楊長(zhǎng)松

摘要：2017年10月，某豬場(chǎng)發(fā)生一起以精神沉郁、體溫升高、呼吸困難、站立困難、皮膚出現(xiàn)血斑及出血點(diǎn)、全身淋巴結(jié)腫大、腎臟腫大出血等為主要特征的疫病，通過臨床診斷和實(shí)驗(yàn)室PCR檢測(cè)確診為豬瘟病毒和豬繁殖與呼吸綜合征病毒混合感染。

關(guān)鍵詞：豬瘟病毒；豬繁殖與呼吸綜合征病毒；混合感染；診斷

豬瘟（classical swine fever，CSF）是由豬瘟病毒（classical swine fever virus，CSFV）引起的以實(shí)質(zhì)器官發(fā)生出血、梗死、壞死為主要特征的一種急性、敗血性傳染病。豬繁殖與呼吸綜合征（porcine reproductive and respiratory syndrome，PRRS）是由豬繁殖與呼吸綜合征病毒（porcine reproductive and respiratory syndromevirus，PRRSV）引起的以懷孕母豬繁殖障礙及各年齡階段豬的呼吸道癥狀為主要特征一種急性、高度接觸性傳染病。二者均是當(dāng)前阻礙我國養(yǎng)豬業(yè)健康發(fā)展的主要傳染病，且常常存在混合感染，混合感染后對(duì)豬群的危害程度更加嚴(yán)重。2017年10月，某豬場(chǎng)發(fā)生了一起CSFV和PRRSV混合感染疫情，現(xiàn)將整個(gè)診斷過程介紹如下。

1發(fā)病情況

該豬場(chǎng)為中小型養(yǎng)豬場(chǎng)，其共有種豬120頭，仔豬及育肥豬共計(jì)600余頭，采取自繁自養(yǎng)的養(yǎng)殖模式。2017年10月，該豬場(chǎng)飼養(yǎng)的育肥豬率先發(fā)病，發(fā)病后7d開始出現(xiàn)死亡，育肥豬發(fā)病率達(dá)70%左右，死亡率達(dá)30%左右，哺乳仔豬及種豬尚未發(fā)病。發(fā)病后曾利用青霉素和磺胺類藥物治療，無效果。

2臨床癥狀

發(fā)病初期表現(xiàn)為食欲減退、精神沉郁、體溫升高、扎堆喜臥、眼結(jié)膜發(fā)紺，隨后開始出現(xiàn)食欲廢絕、呼吸困難、耳朵、腹部和腿部?jī)?nèi)側(cè)出現(xiàn)血斑及出血點(diǎn)、后肢癱瘓、站立困難，最后因逐漸消瘦、衰竭至死。

3解剖病變

解剖病死豬可見全身淋巴結(jié)腫大且部分具有大理石樣變、心包積液、心外膜呈片狀出血斑、心房?jī)?nèi)膜呈針狀出血、腎臟腫大且表面呈針尖狀出血、胃底部呈潰瘍穿孔、小腸潰爛、回盲呈紐扣狀潰瘍。

4實(shí)驗(yàn)室PCR檢測(cè)

采集病死豬的淋巴結(jié)、腎臟、腸黏膜等病變組織，將其溶解于5倍體積滅菌生理鹽水中，經(jīng)搗碎、勻漿后，取上清液進(jìn)行PCR檢測(cè)。參照王曉波等報(bào)道的多重PCR方法分別合成CSFV和PRRSV的2對(duì)檢測(cè)引物（CSFV上游：5′-GGACCGTTAAGGCCATTTGC-3′，CSFV下游：5′-TATAACACCCGTCCACCCTA-3′：PRRSV上游：5′-ATGGGCGACAATGTCCCTAA-3，PRRSV下游：5′-CTTGATGACACACCTGCAGG-3′），并按照王曉波等[3]報(bào)道的PCR擴(kuò)增方法進(jìn)行PCR擴(kuò)增。結(jié)果如圖1所示，采集的組織樣品經(jīng)多重PCR擴(kuò)增后在287bp和374 bp處具有特異性擴(kuò)增條帶，片段大小均與王曉波等報(bào)道的CSFV和PRRSV的擴(kuò)增結(jié)果相符，表明采集的組織樣品為CSFV和PRRSV陽性。

5綜合診斷結(jié)果

結(jié)合發(fā)病情況、臨床癥狀、解剖病變和實(shí)驗(yàn)室PCR檢測(cè)結(jié)果確診這次疫情為CSFV和PRRSV混合感染。

6討論

近年來，我國養(yǎng)豬業(yè)得到了蓬勃發(fā)展，但動(dòng)物疫病綜合防控能力的提升相對(duì)滯后，主要表現(xiàn)在豬群免疫力和抗病力下降，多種致病原的混合感染更加普遍，臨床表現(xiàn)更加復(fù)雜，確診更加困難。其中CSFV和PRRSV混合感染是豬群中較常見的多致病原混合感染之一，其發(fā)病率有逐年增多的趨勢(shì)，快速確診是疫情能夠得到迅速控制的關(guān)鍵。目前，CSFV和PRRSV診斷方法主要有病原分離鑒定、血清學(xué)和分子生物學(xué)檢測(cè)方法，其中病原分離鑒定試驗(yàn)周期較長(zhǎng)，血清學(xué)方法檢測(cè)快速但確診疫病具有一定的滯后性，而PCR作為一種常用的分子生物學(xué)檢測(cè)技術(shù)已廣泛應(yīng)用于動(dòng)物疾病的快速診斷，尤其當(dāng)致病原含量極少時(shí)，PCR可以顯著提高疾病的診斷水平。多重PCR能在同一反應(yīng)體系中擴(kuò)增出2種及以上不同目的基因，與單項(xiàng)PCR相比能夠快速、準(zhǔn)確地同時(shí)檢測(cè)兩種或多種致病原。在本病例的確診中，采用王曉波等建立的多重PCR方法進(jìn)行確診，只需要將2對(duì)檢測(cè)引物加入到一個(gè)PCR反應(yīng)體系中，一步即可完成CSFV和PRRSV的同時(shí)擴(kuò)增，大大節(jié)省了檢測(cè)時(shí)間和檢測(cè)成本，也使檢測(cè)結(jié)果更加準(zhǔn)確、可靠。本病例的快速確診為養(yǎng)殖場(chǎng)采取疫苗緊急免疫接種等系列針對(duì)性治療措施贏得了時(shí)間，為迅速控制疫情提供了技術(shù)保障。