宋垚萱， 高天翔， 楊天燕， 韓志強(qiáng)， 宋 娜? ?

(1. 中國(guó)海洋大學(xué)水產(chǎn)學(xué)院，山東 青島 266003； 2. 浙江海洋大學(xué)水產(chǎn)學(xué)院，浙江 舟山 316022)

角木葉鰈的群體遺傳多樣性研究和形態(tài)學(xué)分析?

宋垚萱1， 高天翔2， 楊天燕2， 韓志強(qiáng)2， 宋 娜1? ?

(1. 中國(guó)海洋大學(xué)水產(chǎn)學(xué)院，山東 青島 266003； 2. 浙江海洋大學(xué)水產(chǎn)學(xué)院，浙江 舟山 316022)

角木葉鰈(Pleuronichthyscornutus)是中國(guó)近海重要的經(jīng)濟(jì)魚(yú)類，本研究基于線粒體DNA控制區(qū)第一高變區(qū)部分序列，對(duì)采自青島和舟山近海的角木葉鰈群體進(jìn)行遺傳多樣性研究。線粒體DNA控制區(qū)序列分析顯示：舟山和青島兩群體均呈現(xiàn)較高的單倍型多樣度和較低的核苷酸多樣度；單倍型鄰接關(guān)系樹(shù)與最小跨度樹(shù)均顯示青島、舟山兩個(gè)群體個(gè)體相互混雜，無(wú)顯著的分支；群體間遺傳分化指數(shù)(FST=0.027 6；P=0.030 3)揭示了兩群體之間存在微弱的遺傳分化；TaJima’sD中性檢驗(yàn)和貝葉斯天際線分析的結(jié)果顯示角木葉鰈群體可能經(jīng)歷過(guò)近期擴(kuò)張事件?；A(chǔ)形態(tài)學(xué)特征測(cè)量結(jié)果表明，舟山群體的可量性狀比值，如體長(zhǎng)/尾柄高、體長(zhǎng)/頭長(zhǎng)、體長(zhǎng)/有(無(wú))眼側(cè)胸鰭長(zhǎng)等均略高于青島群體，其中體長(zhǎng)/有(無(wú))眼側(cè)胸鰭長(zhǎng)差異顯著。

角木葉鰈；線粒體DNA控制區(qū)；遺傳多樣性；形態(tài)學(xué)；青島群體；舟山群體

角木葉鰈(Pleuronichthyscornutus)隸屬鰈形目(Pleuronectiformes)鰈科(Pleuronectidea)木葉鰈屬(Pleuronichthys)，是暖溫性近岸底層魚(yú)類。在我國(guó)，角木葉鰈主要分布在渤海、黃海和東海海域，在日本和朝鮮的沿海也較為常見(jiàn)。角木葉鰈營(yíng)養(yǎng)價(jià)值較高，是食用性的海洋經(jīng)濟(jì)魚(yú)類[1]。歷史上，角木葉鰈是我國(guó)沿海漁民的重要漁獲對(duì)象，但近些年因受海水污染和富營(yíng)養(yǎng)化、過(guò)度捕撈(過(guò)密漁具使用)及產(chǎn)卵場(chǎng)遭到破壞等影響[2]，野生角木葉鰈的資源正在迅速的衰退。

魚(yú)類群體遺傳多樣性的研究是評(píng)估種質(zhì)資源現(xiàn)狀、制定野生群體保護(hù)策略的重要前提，并作為管理野生漁業(yè)和其他海洋生物的輔助工具達(dá)50年[3]。為了合理保護(hù)與利用角木葉鰈這一重要的漁業(yè)資源，開(kāi)展對(duì)角木葉鰈的種質(zhì)資源及遺傳多樣性現(xiàn)狀的研究尤為重要。分子生物技術(shù)的發(fā)展為揭示海洋物種的系統(tǒng)進(jìn)化關(guān)系、探討種下水平的微進(jìn)化研究提供技術(shù)支持[4]。其中，分子標(biāo)記是檢測(cè)物種遺傳多樣性和遺傳結(jié)構(gòu)的有效方法[5-6]。線粒體DNA序列作為核外遺傳物質(zhì)，具有結(jié)構(gòu)簡(jiǎn)單、基因排列緊湊和母系遺傳等特點(diǎn)，在過(guò)去的十幾年中已經(jīng)被廣泛應(yīng)用于動(dòng)物分子系統(tǒng)發(fā)育和群體遺傳學(xué)的研究[7-10]。而線粒體DNA控制區(qū)具有很高的核苷酸替換速率，其進(jìn)化速率約是線粒體DNA蛋白質(zhì)編碼基因的2～5倍[11]，更適合作為海洋魚(yú)類群體遺傳學(xué)研究的分子標(biāo)記[12]。

