高艷艷　高富紅　張曉會　劉興金

摘要：為了考察苦參功勞顆粒治療雞大腸桿菌病的臨床效果，按照入選標準挑選662只大腸桿菌病自然發(fā)病雞只進行試驗。將662只雞隨機分為3個組，3個組分別為苦參功勞顆粒試驗組（300只）、四黃止痢顆粒對照組（300只）、感染對照組（62只）。試驗各組按推薦的臨床給藥途徑和劑量進行給藥，試驗期間統(tǒng)計各組雞群日均采食量、死亡率和給藥組的治愈率。結(jié)果顯示：苦參功勞顆粒按1.0g/L劑量飲水，連用5天，能減少大腸桿菌病引起的雞只死亡，同時對疾病引起的采食量降低、生長發(fā)育受阻具有改善作用。結(jié)論：本試驗為苦參功勞顆粒的臨床應(yīng)用提供了數(shù)據(jù)支持，同時建立了雞大腸桿菌病的病例入選標準、療效判定標準，為新獸藥的臨床評價提供參考方法。

關(guān)鍵詞：苦參功勞顆粒；雞大腸桿菌?。恢斡?；

雞大腸桿菌病是普遍存在的一種傳染病，據(jù)統(tǒng)計，其發(fā)病率為11%～69%，死亡率為3.8%-72.9%，致死率為40.2%～90.3%，對養(yǎng)殖業(yè)危害嚴重。大腸桿菌致病性血清型眾多，致病機理及發(fā)病情況復(fù)雜，目前的防控主要靠抗生素或化學(xué)合成的抗菌藥物。近年來，耐藥性問題日趨加重，臨床上出現(xiàn)了多重、超強耐藥菌株，大腸桿菌病的控制難度因而加大。我國中藥資源豐富，利用中藥來防治該病具有明顯的優(yōu)勢，苦參功勞顆粒是由十大功勞、苦參、木香3種成分經(jīng)過合理配比組成的復(fù)方制劑，有清熱解毒，燥濕止痢的功效，經(jīng)實驗室驗證對雞人工感染大腸桿菌病具有治療作用，為了進一步考察其臨床效果，在養(yǎng)殖場選擇自然發(fā)病雞群開展了此實驗。

1試驗材料

1.1供試藥品

苦參功勞顆粒：批號20140401，規(guī)格：每1g相當(dāng)于原生藥3q，洛陽惠中獸藥有限公司。四黃止痢顆粒，批號：20130901，規(guī)格：100g：100g原生藥，普萊柯生物工程股份有限公司。

1.2培養(yǎng)基及主要試劑

營養(yǎng)瓊脂培養(yǎng)基、麥康凱瓊脂培養(yǎng)基、伊紅美藍瓊脂培養(yǎng)基、營養(yǎng)肉湯培養(yǎng)基、革蘭氏染液，均購于青島海博生物技術(shù)有限公司。葡萄糖生化管、乳糖生化管、麥芽糖生化管、蔗糖生化管、甘露醇生化管、硫化氫生化管、葡萄糖磷酸鹽蛋白胨水、枸櫞酸鹽生化管，購于杭州微生物試劑有限公司。靛基質(zhì)試劑、甲基紅（MR）試驗試劑、伏普VP試驗用試劑甲/乙液，杭州微生物試劑有限公司生產(chǎn)。

1.3試驗地點及實驗動物

洛陽市孟津縣某養(yǎng)殖專業(yè)合作社肉雞養(yǎng)殖戶，主要養(yǎng)殖AA肉雞，雞場于2015年9月初購入雞苗15，000只，分別飼養(yǎng)在A、B兩棟雞舍，其中A棟10，000只，B棟5，000只。于18日齡時觀察到發(fā)病癥狀，雞群整體精神差，部分雞只出現(xiàn)精神沉郁、兩翅下垂，嗜睡，排黃色稀便等癥狀。

2試驗方法

2.1臨床診斷

2.1.1臨床癥狀與解剖學(xué)觀察

雞群于18日齡時開始發(fā)病，雞群整體精神差，部分雞只出現(xiàn)精神沉郁、兩翅下垂，嗜睡，排黃色稀便等癥狀，零星死亡。取死亡雞只，以及從雞群中挑選出現(xiàn)嗜睡呆立、臥地不起等發(fā)病嚴重雞只進行解剖，主要表現(xiàn)為纖維素性心包炎、肝周炎，心、肝表面有纖維素或膠凍樣物包裹，氣囊增厚、渾濁癥狀，個別雞十二指腸粘膜發(fā)紅，有卡他性炎，腸壁變薄。

2.1.2實驗室診斷

取心臟、肝臟病料，無菌條件下接種營養(yǎng)瓊脂、麥康凱瓊脂、伊紅美藍瓊脂培養(yǎng)基，用無菌接種環(huán)劃線，37℃培養(yǎng)20h，在麥康凱瓊脂平板上長出桃紅色或中心桃紅的菌落，在伊紅美藍瓊脂平板上長出紫黑色具有金屬光澤的菌落。營養(yǎng)瓊脂上均長出中等大小、半透明的露珠樣菌落，挑取典型菌落，固定于載玻片上，革蘭染色后鏡檢，觀察到革蘭氏陰性的小桿菌。

