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(江西省農(nóng)業(yè)科學(xué)院農(nóng)產(chǎn)品質(zhì)量安全與標(biāo)準(zhǔn)研究所，江西南昌 330200)

氯硝柳胺是WHO推薦使用的滅螺藥，其殺螺效果較好，但對(duì)魚類和兩棲類動(dòng)物毒性較大[1 - 4 ]。目前我國(guó)血吸蟲病流行區(qū)廣泛使用該藥進(jìn)行滅螺，從而引發(fā)附近水域的水生動(dòng)物急性死亡事件增多[5]。因此，加強(qiáng)對(duì)長(zhǎng)期使用氯硝柳胺水域跟蹤分析及監(jiān)控，建立具有操作簡(jiǎn)單、綠色環(huán)保以及成本低等優(yōu)點(diǎn)的環(huán)境水樣中氯硝柳胺的分析方法十分重要。目前對(duì)環(huán)境中氯硝柳胺的測(cè)定常采用化學(xué)顯色檢測(cè)法[6]、紫外-可見(jiàn)分光光度法[7]、電化學(xué)法[8 - 9]、高效液相色譜(HPLC) 法[10 - 11]、高效液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜(HPLC-MS/MS)法[12 - 14]等。前三種方法操作便捷，但專屬性不強(qiáng)，而后兩種方法需要較為復(fù)雜前處理過(guò)程、但專屬性和靈敏度較高，尤其是HPLC-MS/MS法。

懸浮固化分散液液微萃取(DispersiveLiquid-liquidMicroextractionBasedonSolidificationofFloatingOrganicDroplet，DLLME-SFO) 方法的出現(xiàn)簡(jiǎn)化了樣品前處理過(guò)程，結(jié)合了懸浮固化萃取[15]和分散液液微萃取[16]的優(yōu)點(diǎn)，萃取劑毒性低且低溫下容易凝固，易于收集，方法萃取時(shí)間短，操作簡(jiǎn)單。此方法已成功用于水樣中有機(jī)污染物的測(cè)定[17 - 20]。本研究將懸浮固化分散液液微萃取與LC-MS/MS聯(lián)用，建立了測(cè)定水樣中氯硝柳胺的分析方法，并應(yīng)用于湖水和池塘水等實(shí)際樣品分析，獲得較好的結(jié)果。

1 實(shí)驗(yàn)部分

1.1 儀器與試劑

Agilent1290高效液相色譜-Agilent6495QQQ串聯(lián)質(zhì)譜儀(美國(guó)，安捷倫公司)， 配有電噴霧離子源；CR22GIII高速冷凍離心機(jī)(日本，Hitachi公司)；IKAMS3數(shù)顯型旋渦混合器(德國(guó)，IKA公司)。

氯硝柳胺標(biāo)準(zhǔn)品(Sigma公司)溶液：稱取10mg氯硝柳胺標(biāo)準(zhǔn)品(精確到0.1mg)于10.0mL容量瓶中，用甲醇溶解并定容。甲醇、乙腈為色譜純?cè)噭?Burdick&Jackson公司)；NaCl、十一醇、1-十二醇和2-十二醇為分析純(國(guó)藥集團(tuán)化學(xué)試劑有限公司)。 實(shí)驗(yàn)用水為美國(guó)Millipore公司純水機(jī)制備的超純水。

1.2 LC-MS/MS分析條件

液相色譜條件：色譜柱為AgilentEclipsePlusC18柱(50×2.1mm,1.8μm)；柱溫40℃；流速為0.4mL/min；進(jìn)樣量為5.0μL。 流動(dòng)相：A為水；B為甲醇。梯度洗脫：0～4min,40%B線性變化至100%B；4～5min，保持100%B；5～5.1min降為40%B；5.1～6.0min，維持40%B。

質(zhì)譜條件:電噴霧電離、負(fù)離子模式， 毛細(xì)管電壓3000V，多反應(yīng)監(jiān)測(cè)條件：母離子(m/z)為324.9，子離子(m/z)分別為288.9、170.9，相應(yīng)的碰撞能量為15、30eV。

1.3 水樣的萃取

移取水樣10.0mL于15mL具塞刻度離心管中，將100μL1-十二醇溶于500μL甲醇中，然后用1mL移液槍迅速注入離心管中，50℃超聲5min，以4500r/min轉(zhuǎn)速離心2min，萃取劑在液面成漂浮液珠。將離心管置于-20℃中冷卻2min，萃取劑即凝成固體沾附在管壁上。傾倒出水溶液，用干凈的濾紙吸干管壁上的水分。升溫將1-十二醇固體移至離心管底部，加入100μL甲醇復(fù)溶，渦旋均勻后，供LC-MS/MS測(cè)定。