目前關(guān)于鰈類的形態(tài)與地理分布等方面的研究較多，如圓斑星鰈(Veraspervariegatus)[13]、鈍吻黃蓋鰈(Pleuronectesyokohamae)[14]、星斑川鰈(Platichthysstellatus)[15]等，高眼鰈(Cleisthenesherzensteini)[16]、角木葉鰈[17]等遺傳多樣性方面研究也有的相關(guān)報(bào)道。本研究基于mtDNA控制區(qū)第一高變區(qū)序列對(duì)角木葉鰈兩個(gè)群體的遺傳多樣性、遺傳結(jié)構(gòu)和歷史動(dòng)態(tài)進(jìn)行了研究，以豐富這一經(jīng)濟(jì)物種的相關(guān)遺傳學(xué)資料，為其資源合理利用和管理提供理論依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 樣品采集、形態(tài)測(cè)定與樣品保存

本研究所用角木葉鰈樣品分別采自浙江舟山和山東青島近海，各30尾。經(jīng)形態(tài)學(xué)鑒定以后，對(duì)其可數(shù)性狀直接計(jì)數(shù)。用直尺(精確到0.1 cm)測(cè)量可量性狀體寬、體長(zhǎng)、全長(zhǎng)、頭長(zhǎng)、尾柄長(zhǎng)、尾柄高、有眼側(cè)胸鰭長(zhǎng)、無(wú)眼側(cè)胸鰭長(zhǎng)、尾鰭長(zhǎng)；用游標(biāo)卡尺(精確到0.01cm)測(cè)量眼徑、眼間距、上頜長(zhǎng)。用電子天平(精確到0.1g)測(cè)量樣品重量。將2個(gè)群體的10個(gè)形態(tài)指標(biāo)比值變量(A-I)進(jìn)行T檢驗(yàn)分析。測(cè)量方法按照Meng等[18]的方法進(jìn)行，數(shù)據(jù)分析在Excel中完成。傳統(tǒng)形態(tài)測(cè)量實(shí)驗(yàn)完成以后，取背部肌肉于95%酒精中保存?zhèn)溆谩?/p>

1.2 DNA提取和目的基因擴(kuò)增

取角木葉鰈背部肌肉組織，采用標(biāo)準(zhǔn)酚—氯仿方法[19]提取基因組DNA，4℃保存?zhèn)溆谩＝悄救~鰈控制區(qū)高變區(qū)序列擴(kuò)增引物為CR-s：5’-CCCACCACTAACTCCCAAAGC-3’和CR-r：5’-CTGGAAAGAACGCCCGGCATG-3’。PCR反應(yīng)在熱循環(huán)儀(Biometra)上進(jìn)行，PCR反應(yīng)總體積為25.0 μL，其中：17.5 μL雙蒸水，2.5 μL10×Buffer，2 μL dNTP，0.15 μLTaq酶，正反向引物各1 μL和1 μL模板DNA。PCR反應(yīng)程序?yàn)椋?4℃預(yù)變性5 min，94 ℃變性45 s，49 ℃退火45 s，72 ℃延伸45 s，35個(gè)循環(huán)，最后72℃延伸10 min，4℃保存。同時(shí)設(shè)陰性對(duì)照以排除DNA模板被污染的情況。取1～2 μL PCR擴(kuò)增產(chǎn)物進(jìn)行1%瓊脂糖凝膠電泳檢測(cè)。將檢測(cè)合格的PCR產(chǎn)物送至英濰捷基有限公司切膠純化，并在自動(dòng)測(cè)序儀(ABI3730DNA)上進(jìn)行雙向測(cè)序。

