白治田 李慧陳煒 童敏 邱昌明

(1.榆林市第二醫(yī)院耳鼻咽喉科, 陜西 榆林719000；2.樂山市人民醫(yī)院耳鼻咽喉科, 四川 樂山 614000)

分泌性中耳炎(Otitis media with effusion，OME)是一種非化膿性炎性疾病，主要特征為耳積液及聽力下降，臨床又稱非化膿性中耳炎、滲出性中耳炎，以兒童較為常見。部分患兒在上呼吸道感染后出現(xiàn)聽力減退、耳悶脹感的主要癥狀[1]。國(guó)內(nèi)外眾多研究證實(shí)OME的發(fā)病機(jī)制與免疫功能紊亂具有明顯的聯(lián)系。耳鼻喉科專家研究OME的免疫調(diào)節(jié)探尋OME發(fā)病機(jī)制已成為研究熱門[2]。IL-5是機(jī)體重要的免疫調(diào)節(jié)因子，具有分化、增殖、活化、趨化嗜酸性粒細(xì)胞的作用。Kim等[3]報(bào)道稱OME 患者中耳局部IL-5表達(dá)水平明顯增強(qiáng)，可能通過觸發(fā)堿性蛋白、嗜酸性粒細(xì)胞陽(yáng)離子蛋白等細(xì)胞活性物質(zhì)分泌，造成OME患兒病情遷延，久治不愈。在OME與白細(xì)胞介素的研究中，IL-6、IL-8也備受關(guān)注，其與機(jī)體的炎癥反應(yīng)與免疫具有明顯的調(diào)節(jié)作用。IL-6能促進(jìn)B淋巴細(xì)胞分化、生長(zhǎng)，加快分泌免疫球蛋白，在早期OME參與防御反應(yīng)，起到清除病原體及相關(guān)產(chǎn)物的作用[4]。IL-8作為一種重要的白細(xì)胞趨化因子，在眾多有關(guān)炎癥反應(yīng)疾病的早期發(fā)揮重要作用[5]。本文探究OME與腺樣體肥大(adenoidal hypertrophy，AH)患兒IL-5、IL-6、IL-8的表達(dá)水平及臨床意義，為探尋分泌性中耳炎的免疫學(xué)發(fā)病機(jī)制提供理論依據(jù)。

1 資料與方法

1.1 一般資料 選擇2015年1月～2017年月于我們兩院診斷與治療的25例OME伴AH患兒、30例單純OME患兒、30例單純AH患兒以及25例正常兒童，分別設(shè)為OME伴AH組、單純OME組、單純AH組與對(duì)照組。腺樣體肥大通過鼻咽側(cè)位片確診，腺樣體/鼻咽腔比值>0.6[6]；分泌性中耳炎患兒耳鳴、耳悶及聽力下降；鼓膜內(nèi)陷、積液征以及活動(dòng)受限；純音測(cè)聽結(jié)果為傳導(dǎo)性聾；聲導(dǎo)抗結(jié)果失去鐙骨[7]肌反射，鼓室壓圖為“B”型；鼓室穿刺有明顯積液抽出。排除標(biāo)準(zhǔn)：腺樣體機(jī)械性阻塞；鼻竇炎、鼻炎；支氣管哮喘、蕁麻疹、濕疹、變應(yīng)性鼻炎等過敏性疾病。四組性別、年齡比較差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)，見表1。