取純化培養(yǎng)的新鮮細菌依次接種于葡萄糖蛋白胨生化管、蛋白胨水生化管、枸櫞酸鹽生化管、葡萄糖、乳糖、麥芽糖、蔗糖、甘露醇發(fā)酵管、硫化氫生化管，35℃培養(yǎng)24h，取出。參考大腸艾希菌檢查法進行IMViC試驗，觀察并記錄試驗結(jié)果。結(jié)果顯示，分離到的細菌可分解葡萄糖、乳糖、麥芽糖、蔗糖、甘露醇，產(chǎn)酸產(chǎn)氣，VP試驗陰性，MR試驗陽性，不利用枸櫞酸鹽。

根據(jù)發(fā)病雞群的臨床癥狀、剖檢變化和試驗室診斷結(jié)果，該雞群為大腸桿菌病。

2.2發(fā)病雞只的判定標準及發(fā)病雞只挑選

發(fā)病雞的挑選標準如下：

有明顯拉稀癥狀雞只：觀察到拉稀或肛門周圍有糞便污染。

精神沉郁，羽毛松亂，驅(qū)趕雞群后可以走動。

上述2個發(fā)病標準符合其中一條即入選為病雞。驅(qū)趕不動、臥地不起的重病雞只不作為試驗雞只，進行淘汰。

根據(jù)上述標準，2棟雞舍共挑出發(fā)病雞只691只，其中A棟448只，B棟243只，發(fā)病雞群用網(wǎng)與正常雞群隔開。

2.3苦參功勞顆粒治療雞大腸桿菌病的臨床試驗

2.3.1受試動物分組及給藥

691只發(fā)病雞只，試驗前死亡16只，淘汰13只臥地不起的嚴重雞只，剩余662只用于試驗，A棟雞舍429只，B棟雞舍233只。

將A棟雞舍300只病雞分為A組（苦參功勞顆粒試驗組），62只為C組（感染對照組）；A棟剩余67只轉(zhuǎn)入B棟雞舍，與B棟雞舍233只合為B組（四黃止痢顆粒對照組）。挑出的發(fā)病雞用網(wǎng)隔開，單獨飼養(yǎng)。給藥組于20日齡時開始給藥，連用藥物5天，試驗動物分組與處理詳見表1。

2.3.2觀察指標

試驗期間，每天早上9：00觀察雞群的精神狀態(tài)（有無羽毛松亂、翅膀下垂、閉眼縮頸）、行為活動（給料后搶食、飲水）、對刺激的反應(yīng)性（雞群驅(qū)趕后的表現(xiàn)）、糞便狀態(tài)，記錄試驗雞群的臨床癥狀變化和死亡情況，對死亡雞只及時進行病理剖檢，觀察內(nèi)臟器官病理變化，并取肝臟、心臟等組織接種麥康凱瓊脂，觀察細菌生長情況，連續(xù)觀察至給藥結(jié)束14d。

2.3.3療效判定指標

2.3.3.1死亡率

試驗期間，出現(xiàn)死亡的雞只，經(jīng)剖檢有大腸桿菌典型癥狀，無菌采集死亡雞只肝臟、心臟，接種麥康凱培養(yǎng)基，分離到大腸桿菌者，判斷為大腸桿菌致死。

死亡率（%）=該組發(fā)病死亡雞只數(shù)/該組試驗雞只數(shù)×100%

2.3.3.2治愈率

有大腸桿菌發(fā)病癥狀的雞只經(jīng)飲水給藥后，臨床癥狀減輕，試驗結(jié)束時存活且未見精神沉郁、兩翅下垂、反應(yīng)遲鈍、離群呆立、排黃白色稀便等癥狀中2種或2種以上癥狀，判為治愈。

治愈率（%）=該組治愈雞只數(shù)/該組試驗雞只數(shù)×100%

2.3.3.3日均采食量

試驗期間，每天上午9：00按重量加入飼料，次日9：00稱取余料重量，并加入新的飼料，根據(jù)給料重量和余料重量，計算各組雞群的日均采食量。

2.3.3.4增重率

分別于試驗開始時和試驗結(jié)束時，稱取各組雞只總重，以試驗開始時和試驗結(jié)束時平均體重為指標，計算試驗期間各組雞群的增重率。

2.4數(shù)據(jù)處理

實驗數(shù)據(jù)用百分數(shù)表示，用卡方檢驗進行顯著性檢驗，各組之間顯著性用P值表示，其中0.01

3試驗結(jié)果

3.1苦參功勞顆粒對病雞臨床癥狀的影響

試驗期間，苦參功勞顆粒試驗組、四黃止痢顆粒對照組雞群經(jīng)給藥治療后，第3天雞群精神明顯好轉(zhuǎn)，給藥5d后除個別雞只外大群精神恢復(fù)正常。C組感染對照雞群在3d后癥狀明顯加重，死亡雞只明顯增多，雞群中部分雞只精神極度沉郁、翅膀下垂、閉目縮頸、食欲廢絕，臥地不起，最終死亡。