1.3 目的基因序列分析

利用DNAStar(DNASTAR，Inc)軟件對(duì)已獲取的角木葉鰈兩群體的序列進(jìn)行比對(duì)，并根據(jù)序列峰圖輔以人工校正；2個(gè)群體的堿基組成、變異位點(diǎn)、轉(zhuǎn)換/顛換值、單倍型多樣度性等相關(guān)參數(shù)由Arlequin3.0[20]軟件分析；利用J Modeltest[21]軟件計(jì)算得到適合角木葉鰈控制區(qū)片段的核苷酸最佳替換模型；以同屬的長(zhǎng)木葉鰈為外群，采用鄰接法(Neighbor-Joining; NJ)[22]重建單倍型序列鄰接關(guān)系樹(shù)，其中NJ分析利用MEGA4.0[23]軟件采用1 000次自展分析檢驗(yàn)各節(jié)點(diǎn)的置信度；此外，由Arlequin3.0軟件輸出單倍型之間的關(guān)系，并根據(jù)結(jié)果構(gòu)建最小跨度樹(shù)(Minimum spanning tree; MST)分析種內(nèi)單倍型之間關(guān)系。采用Tajima’sD和Fu’sFs檢驗(yàn)分析種群歷史動(dòng)態(tài)，檢驗(yàn)中性假說(shuō)是否成立，同時(shí)利用BEAST.v2.4.3[24]軟件包和Tracer v1.6[25]構(gòu)建貝葉斯天際線(Bayesian skyline plot; BSP)檢測(cè)群體歷史群體大小變動(dòng)，在Tracer中查看結(jié)果時(shí)，若所有值均≥200，則直接構(gòu)建貝葉斯天際線，若有部分均值<200，再根據(jù)均值，輸入重新運(yùn)算MCMC鏈的次數(shù)，剔除2次結(jié)果中前25%的數(shù)據(jù)再整合為一，重新獲取BSP。

2 結(jié)果與分析

測(cè)量60尾標(biāo)本，體長(zhǎng)范圍為96～121 mm，體重范圍為24.1～60.6 g。角木葉鰈體呈卵圓形，側(cè)扁。眼在身體右側(cè)，高凸，前緣有骨突。兩眼間隔窄，前后有棘。有眼側(cè)體褐色，通常具有不規(guī)則類似云狀分布的黑色斑點(diǎn)；無(wú)眼側(cè)體為白色。側(cè)線直線形，顳上枝長(zhǎng)通常不具有向前的小分枝。尾鰭截形?？谛?，上頜達(dá)眼前緣。本研究中，魚(yú)體體長(zhǎng)為體寬的1.66～2.25倍，角木葉鰈可量與可數(shù)性狀特征分別見(jiàn)表1和2。

表1 角木葉鰈2個(gè)群體的可量性狀特征比較Table 1 Proportional measurements of two P. cornustus populations

注：括號(hào)內(nèi)為均值，下同。

Note：Mean values in the brackets, the same below.

表2 角木葉鰈2個(gè)群體的可數(shù)性狀特征比較Table 2 Count measurements of two P.cornutus populations

Note：①P.cornutus；②Zhoushan；③Qingdao；④Dorsal fin rays；⑤Anal fin rays；⑥Caudal-fin rays；⑦Vertebrae；⑧Pectoral-fin rays on ocular side；⑨Pectoral-fin rays on blind side；⑩Pelvic-fin rays on ocular side；Pelvic-fin rays on blind side

對(duì)角木葉鰈2個(gè)群體9個(gè)形態(tài)特征比值進(jìn)行單因素方差分析，對(duì)不具有方差齊性的變量采用T檢驗(yàn)法進(jìn)行分析。P=0.05顯著性水平下的單因素方差分析結(jié)果如表3所示，2個(gè)群體在2個(gè)變量(E，F(xiàn))上存在顯著性差異。

