，取出稱重，計算浸膏得率。精密稱取L9（34）試驗項下1～9號浸膏樣品適量，按“2.2.1”供試品溶液制備方法，進行測定，計算樣品中葛根素的含量。以葛根素含量和浸膏得率為指標，將葛根素含量的權(quán)重系數(shù)設(shè)為0.8，浸膏得率設(shè)為0.2，進行統(tǒng)計分析。見表5～6。

表5 水提正交試驗結(jié)果

表6 水提正交試驗方差分析

由表5和表6可以看出A、B、C三個影響因素中，影響因素順序為A＞C＞B。由表5的均值結(jié)果分析，因素A的優(yōu)劣順序為3＞2＞1；因素B的優(yōu)劣順序為3＞2＞1；因素C的優(yōu)劣順序為3＞1＞2。最終選擇以A3B3C3為最佳水提工藝條件，即加10倍量水，煎煮3次，每次煎煮1.5 h。

2.4 水提工藝驗證試驗按處方比例稱取藥材3份，按優(yōu)選的最優(yōu)水提工藝為條件，平行試驗3次，測定浸膏得率和葛根素含量。見表7。

表7 水提工藝驗證試驗結(jié)果

由表7結(jié)果分析，按選取的最佳工藝進行提取，浸膏得率可控制在36%左右，葛根素含量達到4.07 mg∕g，總體優(yōu)于正交試驗時任何一次試驗，證明上述正交試驗所得到的最佳水提工藝為最佳，并表明優(yōu)選的工藝穩(wěn)定可行，重現(xiàn)性好。

3 討論

葛根是蘇伯維爾的君藥，而葛根素則是葛根的有效成分，研究表明其具有解熱〔4〕，鎮(zhèn)痛〔5〕，抗菌、抗感染〔6〕，降血壓〔7〕，降血糖、血脂〔8〕，抗氧化，抗腫瘤，解酒〔9〕等作用，與蘇伯維爾的功能主治一致，所以本實驗選擇葛根素作為蘇伯維爾水提工藝的含量測定指標。為考察提取情況，首先對葛根素含量進行考察，其次對浸膏得率進行考察，試驗分析得出：葛根素含量比浸膏得率更好地反映藥材的提取情況，故設(shè)計葛根素含量與浸膏得率的權(quán)重系數(shù)為8：2。為確保水提工藝的合理性，本實驗進行了驗證試驗，結(jié)果表明，正交試驗優(yōu)選出的水提工藝合理可行。