范迎春 卓著 李瀟 趙立飛 盧靜海

勝利油田勝利醫(yī)院1檢驗科，5心內(nèi)科（山東東營 257055）；臨沂市第三人民醫(yī)院2心血管內(nèi)科，3內(nèi)三科（山東臨沂 276023）；4臨沂市經(jīng)濟開發(fā)區(qū)人民醫(yī)院檢驗科（山東臨沂 276000）

冠心?。╟oronary heart disease，CHD）是發(fā)病率和病死率較高的一種心血管疾病，患者因冠脈狹窄或阻塞導致心肌供血嚴重不足，從而引發(fā)一些列并發(fā)癥，是嚴重威脅人類生命健康的慢性疾病之一［1］。冠狀動脈側(cè)支循環(huán)是冠脈主干嚴重狹窄或阻塞時，由其分支發(fā)出的血流供應(yīng)，對冠心病臨床治療及預(yù)后有重要意義［2］。研究［3］報道，良好的冠脈側(cè)支循環(huán)與冠心病患者臨床癥狀及預(yù)后直接相關(guān)。冠脈側(cè)支循環(huán)形成過程復(fù)雜，研究影響側(cè)支循環(huán)形成的因素將會對冠心病治療提供思路。近年來研究［4］表明miR-17與冠心病內(nèi)皮細胞氧化應(yīng)激反應(yīng)密切相關(guān)，調(diào)控miR-17表達有助于改善患者血流供應(yīng)。因此，本研究通過檢測不同冠脈病變程度及不同側(cè)支循環(huán)患者血清miR-17、25（OH）D3、Ox-LDL水平，分析miR-17與患者冠脈病變、側(cè)支循環(huán)形成及25（OH）D3、Ox-LDL的關(guān)系，以期為臨床有效治療冠心病提供新思路。

1 資料與方法

1.1一般資料選擇2014年3月至2017年10月在心內(nèi)科確診的157例穩(wěn)定性冠心病患者作為研究對象，其中男89例，女68例，年齡53～82歲，平均（68.51±14.36）歲。另選同時期體檢健康者100例作為對照組，其中男63例，女37例，年齡51～80歲，平均（66.93±12.84）歲。兩組性別、年齡等一般資料比較差異無統(tǒng)計學意義（P＞0.05）。病例組納入標準：（1）均符合中華醫(yī)學會心血管病學分會《慢性穩(wěn)定性心絞痛診斷與治療指南》中診斷標準［5］；（2）經(jīng)冠狀動脈造影顯示至少一支冠狀動脈主血管（左主干、左前降支、左回旋支、右冠狀動脈）狹窄＞50%；（3）患者及其家屬對本研究知情并簽署同意書；（4）經(jīng)醫(yī)院倫理委員會批準。排除標準：（1）有既往冠狀動脈旁路移植術(shù)或介入治療病史；（2）嚴重心功能不全、心臟瓣膜病等心血管疾??；（3）合并嚴重肝功能不全、急或慢性感染性及炎癥性疾病；（4）合并惡性腫瘤及血液系統(tǒng)疾病；（5）臨床資料不全影響臨床疾病診斷。

1.2方法

1.2.1病例分組（1）冠狀動脈狹窄程度分組：采用SYNTAX評分評估患者冠狀動脈狹窄程度，并根據(jù)SYNTAX評分將患者分為冠狀動脈病變重度組、中度組和輕度組。該評分包括優(yōu)勢類型、累及節(jié)段、病變支數(shù)及病變不良特征4部分，每部分評分之和為SYNTAX評分，評分標準參考（www.SYNTAXscoe.com），定義＞33分為重度組，23～32分為中度組，0～22分為輕度組。（2）冠狀動脈側(cè)支循環(huán)分組：采用Rentrop法進行冠狀動脈側(cè)支循環(huán)情況分級，無側(cè)支循環(huán)為0級，側(cè)支血管直徑＜1 mm，緩慢充盈為1級，側(cè)支血管顯影速度介于緩慢和正常之間為2級，側(cè)支血管直徑＞1 mm，迅速顯影接近正常為3級。定義0～1級為側(cè)支循環(huán)不良組，2～3級為良好組。

1.2.2血清指標檢測分別采集患者空腹時肘靜脈血5 mL，采用試劑盒法提取血清總RNA，RTPCR檢測血清miR-17相對表達量，試劑盒均購于天根生化科技（北京）有限公司。采用酶聯(lián)免疫吸附法（ELISA）檢測血清25羥基維生素D3［25（OH）D3］水平和氧化修飾低密度脂蛋白（Oxidized lowdensity lipoprotein，Ox-LDL）水平，人25（OH）D3、Ox-LDL ELISA試劑盒均購于森貝伽（南京）生物科技有限公司。