3.2苦參功勞顆粒對大腸桿菌病雞死亡率的影響

苦參功勞顆粒按1.0g/L劑量混飲治療后，從第3天開始死亡雞只數(shù)逐日減少，給藥5d后死亡停止。感染對照組從第3天起死亡率明顯增高，第8天后死亡率下降，12d后不再死亡。試驗期間的死亡雞只，剖檢可見肝臟腫大，表面覆蓋一層白色纖維素偽膜，氣囊增厚，渾濁，心臟有心包炎，心包內(nèi)有大量纖維素性滲出物。各組死亡率、治愈率結(jié)果詳見表2。

從表2可以看出，與感染對照組相比，苦參功勞顆粒試驗組雞群試驗期間死亡率極顯著降低（P≤0.01），四黃止痢顆粒對照組死亡率顯著降低（0.01

3.3苦參功勞顆粒對雞群采食量的影響

試驗期間，苦參功勞顆粒和四黃止痢顆粒組雞群給藥第2天，采食量即出現(xiàn)小幅度增加，從第3天起開始雞群采食量明顯增加。試驗期間，苦參功勞顆粒試驗組和四黃止痢顆粒對照組雞群從給藥后第3天開始，采食量高于感染對照組。其中，苦參功勞顆粒試驗組雞群采食量在一定程度上略高于四黃止痢顆粒對照組，給藥后14d，感染對照組與四黃止痢顆粒對照組日均采食量相當(dāng)。

從給藥當(dāng)天開始，試驗各組第1天、2天、3天、5天、7天、14天平均采食量見表3。

從表3可以看出，發(fā)病雞群給予苦參功勞顆粒后，雞群日均采食量高于感染對照組，說明苦參功勞顆?？商岣唠u群食欲，有增加采食量的作用。

3.4苦參功勞顆粒對雞群增重率的影響

試驗期間各組雞群稱重結(jié)果及增重情況見表4。

從表4可以看出，苦參功勞顆粒試驗組、四黃止痢顆粒對照組在試驗期間增重率分別為161.3%、146.7%，均高于感染對照組115.4%，說明苦參功勞顆粒在一定程度上對大腸桿菌病引起的雞只生長發(fā)育受阻具有改善作用。

4討論與分析

4.1發(fā)病雞的判斷標準

發(fā)生大腸桿菌病后，病雞表現(xiàn)精神沉郁，羽毛松亂，兩翅下垂，閉眼縮頸，拉稀，肛門周圍有糞便污染。嚴重感染病雞離群呆立，臥地不起，驅(qū)趕無反應(yīng)，解剖后出現(xiàn)心包炎、肝周炎、氣囊炎等癥狀，因這部分病雞心臟、肝臟功能嚴重受損，雞只瀕臨死亡，藥物未發(fā)揮作用時雞只可能已經(jīng)死亡，治療意義不大，故不把其納入試驗雞只。因此僅把拉稀和精神沉郁作為挑選雞只的標準，設(shè)定發(fā)病雞的挑選標準如下：

有明顯拉稀癥狀雞只：觀察到拉稀或肛門周圍有糞便污染。

（2）精神沉有B，羽毛松亂，驅(qū)趕雞群后可以走動。

4.2苦參功勞顆粒對雞群采食量和增重率的影響

發(fā)病雞群投喂苦參功勞顆粒后，雞群日均采食量和試驗期間的總增重高于感染對照組，說明苦參功勞顆粒對雞群感染大腸桿菌后的采食量下降、增重受阻具有抵抗作用?？赡艿脑蚴请u群應(yīng)用中藥治療后，中藥的整體調(diào)理作用使雞群代謝功能得以恢復(fù)，苦參功勞顆粒中含有木香，木香具有行氣止痛、健脾和胃，可用于治療脾胃氣滯等諸癥。機體在感染濕熱病邪后，氣機不暢，運化功能失常，出現(xiàn)食欲下降，腹瀉，消瘦等癥狀。木香行氣健脾，提升機體采食量，提高飼料轉(zhuǎn)化率，故給藥組日均采食量和總增重高于感染對照組。

5結(jié)論

苦參功勞顆粒按1.0g/L劑量飲水，連用5d，能減少大腸桿菌病引起的雞只死亡，同時對疾病引起的采食量降低、生長發(fā)育受阻具有改善作用。本試驗為苦參功勞顆粒的臨床應(yīng)用提供了數(shù)據(jù)支持，同時建立了雞大腸桿菌病的病例入選標準、療效判定標準，為新獸藥的臨床評價的提供參考方法。