對(duì)舟山和青島2個(gè)群體共60尾樣本線粒體控制區(qū)進(jìn)行PCR擴(kuò)增，得到目的片段長(zhǎng)度為504 bp的序列，其中包括18 bp的tRNAPro序列。在tRNAPro序列并未檢測(cè)到變異位點(diǎn)，去掉tRNAPro序列，60個(gè)個(gè)體共獲得486 bp的控制區(qū)的第一高變區(qū)部分序列。在線粒體DNA控制區(qū)的同源片段上，角木葉鰈舟山群體中共檢測(cè)到20個(gè)變異位點(diǎn)，包括轉(zhuǎn)換16個(gè)，顛換4個(gè)，共定義20個(gè)單倍型；青島群體中共檢測(cè)到14個(gè)變異位點(diǎn)，包括轉(zhuǎn)換12個(gè)，顛換2個(gè)，共定義了22個(gè)單倍型。青島和舟山2個(gè)群體的單倍型多樣度、核苷酸多樣度以及兩兩序列比較的平均堿基數(shù)均不存在明顯的差異(見(jiàn)表4)。2個(gè)群體在堿基含量組成上，均為A(35.39；35.50)>T(30.22；30.23)>C(18.57；18.50)>G(15.82；15.76)，呈現(xiàn)出較高的AT含量(65.61；65.75)和明顯的反G偏倚現(xiàn)象，這與大多數(shù)魚(yú)類一致[26]。通過(guò)J Modeltest軟件計(jì)算得到適合角木葉鰈控制區(qū)片段的核苷酸最佳替換模型為T(mén)amura-Nei模型。

表3 角木葉鰈群體T檢驗(yàn)分析結(jié)果(均值±標(biāo)準(zhǔn)差，P=0.05)Table 3 The results of T-test between P. cornutus populations (Mean±S. E., P=0.05)

注：*：P<0.05.

表4 本研究中角木葉鰈群體遺傳多樣性信息Table 4 Molecular diversity indices for P. cornutus in this study

以長(zhǎng)木葉鰈(P.japonicus)(Genbank:KY038655)為外群，構(gòu)建角木葉鰈舟山和青島群體控制區(qū)單倍型序列的鄰接關(guān)系樹(shù),可以看出舟山與青島兩群體個(gè)體相互混雜地分布在單倍型的鄰接關(guān)系樹(shù)上，沒(méi)有檢測(cè)到與采樣地點(diǎn)相對(duì)應(yīng)的分支(見(jiàn)圖1)。同樣，兩群體的單倍型都廣泛地分布在單倍型的鄰接關(guān)系樹(shù)上且有5個(gè)共享單倍型，未檢測(cè)到明顯的譜系結(jié)構(gòu)(見(jiàn)圖2)。遺傳分化指數(shù)FST=0.027 6(P=0.030 3)表明角木葉鰈的舟山群體和青島群體之間存在微弱而顯著的遺傳分化。

角木葉鰈的群體歷史動(dòng)態(tài)分析顯示，TaJima’sD檢驗(yàn)結(jié)果(D= -0.49，P>0.05)并未顯著偏離中性，但是Fu’s檢驗(yàn)結(jié)果(Fs=-26.11，P<0.01)卻是極顯著的，這可能是由于Fu’s檢驗(yàn)對(duì)近期群體擴(kuò)張更為敏感所致。貝葉斯天際線分析(見(jiàn)圖3)表明角木葉鰈群體經(jīng)歷了有效群體大小增加的過(guò)程，約在12.5萬(wàn)年前增速較快，約在10萬(wàn)年前趨于平穩(wěn)。

3 討論

為了解棲息環(huán)境對(duì)魚(yú)類生長(zhǎng)發(fā)育的作用及影響，一種主要的方法是定期觀察魚(yú)類的形態(tài)并結(jié)合統(tǒng)計(jì)學(xué)進(jìn)行評(píng)估分析。魚(yú)類生長(zhǎng)發(fā)育狀態(tài)的監(jiān)測(cè)是保護(hù)野生角木葉鰈種質(zhì)資源的重要方面。形態(tài)測(cè)量數(shù)據(jù)結(jié)果顯示，角木葉鰈2個(gè)地理群體之間在體長(zhǎng)/有眼側(cè)胸鰭長(zhǎng)和體長(zhǎng)/無(wú)眼側(cè)胸鰭長(zhǎng)2個(gè)可量性狀比值上存在顯著差異。胸鰭形態(tài)變化是生態(tài)學(xué)適應(yīng)的結(jié)果，因此推測(cè)差異可能是為適應(yīng)復(fù)雜的外界環(huán)境形成。

(分支上的數(shù)字為1 000次重抽樣分析得到的支持率。Bootstrap supports by 1 000 replicates are shown.)