表1 四組一般資料比較Table 1 Comparison of general data between the four groups

1.2 方法 單純AH及OME伴AH患兒留取腺樣體切除的腺樣體組織，于-70℃恒溫冰箱保存。腺樣體組織IL-5、IL-6、IL-8水平均采用ELISA法檢測(cè)，常溫環(huán)境下進(jìn)行腺樣體組織解凍。解凍后切取小塊，用濾紙將標(biāo)本組織液吸干，隨后進(jìn)行稱重，并將保證檢測(cè)樣本腫瘤50～60mg并進(jìn)行嚴(yán)格標(biāo)記。隨后制作組織勻漿，腺樣體組織采用無菌蒸餾水按1：20比例稀釋，通過勻漿機(jī)制作腺樣體勻漿，離心15min(3500r/min)取上清液待檢。所有受試者均于清晨采集空腹肘靜脈血，每人2ml，保存于含EDTA的抗凝試管中，離心10min(3500r/min)取上清液待檢，留取血清標(biāo)本并放置于-80℃恒溫箱待檢。血清IL-5、IL-6、IL-8水平均采用ELISA法檢測(cè)。均使用人IL-5、IL-6、IL-8ELISA快速檢測(cè)試劑盒，試劑盒購(gòu)自美國(guó)強(qiáng)生公司，所有操作均按試劑盒說明書進(jìn)行。包括標(biāo)準(zhǔn)品的梯度稀釋、加樣、加檢測(cè)抗體、洗板、加酶、顯色、終止反應(yīng)、讀板等步驟，參照文獻(xiàn)[8]。通過標(biāo)準(zhǔn)品所測(cè)數(shù)值繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)曲線將樣品測(cè)得的OD值對(duì)應(yīng)計(jì)算出IL-5、IL-6、IL-8含量。

1.3 統(tǒng)計(jì)學(xué)分析 數(shù)據(jù)分析采用SPSS20.00統(tǒng)計(jì)軟件，以百分率(%)形式表示計(jì)數(shù)資料，行2檢驗(yàn)，計(jì)量資料以均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差表示，采用獨(dú)立樣本t檢驗(yàn)，多組比較采用F檢驗(yàn)，P<0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

各組腺樣體及血清IL-5、IL-6、IL-8水平比較 OME伴AH組腺樣體IL-5、IL-6水平高于單純AH組(P<0.05)； OME伴AH組與單純OME組血清IL-5、IL-6水平高于單純OME組與對(duì)照組，腺樣體IL-5、IL-6水平均高于血清，檢測(cè)結(jié)果(P<0.05)；OME伴AH組與單純OME組、單純OME組與對(duì)照組IL-5、IL-6水平差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)；OME伴AH組、單純OME組腺樣體、血清IL-8水平差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)；三組患者血清IL-8水平差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)，但均顯著高于對(duì)照組(P<0.05)，見表2～4。

表2 各組腺樣體及血清IL-5水平比較Table 2 Comparison of the levels of IL-5 in adenoids and serum in each group

注：與OME伴AH組比較，①P<0.05，與單純OME組比較，②P<0.05，與單純AH組比較，③P<0.05

表3 各組腺樣體及血清IL-6水平比較Table 3 Comparison of the levels of IL-6 in adenoids and serum in each group

注：與OME伴AH組比較，①P<0.05，與單純OME組比較，②P<0.05，與單純AH組比較，③P<0.05

表4 各組腺樣體及血清IL-8水平比較Table 4 Comparison of the levels of IL-8 in adenoids and serum in each group

注：與OME伴AH組比較,①P<0.05，與單純OME組比較,②P<0.05，與單純AH組比較,③P<0.05

3 討論

近年來國(guó)內(nèi)外致力于關(guān)于OME發(fā)病機(jī)制的研究，在免疫學(xué)領(lǐng)域取得了一定的研究成果，包括異常的腺樣體免疫功能；細(xì)胞因子發(fā)生免疫調(diào)節(jié)作用；變態(tài)反應(yīng)；自身免疫調(diào)節(jié)障礙；腫瘤壞死因子以及一氧化氮等在分泌性中耳炎免疫學(xué)發(fā)病機(jī)制具有重要作用[9]。其中關(guān)于體液遞質(zhì)-細(xì)胞因子(cytokine，CK)受到較高的重視[10]。CK屬于多肽或糖蛋白，分子量較低，主要表現(xiàn)為細(xì)胞分化、生長(zhǎng)的調(diào)節(jié)作用，同時(shí)對(duì)炎癥反應(yīng)、免疫應(yīng)答均具有介導(dǎo)和調(diào)節(jié)作用，已涉及IL-1β、IL-2、IL-5、IL-8等多種白細(xì)胞介素[11]。腺樣體病變引發(fā)OME的可能機(jī)制包括加快咽鼓管逆流、阻塞咽鼓管、貯藏致病微生物、變態(tài)反應(yīng)以及免疫異常等[12]。