1.3統(tǒng)計學方法統(tǒng)計學軟件SPSS 22.0用于本研究數(shù)據(jù)統(tǒng)計分析，計量資料表示為標準差±均數(shù)，單因素方差分析用于多組之間比較，配對t檢驗用于兩兩比較，Pearson相關(guān)系數(shù)法用于相關(guān)性分析，以P＜0.05表示差異有統(tǒng)計學意義。

2 結(jié)果

2.1對照組和病例組血清指標比較與對照組相比，病例組血清miR-17相對表達量Ox-LDL水平升高，25（OH）D3水平降低，兩組血清 miR-17、Ox-LDL、25（OH）D3水平比較差異有統(tǒng)計學意義（P＜0.05）。見表1。

表1 對照組和病例組血清指標比較Tab.1 Comparison of serum indexes between control group and case group ± s

表1 對照組和病例組血清指標比較Tab.1 Comparison of serum indexes between control group and case group ± s

組別對照組病例組t值P值例數(shù)100 157 miR-17相對表達量0.76±0.24 1.33±0.41 12.591 0.000 Ox-LDL（μg/dL）31.46±9.63 69.83±14.25 23.692 0.000 25（OH）D3（ng/mL）15.62±4.87 6.73±2.13 20.072 0.000

2.2不同冠狀動脈狹窄程度組臨床資料比較病例組冠心病患者冠狀動脈狹窄輕度組、中度組和重度組性別、年齡、體質(zhì)量、高血壓史、糖尿病史及血清總膽固醇、甘油三酯等一般臨床資料比較差異均無統(tǒng)計學意義（P＞0.05），具有可比性。見表2。

表2 不同冠狀動脈狹窄程度組一般臨床資料比較Tab.2 Comparison of clinical data of different coronary artery stenosis groups ± s

表2 不同冠狀動脈狹窄程度組一般臨床資料比較Tab.2 Comparison of clinical data of different coronary artery stenosis groups ± s

組別輕度組中度組重度組χ2/F值P值例數(shù)52 61 44性別（男/女）27/25 29/32 33/11 1.836 0.399年齡（歲）68.74±14.19 67.93±13.62 69.04±15.08 0.088 0.916體質(zhì)量（kg）70.32±16.61 69.81±15.39 71.10±17.42 0.079 0.924高血壓史［例（%）］41（78.84）49（80.32）36（81.82）0.133 0.936糖尿病史［例（%）］25（48.08）29（47.54）23（52.27）0.258 0.879總膽固醇（mmol/L）3.99±1.15 4.11±1.24 4.18±1.31 0.297 0.743甘油三酯（mmol/L）1.05±0.29 1.10±0.32 1.17±0.37 1.624 0.201

2.3不同冠狀動脈側(cè)支循環(huán)程度組臨床資料比較病例組冠心病患者冠狀動脈側(cè)支循環(huán)良好組和不良組性別、年齡、體質(zhì)量、高血壓史、糖尿病史及血清總膽固醇、甘油三酯等一般臨床資料比較差異均無統(tǒng)計學意義（P＞0.05），具有可比性。見表3。

表3 不同冠狀動脈側(cè)支循環(huán)程度組一般臨床資料比較Tab.3 Comparison of clinical data of different coronary artery collateral circulation degree groups ± s

表3 不同冠狀動脈側(cè)支循環(huán)程度組一般臨床資料比較Tab.3 Comparison of clinical data of different coronary artery collateral circulation degree groups ± s

組別良好組不良組t值P值例數(shù)82 75性別（男/女）42/40 47/28 2.091 0.148年齡（歲）68.14±13.92 68.91±14.23 0.787 0.432體質(zhì)量（kg）70.28±16.92 70.41±17.33 0.048 0.962高血壓史［例（%）］62（75.61）64（85.33）2.337 0.126糖尿病史［例（%）］37（45.12）40（53.33）1.057 0.304總膽固醇（mmol/L）4.03±1.30 4.15±1.36 0.565 0.573甘油三酯（mmol/L）1.07±0.28 1.14±0.33 1.437 0.153