圖1 控制區(qū)單倍型序列鄰接關(guān)系樹(shù)
Fig.1 Neighbor-joining tree for control region haplotypes

(圓圈面積與單倍型頻率成正比，短劃線代表單倍型間的核苷酸替換數(shù)目，數(shù)字表示對(duì)應(yīng)的單倍型。The sizes of circles are proportional to haplotype frequency. Perpendicular tick marks on the lines joining haplotypes represent the number of nucleotide substitutions and the numbers in circles represent haplotypes.)

圖2 角木葉鰈控制區(qū)單倍型最小跨度樹(shù)
Fig.2 Unrooted minimum spanning trees for control region haplotypes inP.cornutus

(深色線條代表有效群體大小的中值，淺色線條代表有效群體大小95%置信區(qū)間的上限與下限。Dark lines represent median estimates ofNeT; light lines are the upper and lower 95% highest posterior density (HPD) limits ofNeT.)

圖3 本研究中角木葉鰈群體的貝葉斯天際線分析

Fig.3 Bayesian skyline analysis ofP.cornutusin this study

物種的遺傳多樣性是生物適應(yīng)生存和發(fā)展的前提，是在漫長(zhǎng)進(jìn)化過(guò)程中不斷累積的產(chǎn)物[27]。物種遺傳多樣性越高，適應(yīng)生存環(huán)境變化的能力就越強(qiáng)[28]，反之亦然。群體遺傳結(jié)構(gòu)的背景知識(shí)對(duì)管理經(jīng)濟(jì)魚(yú)類漁業(yè)具有非常重要的意義。以線粒體DNA為基礎(chǔ)，可以分析物種的進(jìn)化潛力，研究物種的進(jìn)化史，并提供預(yù)測(cè)物種發(fā)展動(dòng)向的依據(jù)[29]。本研究中角木葉鰈2個(gè)群體共檢測(cè)到37個(gè)單倍型，單倍型多樣度為0.95，核苷酸多樣性為0.007 5，表現(xiàn)出豐富的遺傳多樣性。這也符合Bowen等人在其研究中提出的魚(yú)類較高的單倍型多樣性和較低的核苷酸多樣性的類型[30]。推測(cè)隨著在角木葉鰈群體擴(kuò)張中數(shù)量不斷的增加，單倍型多樣度也會(huì)有所提高，但短期內(nèi)積累核苷酸產(chǎn)生的變異較少，因此會(huì)造成核苷酸多樣度較低而單倍型多樣度較高的遺傳多樣性模式，中性檢驗(yàn)的結(jié)果也為這種推測(cè)提供了依據(jù)。太平洋油鰈也存在類似的遺傳模式[31]。其次，兩群體的群體獨(dú)享單倍型比率較高，影響群體間的遺傳差異。

更新世時(shí)期氣候的劇烈變化使得許多物種的分布范圍經(jīng)歷了收縮和擴(kuò)張，極大地影響著種內(nèi)遺傳多樣性的數(shù)量和分布[32]。本研究中角木葉鰈群體的貝葉斯天際線結(jié)果顯示其有效群體大小趨于平緩的時(shí)間約在10萬(wàn)年前，處于更新世晚期。這一時(shí)期海平面多次大幅度的升降，這些氣候和環(huán)境的變遷對(duì)海水溫度、海流模式和海岸棲息地的影響都比較大，末次冰期海平面上升，冰期形成的地理隔離被打破，隨著群體之間基因交流的增強(qiáng)導(dǎo)致的物種遺傳同質(zhì)化的影響大于長(zhǎng)期冰期隔離效應(yīng)導(dǎo)致的群體間顯著遺傳差異的影響，這可能是導(dǎo)致群體未出現(xiàn)明顯譜系結(jié)構(gòu)的原因，朱葉等人的研究結(jié)果[17]也支持這一假設(shè)。