IL-5即嗜酸性粒細(xì)胞分化因子，由NK細(xì)胞與CD+T細(xì)胞產(chǎn)生，是調(diào)節(jié)B細(xì)胞晚期分化的細(xì)胞因子，能促進(jìn)嗜酸性粒細(xì)胞的生物學(xué)活性，并誘導(dǎo)其增殖與分化，有效激活、趨化成熟嗜酸性粒細(xì)胞，還能大幅延長(zhǎng)其存活時(shí)間，抑制凋亡，同時(shí)對(duì)黏附分子的表達(dá)具有上調(diào)作用，促進(jìn)嗜酸性粒細(xì)胞、血管內(nèi)皮細(xì)胞的黏附反應(yīng)[13-14]。馮國(guó)飛等[15]研究發(fā)現(xiàn)，IL-5水平的上升加快腺樣體局部組織嗜酸性粒細(xì)胞增殖、分化以及趨化功能，促進(jìn)炎性介質(zhì)分泌的增加，進(jìn)一步出現(xiàn)腺體分泌亢進(jìn)及毛細(xì)血管滲漏現(xiàn)象，發(fā)生上呼吸道變應(yīng)性炎癥。本研究結(jié)果也顯示，OME伴AH組患兒腺樣體IL-5局部高表達(dá)。IL-6在CK中能夠發(fā)揮多種作用，主要作用是促進(jìn)B細(xì)胞增殖、分化，同時(shí)誘導(dǎo)B細(xì)胞分泌抗體，促進(jìn)激活T細(xì)胞增殖[16]。謝明等[17]采用ELISA法，測(cè)定OME患者中耳滲出液中IL-6和TNF-α濃度，結(jié)果提示早期滲出液中以保護(hù)性體液遞質(zhì)為主，參與機(jī)體防御反應(yīng)，有利于清除病原體及產(chǎn)物，在病程的后期,隨著原致病因素的削弱或消失，IL-6 的產(chǎn)生減少，濃度下降,并解除了對(duì) TNF-α抑制作用，TNF-α的產(chǎn)生增多。本研究結(jié)果表示，OME伴AH組腺樣體IL-5、IL-6水平顯著高于單純AH組。提示IL-6在早期參與機(jī)體防御反應(yīng)，推測(cè)OME早期中耳積液的形成可能與IL-6 的高表達(dá)相關(guān)。OME伴AH組與單純OME組血清IL-5、IL-6水平顯著高于單純OME組與對(duì)照組，腺樣體IL-5、IL-6水平均高于血清檢測(cè)結(jié)果。提示隨著腺樣體變應(yīng)性炎癥的加重可能累及中耳黏膜，引發(fā)局部中耳發(fā)生變應(yīng)性炎癥，進(jìn)而出現(xiàn)中耳滲液。

IL-8可使中性粒細(xì)胞內(nèi)的蛋白質(zhì)發(fā)生磷酸化，游離鈣離子濃度增加，細(xì)胞發(fā)生脫顆粒、釋放儲(chǔ)存酶，引起呼吸暴發(fā),生成活性氧代謝產(chǎn)物，造成咽鼓管和中耳黏膜水腫，增加毛細(xì)血管的通透性，破壞纖毛黏液排泄系統(tǒng)，使積液產(chǎn)生并滯留于中耳腔內(nèi)，故OME早期MEE的形成與IL-8的高表達(dá)直接相關(guān)[18-20]。本研究結(jié)果表示，患兒IL-8均顯著高于對(duì)照組，提示OME、 AH均有明顯的炎癥反應(yīng)，而腺樣體與血清水平無差異還需進(jìn)一步探究。

4 結(jié)論

IL-5、IL-6在OME伴AH、單純AH患兒腺樣體表達(dá)明顯高于血清檢測(cè)結(jié)果，提示其在OME的發(fā)生及發(fā)展中發(fā)揮著重要作用。