馮言言　孟芳　鄭莉　林紅　李龍飛　田振平　劉義明　孔梅　吳連勇

摘要：新城疫是養(yǎng)禽生產(chǎn)中的常見病、多發(fā)病，對雞群的影響比較大，傳統(tǒng)上我們一般通過臨床表現(xiàn)和剖檢變化對其做出診斷，近年來隨著科技的不斷發(fā)展，實(shí)時(shí)熒光定量PCR技術(shù)也為大家所熟知和掌握，本文就一例采用實(shí)時(shí)熒光定量PCR技術(shù)診斷新城疫的過程進(jìn)行介紹。

關(guān)鍵詞：新城疫；PCR；診斷

頭孢洛寧，為半合成的第一代頭孢菌素類抗生素，由默沙東公司開發(fā)成頭孢洛寧乳房注入劑（干乳期），商品名為Cepravin，目前在歐盟及英聯(lián)邦國家范圍內(nèi)廣泛使用，可用于治療奶牛干乳期乳房炎以及預(yù)防乳房內(nèi)新增感染。頭孢洛寧抗菌譜廣，對革蘭氏陽性菌和革蘭氏陰性菌均有較強(qiáng)的抗菌活性，并且對產(chǎn)β-內(nèi)酰胺酶菌有很好的作用，頭孢洛寧敏感菌包括金黃色葡萄球菌、無乳鏈球菌、乳房鏈球菌、停乳鏈球菌、大腸桿菌、化膿隱秘桿菌、枸櫞酸桿菌、潰瘍棒狀桿菌、克雷伯菌、變形桿菌等。目前，國內(nèi)無頭孢洛寧乳房注入劑（干乳期）對奶牛的靶動(dòng)物安全性報(bào)道，為更好地將頭孢洛寧乳房注入劑（干乳期）推廣應(yīng)用到干乳期乳房炎以及預(yù)防乳房內(nèi)新增感染的臨床病癥中，特進(jìn)行了頭孢洛寧乳房注入劑（干乳期）對靶動(dòng)物奶牛的安全性研究，為臨床上合理使用該藥物提供依據(jù)。

1材料與方法

1.1受試藥物

頭孢洛寧乳房注入劑（干乳期），規(guī)格為3g：250mg，批號為1511001，齊魯動(dòng)物保健品有限公司提供，推薦用藥方法為干乳期奶牛每頭牛每個(gè)乳區(qū)給藥1支。

1.2試驗(yàn)動(dòng)物

試驗(yàn)選擇健康泌乳期奶牛，奶牛在試驗(yàn)前30日內(nèi)未全身性或乳房內(nèi)給予抗生素，產(chǎn)奶量在15～35kg/d之間，實(shí)驗(yàn)動(dòng)物為經(jīng)產(chǎn)和初產(chǎn)健康泌乳期奶牛各6頭（1～6號牛為初產(chǎn)，7～12號牛為經(jīng)產(chǎn)）。

1.3試驗(yàn)方法

12頭健康泌乳期奶牛（初產(chǎn)經(jīng)產(chǎn)各半），四個(gè)乳區(qū)分別注入頭孢洛寧乳房注入劑（干乳期）一支（250mg），給藥1次。

奶牛擠奶后，先用消毒毛巾清潔各乳區(qū)，再用消毒藥液浸泡乳頭約30s，然后進(jìn)行乳頭內(nèi)灌注給藥。灌注時(shí)將含藥推注管頭插入乳頭，輕輕推壓活塞，將藥物緩緩注入乳池內(nèi)，隨后輕輕按摩相應(yīng)乳區(qū)，使藥物均勻分布。

1.4試驗(yàn)過程

在給藥前1日和0日（給藥前）采集奶樣各1次；給藥后12小時(shí)、3日、5日、7日和10日各采奶樣1次，采樣時(shí)四個(gè)乳區(qū)均需要采樣，并棄去前三把奶。