此外，生活史特征也是影響海洋魚(yú)類群體遺傳格局不可或缺因素。由于海洋中存在不明顯的阻隔擴(kuò)散障礙，并且海洋魚(yú)類在其生活史的各個(gè)階段都具有較強(qiáng)的擴(kuò)散潛力，因此海洋魚(yú)類的群體遺傳分化通常相對(duì)較低[33]。本研究中舟山和青島2群體之間的遺傳分化指數(shù)(FST=0.027 6；P=0.030 3±0.006 9)表明群體之間存在微小而顯著的遺傳分化，這一結(jié)果與朱葉等人的研究結(jié)果[17]有所不同，這可能因?yàn)闃颖緮?shù)量造成的差異。角木葉鰈成魚(yú)營(yíng)底棲沙居生活，近海繁殖，產(chǎn)浮性卵，仔魚(yú)初期營(yíng)漂浮性生活[34]，這與鰈科中其他種類如高眼鰈、長(zhǎng)鰈等[16]類似，其幼體可能借助洋流擴(kuò)散，使不同地理群體間產(chǎn)生基因交流。

4 結(jié)語(yǔ)

本研究從形態(tài)學(xué)和分子標(biāo)記2種方法對(duì)舟山、青島的角木葉鰈群體遺傳多樣性進(jìn)行分析。2個(gè)群體在體長(zhǎng)/有眼側(cè)胸鰭長(zhǎng)和體長(zhǎng)/無(wú)眼側(cè)胸鰭長(zhǎng)2個(gè)可量性狀有顯著的差異；控制區(qū)第一高變區(qū)序列的分析的結(jié)果表明2個(gè)群體之間存在微弱而顯著的遺傳分化。更新世冰期劇烈的氣候變化可能對(duì)角木葉鰈的群體歷史動(dòng)態(tài)產(chǎn)生巨大影響，同時(shí)其卵和幼魚(yú)的浮游生活史可能促進(jìn)了現(xiàn)有不同地理群體間的基因交流，從而形成了角木葉鰈現(xiàn)有的系統(tǒng)地理格局。綜上，本文豐富了中國(guó)近海角木葉鰈群體遺傳多樣性研究的結(jié)果，并綜合傳統(tǒng)的形態(tài)資料為其種群結(jié)構(gòu)和遺傳變異研究提供更充分的基礎(chǔ)資料，從而更好地保護(hù)與利用角木葉鰈野生資源。

[1] Nelson J S. Fish of the World[M]. (4th ed). New York: John Wiley & Sons. Inc., 2006: 442-452.

[2] Wang Q Y, Qian R, Zhao J P, et al. To promote marine ecology research and civilization[J]. Hebei Fish, 2013, 12: 59-61.

[3] Ovenden J R, Berry O, Welch D J, et al. Ocean’s eleven: a critical evaluation of the role of population, evolutionary and molecular genetics in the management of wild fisheries[J]. Fish & Fisheries, 2013, 16(1): 125-159.

[4] Xiao Y S, Zhang Y, Gao T X. Study of the relationship between GeneraKareiusbicoloratusandPlatichthysstellatusby mtDNA sequence[J]. J Ocean Univ China, 2010, 40(6): 69-76.

[5] Luo K, Lu H X, Wu Z D, et al. Genetic Diversity and population structure analysis of main sweet potato breeding parents in southwest China[J]. Sci Agricul Sin, 2016, 49(3): 593-608.

[6] Ma Z J. Research progress on molecular genetics of the yak chromosome[J]. J China Agricul Univ, 2016, 21(2): 93-99.

[7] Li D H, Shi W, Gong L, et al. The complete mitochondrial genome ofParaplagusiablochii(Pleuronectiformes: Cynoglossidae)[J]. Mitochondr DNA Part A, 2016, 27(1): 92-93.

[8] Tsukagoshi H, Takeda K, Kariya T, et al. Genetic variation and population structure of marbled solePleuronectesyokohamaeand cresthead flounderP.schrenkiin Japan inferred from mitochondrial DNA analysis[J]. Biochem Syst Ecol, 2015, 58: 274-280.