2.4不同冠狀動脈狹窄程度組SYNTAX評分和血清指標水平不同冠狀動脈狹窄程度組之間血清miR-17、Ox-LDL、25（OH）D3水平比較差異有統(tǒng)計學意義（P＜0.05）；重度組和中度組血清miR-17、Ox-LDL水平顯著高于輕度組（P＜0.05），重度組血清miR-17、Ox-LDL水平顯著高于中度組（P＜0.05）；重度組和中度組血清25（OH）D3水平顯著低于輕度組（P＜0.05），重度組血清25（OH）D3水平顯著低于中度組（P＜0.05）。見表4。

表4 不同冠狀動脈狹窄程度組SYNTAX評分和血清指標水平比較Tab.4 Comparison of SYNTAX score and serum index in different degree of coronary artery stenosis ± s

表4 不同冠狀動脈狹窄程度組SYNTAX評分和血清指標水平比較Tab.4 Comparison of SYNTAX score and serum index in different degree of coronary artery stenosis ± s

組別輕度組中度組重度組F值P值例數(shù)52 61 44 SYNTAX評分20.39±6.65 28.42±9.17 37.67±11.25 43.005 0.000 miR-17相對表達量1.14±0.31 1.29±0.40 1.61±0.52 15.986 0.000 Ox-LDL（μg/dL）58.94±13.22 70.57±15.42 81.67±17.36 26.353 0.000 25（OH）D3（ng/mL）7.39±2.21 6.74±2.05 5.93±1.83 6.064 0.003

2.5不同冠狀動脈側(cè)支循環(huán)程度組血清指標水平不同冠脈側(cè)支循環(huán)程度組血清miR-17、Ox-LDL、25（OH）D3水平比較差異有統(tǒng)計學意義（P＜0.05）；不良組血清miR-17、Ox-LDL水平顯著高于良好組（P＜0.05），血清25（OH）D3水平顯著低于良好組（P＜0.05）。見表5。

2.6病例組miR-17與SYNTAX評分、Rentrop分級及Ox-LDL、25（OH）D3水平的關(guān)系病例組血清miR-17水平與SYNTAX評分呈顯著正相關(guān)關(guān)系（r=0.653，P=0.000），與Rentrop分級呈顯著負相關(guān)關(guān)系（r=-0.624，P=0.000），與Ox-LDL水平呈顯著正相關(guān)關(guān)系（r=0.711，P=0.000），與25（OH）D3水平呈顯著負相關(guān)關(guān)系（r=-0.735，P=0.000）。見表6。

表5 不同冠狀動脈側(cè)支循環(huán)程度組血清指標水平比較Tab.5 Comparison of serum indexes in different degree of collateral circulation of coronary artery ± s

表5 不同冠狀動脈側(cè)支循環(huán)程度組血清指標水平比較Tab.5 Comparison of serum indexes in different degree of collateral circulation of coronary artery ± s

組別良好組不良組t值P值例數(shù)82 75 miR-17相對表達量1.12±0.33 1.56±0.49 6.649 0.000 Ox-LDL（μg/dL）61.12±13.66 79.35±16.99 7.442 0.000 25（OH）D3（ng/mL）7.42±2.22 5.98±1.83 4.411 0.000

表6 病例組血清指標之間及與SYNTAX評分和Rentrop分級的相關(guān)性Tab.6 correlation between serum indexes in case group and SYNTAX score and Rentrop classification

3 討論

miR-17家族是高度保守的成熟miRNA，研究表明，miR-17大量存在于內(nèi)皮細胞中，在腫瘤組織中抑制其表達可促進內(nèi)皮細胞外周血管生成［6］。近年來研究［7］表明，miR-17-5p作為冠脈粥樣硬化新的生物標志物，與冠脈粥樣硬化嚴重程度有關(guān)。但其冠心病冠脈側(cè)支循環(huán)形成之間的關(guān)系尚未見報道。本研究結(jié)果，病例組血清miR-17水平顯著高于對照組，冠脈病變重度組和中度組顯著高于輕度組，重度組顯著高于中度組，說明隨患者冠脈狹窄程度加重血清miR-17水平呈明顯升高趨勢，與前人研究結(jié)果一致。相關(guān)性分析結(jié)果，病例組血清miR-17水平與SYNTAX評分呈顯著正相關(guān)關(guān)系，說明血清miR-17水平可能是冠脈病變的危險因素。臨床研究表明，超過25%患者在冠脈狹窄供血不足的刺激下都會產(chǎn)生周邊小血管，代償性改善缺血區(qū)域血流供應(yīng)［8］。但其血管再生非常緩慢，MEYER等［9］研究表明血管內(nèi)皮生長因子可作為血管再生的誘導因子，促進血管再生，有效改善局部血流灌注。因此，尋找誘導心肌新生血管生成即冠脈側(cè)支循環(huán)形成的潛在靶點，可能對提高冠心病治療效率具有重要意義。本研究采用Rentrop法將患者冠狀動脈側(cè)支循環(huán)情況進行分級，結(jié)果冠脈側(cè)支循環(huán)不良組血清miR-17水平顯著高于良好組，相關(guān)性分析結(jié)果，miR-17水平與Rentrop分呈顯著負相關(guān)關(guān)系，說明血清miR-17水平越高，冠脈側(cè)支循環(huán)形成越緩慢或無循環(huán)。提示miR-17基因干預(yù)治療可能有助于冠心病患者冠脈側(cè)支循環(huán)形成，有助于改善患者心肌缺血狀況。