數(shù)據(jù)收集：記錄奶牛標(biāo)識、觀察時(shí)間、試驗(yàn)日期和時(shí)間、每頭奶牛日產(chǎn)奶量及體溫等參數(shù)。各時(shí)間點(diǎn)所采集奶樣檢測乳中體細(xì)胞數(shù)（SCC），通過觸診觀察奶牛紅腫熱痛等臨床癥狀。

細(xì)菌分離：分別在給藥前0日和給藥后第10日各采集奶樣1次（20mL）進(jìn)行細(xì)菌學(xué)檢查。采樣時(shí)先用清水沖洗乳房，用0.1%新潔爾滅或者75%乙醇對乳頭及周圍進(jìn)行消毒，待酒精揮發(fā)后手工擠奶，棄去前三把奶后，采集奶樣于滅菌試管中，貼好標(biāo)簽，低溫（4℃）保存并于6h內(nèi)送實(shí)驗(yàn)室分離檢測。

用多種選擇性培養(yǎng)基培養(yǎng)分離病原菌。將各奶樣接種至選擇性培養(yǎng)基分離各種病原菌。分離菌株經(jīng)純化培養(yǎng)后，依據(jù)菌落形態(tài)、染色特征、生化特點(diǎn)鑒定其種類。主要分離金黃色葡萄球菌、鏈球菌（無乳鏈球菌、乳房鏈球菌）和大腸桿菌。

2結(jié)果

2.1體細(xì)胞計(jì)數(shù)

體細(xì)胞計(jì)數(shù)結(jié)果見表1。

由表1數(shù)據(jù)可知，12頭奶牛給藥后各時(shí)間點(diǎn)奶樣與給藥前體細(xì)胞檢測結(jié)果相比體細(xì)胞數(shù)有所降低。

2.2奶牛的產(chǎn)奶量

12頭奶牛各時(shí)間點(diǎn)的產(chǎn)奶量見表2。

通過表2數(shù)據(jù)可知，12頭奶牛在給予頭孢洛寧乳房注入劑（干乳期）后，與給藥前相比各時(shí)間點(diǎn)產(chǎn)奶量無明顯變化。

2.3細(xì)菌分離鑒定

試驗(yàn)?zāi)膛＝o藥后乳中細(xì)菌數(shù)比給藥前減少，在給藥前0日采集的奶樣中，分離的鏈球菌、葡萄球菌和大腸桿菌分別為2株、3株和4株，給藥后第10日，僅檢測到葡萄球菌和鏈球菌各1株（見表3）。

2.4奶牛的直腸溫度

奶牛的直腸溫度統(tǒng)計(jì)見表4。所有試驗(yàn)?zāi)膛Ｔ诮o藥前和給藥后不同時(shí)間點(diǎn)的直腸溫度均在奶牛的正常溫度范圍內(nèi)，說明按推薦劑量單次給藥對奶牛的體溫?zé)o顯著影響。

2.5臨床癥狀觀察

12頭奶牛四個(gè)乳區(qū)分別單劑量給藥頭孢洛寧乳房注入劑（干乳期），在整個(gè)試驗(yàn)期間，給藥乳區(qū)未出現(xiàn)乳房紅、腫、熱、痛等臨床癥狀。

3結(jié)論

12頭奶牛四個(gè)乳區(qū)分別單次給與頭孢洛寧乳房注入劑（干乳期）（3g：250mg），在給藥前1日和0日采集奶樣各1次；給藥后12小時(shí)、3日、5日、7日和10日各采奶樣1次，在各時(shí)間點(diǎn)給藥后奶樣中體細(xì)胞數(shù)與給藥前未見明顯變化，奶牛的產(chǎn)奶量未見顯著變化，奶牛乳區(qū)未出現(xiàn)紅、腫、熱、痛等臨床乳房炎癥狀。在給藥前0日和給藥后第10日分別采集奶樣并分離細(xì)菌，結(jié)果顯示給藥后細(xì)菌檢出數(shù)與給藥前相比降低。上述結(jié)果表明奶牛按推薦劑量單次給予頭孢洛寧乳房注入劑（干乳期）對奶牛無任何不良反應(yīng)，安全性較高。