[9] Li Y, Shi Y, Lu J, et al. Sequence and phylogenetic analysis of the complete mitochondrial genome ofLasiopodomysmandarinusmandarinus(Arvicolinae,Rodentia)[J]. Gene, 2016, 593(2): 302-307.

[10] Yoshida R, Nei M. Efficiencies of the NJp, maximum likelihood, and Bayesian methods of phylogenetic construction for compositional and noncompositional Genes[J]. Mol Biol Evol, 2016, 33(6): 1618-1624.

[11] Cann R L, Brown W M, Wilson A C. Polymorphic sites and the mechanism of evolution in human mitochondrial DNA[J]. Genetics, 1984, 106(3): 479-499.

[12] Coscia I, Chopelet J, Waples R S, et al. Sex change and effective population size: implications for population genetic studies in marine fish[J]. Heredity, 2016, 117(4): 251-258.

[13] Chen S Q, Yu D X, Ma A J, et al. Structure and evolution of complete mitochondrial genome of spotted halibutVeraspervariegatus[J]. J Fish China, 2002, 17(10): 25-27.

[14] Zhang Y, Xiao Y S, Gao T X, et al. Comparative analysis of mtDNA gene sequences between two species of Pleuronectes[J]. J Fish China, 2010, 31(5): 15-21.

[15] Wang B, Sun P, Fang H H, et al. Morphological characteristics and parameters measurement of starry flounder (PlatichthysstellatusPallas)[J]. Acta Oceanol Sin, 2010, 32(2): 139-147.

[16] 肖永雙. 西北太平洋五種海洋魚(yú)類的分子系統(tǒng)地理學(xué)研究[D]. 青島：中國(guó)海洋大學(xué), 2010.

Xiao Y S. Molecular Phylogeography of Six Marine Fishes in the Northwestern Pacific[D]. Qingdao：Ocean University of China, 2010.

[17] Zhu Y, Zhang Q, Li G S, et al. Genetic diversity of fourPleuronichthyscornutuspopulations in coastal waters of China[J]. Mar Sci Bull, 2012, 31(5): 522-556.

[18] 孟慶聞，蘇錦祥，繆學(xué)祖．魚(yú)類分類學(xué)[M]．北京：中國(guó)農(nóng)業(yè)出版社，1995：962-970.

Meng Q W, Su J X, Miu X Z. Taxonomy of Fishes[M]. Beijing: China Agriculture Press, 1995: 962-970.

[19] Sambrook J, Fritsch E F, Maniatis T. Molecular Cloning[M]. New York: Cold Spring Harbor Laboratory Press, 1989.

[20] Schneider S, Roessli D, Excoffier L. Arlequin: a software for population genetics data analysis[J]. User Manual Ver, 2000, 2: 2496-2497.

[21] Darriba D, Taboada G L, Doallo R, et al. jModelTest 2: more models, new heuristics and parallel computing[J]. Nat Methods, 2012, 9(8): 772.

[22] Nei M, Kumar S. Molecular Evolution and Phylogenetics[M]. Oxford： Univ Press, 2000.

[23] Tamura K, Dudley J, Nei M, et al. MEGA4: molecular evolutionary genetics analysis (MEGA) software version 4. 0[J]. Mol Biol Evol, 2007, 24(8): 1596-1599.

[24] Bouckaert R, Heled J, Kühnert D, et al. BEAST 2: a software platform for bayesian evolutionary analysis[J]. Plos Comput Biol, 2014, 10(4): 1003537.

[25] Rambaut A, Drummond A J. Tracer v1. 5. [Z/OL]. [2009-11-30] (2017-02-27). http: //tree. bio. ed. ac. uk/software/tracer/.

[26] Hochachka P W，Mommsen T. Biochemistry and Molecular Biology of Fishes：Environmental and Ecological Biochemistry[M]. [s.1.]: Elsevier Sci, 1995, 2: 1-38.

[27] Soltis P S, Soltis D E. Genetic variation in endemic and widespread plant species: Examples from Saxifragageae and Polystichum (Dryopteridaceae)[J]. Aliso, 1991, 13(1): 215-223.

[28] Huenneke L F. Ecological implications of genetic variation in plant populations[M].//Genetics and Conservation of Rare Plants. New York: Oxford Univ Press, 1991: 31-44.