Ox-LDL是機體氧化應(yīng)激反應(yīng)過程中的產(chǎn)物，臨床研究已證實，Ox-LDL誘發(fā)的一系列病理生理變化是導致冠脈粥樣硬化形成的關(guān)鍵［10］。同時高表達Ox-LDL能夠促進內(nèi)皮細胞分泌白細胞介素等炎性因子，影響內(nèi)皮細胞代謝并損傷內(nèi)皮細胞，加重冠脈病變［11］。本研究結(jié)果，病例組血清Ox-LDL水平顯著高于對照組，且隨冠脈病變程度加重呈升高趨勢，與患者側(cè)支不良循環(huán)形成有關(guān)，相關(guān)性分析表明，病例組血清miR-17與Ox-LDL呈顯著正相關(guān)，間接說明血清miR-17水平與患者冠脈狹窄及內(nèi)皮功能損傷密切相關(guān)。25（OH）D3是維生素D3在體內(nèi)的活化形式，屬于類固醇激素，主要參與調(diào)節(jié)機體鈣磷代謝平衡，近年來研究表明，25（OH）D3還具有延緩大動脈重構(gòu)與硬化、保護血管內(nèi)皮功能的作用［12］。VERDOIA等［13］研究表明，維生素D含量與血紅蛋白、血小板計數(shù)、低密度脂蛋白膽固醇以及甘油三酯直接相關(guān)，維生素D缺乏與較高的冠心病患病率和嚴重冠狀動脈病變顯著相關(guān)，提示25（OH）D3可能通過調(diào)節(jié)內(nèi)皮功能、血小板功能，潛在調(diào)節(jié)動脈血栓形成。國外相關(guān)研究［14］表明，與健康者比較，冠心病心肌梗死患者幾乎都存在明顯25（OH）D3缺乏或不足。國內(nèi)也有相似研究，如李暉等［15］研究表明，冠狀動脈狹窄患者血清25（OH）D3水平顯著低于正常者，低水平25（OH）D3與患者冠脈狹窄程度有關(guān)。張世袍等［16］分別比較冠脈重度狹窄、中度狹窄和輕度狹窄患者與健康者血清25（OH）D3水平，結(jié)果冠脈狹窄患者血清25（OH）D3水平顯著低于健康者，且冠脈嚴重狹窄者血清25（OH）D3水平顯著低于中度和輕度狹窄者，低水平25（OH）D3水平與冠脈狹窄程度有明顯負相關(guān)關(guān)系。本研究結(jié)果，病例組血清25（OH）D3水平顯著低于對照組，冠脈病變重度組和中度組顯著低于輕度組，重度組顯著低于中度組，說明隨患者冠脈狹窄程度加重血清25（OH）D3水平呈明顯下降趨勢，與李暉等研究結(jié)果一致。進一步相關(guān)性分析結(jié)果，病例組血清miR-17與25（OH）D3水平呈顯著負相關(guān)關(guān)系，提示抑制miR-17表達可能有助于改善患者25（OH）D3缺乏，有助于病情改善。

綜上所述，血清miR-17水平與冠脈病變程度、冠脈側(cè)支循環(huán)形成及Ox-LDL、25（OH）D3水平密切相關(guān)，本研究不足之處在于樣本量較小，無法進行進一步的分層分析，下一步將在擴大樣本量的基礎(chǔ)上繼續(xù)深入探討miR-17在改善冠心病冠脈狹窄程度、刺激冠脈側(cè)支循環(huán)形成，改善血流供應(yīng)中的作用機制。