2 結(jié)果與討論

2.1 萃取條件的優(yōu)化

以含0.1μg/L氯硝柳胺的實(shí)際水樣為萃取對(duì)象，通過(guò)測(cè)定萃取后氯硝柳胺峰面積來(lái)優(yōu)化萃取條件。

2.1.1萃取劑的影響十一醇(熔點(diǎn)19 ℃)、1-十二醇(熔點(diǎn)24 ℃)、2-十二醇(熔點(diǎn)19 ℃)作為萃取劑，都能夠有效富集氯硝柳胺，但實(shí)驗(yàn)發(fā)現(xiàn)十一醇和2-十二醇在凝固后，部分固體破碎懸浮在液面上，固液分離不徹底，導(dǎo)致重現(xiàn)性較差，1-十二醇形成完整的薄層懸浮在液面上。因而，1-十二醇為最佳萃取劑。

在50.0～200.0 μL范圍內(nèi)，隨著1-十二醇用量的增加，氯硝柳胺的峰面積逐漸增加，100.0 μL時(shí)達(dá)最大值，然后變化不大。因而，100.0 μL 1-十二醇作為萃取劑用量。

2.1.2分散劑的影響1-十二醇難溶于水，在水中分散性差，加入與二者相溶的分散劑，有助于加速氯硝柳胺在兩相中分配，提高萃取效率。甲醇、乙醇、丙酮及乙腈作為分散劑時(shí)，甲醇分散效果好，萃取效率最高。在200.0～1 500.0 μL范圍內(nèi)，隨著甲醇用量增加氯硝柳胺的峰面積逐漸增大，500 μL時(shí)達(dá)到最大。因此，甲醇用量選500.0 μL。

2.1.3萃取時(shí)間的影響在萃取時(shí)間1 min到10 min范圍內(nèi)，隨著萃取時(shí)間的增加，萃取效率有所增加，但不顯著，在5 min時(shí)達(dá)到最大。實(shí)驗(yàn)表明，溫度升高，會(huì)加速萃取過(guò)程，縮短萃取時(shí)間，有利于氯硝柳胺從水相向有機(jī)相擴(kuò)散，但是溫度太高導(dǎo)致萃取體系不穩(wěn)定，最佳萃取溫度選為50 ℃。

圖1 pH對(duì)萃取效率的影響Fig.1 Effect of pH on extraction efficiency

2.1.4水樣pH值的影響水樣的pH 值對(duì)氯硝柳胺萃取的影響的如圖1所示。水樣pH 值為5.0～7.0 時(shí)，氯硝柳胺的峰面積最大。當(dāng)水樣pH值小于5.0時(shí)，氯硝柳胺會(huì)部分離子化，增加在水中的溶解，而pH值大于8.0時(shí)，氯硝柳胺會(huì)部分降解，從而降低萃取效率。通常，水樣中pH值在5.0～7.0范圍內(nèi)，因此不調(diào)節(jié)樣品pH值。

2.2 方法的線性范圍、精密度及檢出限

在優(yōu)化條件下，氯硝柳胺在濃度0.1～20.0 μg/L 范圍內(nèi)顯示出較好的線性關(guān)系，線性相關(guān)系數(shù)為0.9961，其線性方程為：y=48 031c+69 513.6(y為氯硝柳胺峰面積；c為氯硝柳胺濃度，μg/L)，以3 倍信噪比計(jì)算得氯硝柳胺的檢出限為2.0 ng/L，連續(xù)6 次進(jìn)樣1.0 μg/L氯硝柳胺溶液，其峰面積的相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差為1.4%。

2.3 環(huán)境水樣中氯硝柳胺的測(cè)定

在優(yōu)化的條件下，對(duì)32個(gè)鄱陽(yáng)湖水樣和25個(gè)池塘水樣中氯硝柳胺進(jìn)行分離分析，在4個(gè)池塘水樣和3個(gè)鄱陽(yáng)湖水樣發(fā)現(xiàn)有氯硝柳胺殘留，其含量在0.54～1.45 μg/L范圍之間。在未檢出氯硝柳胺的池塘水樣和鄱陽(yáng)湖水樣中，分別添加0.02 μg/L、0.05 μg/L和0.1 μg/L濃度的氯硝柳胺，結(jié)果見(jiàn)表1，加標(biāo)平均回收率為94.2%～102.3%，相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差(RSD)為 3.4%～5.6%。

表1 水樣中氯硝柳胺的添加回收結(jié)果(n=6)

3 結(jié)論

本文建立了環(huán)境水樣中氯硝柳胺含量分析方法，采用懸浮固化萃取及分散液液微萃取，操作簡(jiǎn)單、快速，萃取溶劑少且無(wú)毒。2.0 ng/L的檢測(cè)限顯示方法具有高靈敏度，實(shí)際水樣分析和添加回收試驗(yàn)也表明方法可行性。