[29] Chen S H, Qu Y J, Li J. Mitochondrial DNA and its progresses in Fish[J]. Biotechnol Bull, 2011, 3: 13-20.

[30] Grant W A S, Bowen B W. Shallow population histories in deep evolutionary lineages of marine fishes: insights from sardines and anchovies and lessons for conservation[J]. J Hered, 1998, 89(5): 415-426.

[31] Stepien C A. Phylogeographical structure of the Dover soleMicrostomuspacificus: The larval retention hypothesis and genetic divergence along the deep continental slope of the northeastern Pacific Ocean[J]. Mol Ecol, 1999, 8(6): 923-939.

[32] Ren J. Late Pleistocene paleoceanography of the Subarctic Pacific derived from the diatom record[D]. Bremen： University of Bremen, 2015.

[33] Ashe J L, Feldheim K A, Fields A T, et al. Local population structure and context-dependent isolation by distance in a large coastal shark[J]. Mar Ecol-Prog Ser, 2015, 520: 203-216.

[34] 時(shí)偉. 應(yīng)用線粒體全序列研究鰈形目魚(yú)類的分子系統(tǒng)關(guān)系及演化[D]. 青島：中國(guó)海洋大學(xué), 2011.

Shi W. Molecular Phylogenetic Analysis of the Order Pleuronectiformes (Teleostei) Based on Complete Mitochondrial DNA Sequences[D]. Qingdao：Ocean University of China, 2011.

ComparativeAnalysisofGeneticDiversityandMorphologyofPleuronichthyscornutusPopulations

SONG Yao-Xuan1, GAO Tian-Xiang2, YANG Tian-Yan2, HAN Zhi-Qiang2, SONG Na1

(1. College of Fisheries, Ocean University of China, Qingdao 266003, China; 2. College of Fishery, Zhejiang Ocean University, Zhoushan 316022, China)

Pleuronichthyscornutusis a commercially important species, and studies on its genetic diversity will exclusively provide the research basis for fishery management board. Mitochondrial DNA control sequence analysis showed that high haplotype diversity and low level of nucleotide diversity existed in Zhoushan and Qingdao populations. From the neighbor-joining tree and the minimum spanning tree constructed based on haplotypes, we observed that the individuals from two populations were mixed with each other and there was no obvious correspondence between the branches. The pairwise fixation index (FST=0.027 6；P=0.030 3) revealed a weak but significant genetic differentiation between two populations. The neutrality tests and Bayesian skyline analysis showed thatP.cornutusmay have experienced a historical sudden and special population expansion. Morphological studies revealed that some proportional measurements of Zhoushan population were slightly higher than those of Qingdao population, such as standard length/caudal, standard length/head length, and standard length/pectoral fin length on blind side. The standard length/pectoral fin length on blind (ocular) side existed conspicuous differentiation between Zhoushan and Qingdao populations. These results provided information for the genetic resource protection and heritable variation study of this species.

Pleuronichthyscornutus; mitochondrial DNA control region; genetic diversity; morphology; Qingdao population; Zhoushan population

S931.3；Q38

A

1672-5174(2018)02-049-07

10.16441/j.cnki.hdxb.20170084

宋垚萱， 高天翔， 楊天燕， 等. 角木葉鰈的群體遺傳多樣性研究和形態(tài)學(xué)分析[J]. 中國(guó)海洋大學(xué)學(xué)報(bào)(自然科學(xué)版), 2018, 48(2): 49-55.

SONG Yao-Xuan, GAO Tian-Xiang, YANG Tian-Yan, et al. Comparative analysis of genetic diversity and morphology ofPleuronichthyscornutuspopulations[J]. Periodical of Ocean University of China, 2018, 48(2): 49-55.

海洋公益性行業(yè)科研專項(xiàng)項(xiàng)目(201305043；201405010)資助

Supported by the Public Science and Technology Research Funds Projects of Ocean (201305043；201405010)

2017-02-27；

2017-05-20

宋垚萱(1992-)，女，碩士生。E-mail：song871570@163.com

? ? 通訊作者：E-mail：songna624@163.com

責(zé)任編輯 朱寶象