陳冬 ，尹念春 ，周明忠 ，陳斌 ，梁璐琪 ，李淳

（1.四川省動(dòng)物疫病預(yù)防控制中心，四川 成都 610041；2.四川省遂寧市動(dòng)物疫病預(yù)防控制中心，四川 遂寧 629000）

H7N9流感屬甲型流感的一種，是近年來(lái)新發(fā)現(xiàn)的新亞型流感病毒，其內(nèi)部基因來(lái)自于H9N2禽流感病毒[1]。人感染后，早期出現(xiàn)發(fā)熱、高燒、呼吸困難等癥狀，重癥患者表現(xiàn)為嚴(yán)重肺炎，目前還沒(méi)有針對(duì)人的疫苗[2]。

1 調(diào)查目的

2013年3月底，在上海和安徽兩地率先發(fā)現(xiàn)發(fā)現(xiàn)人感染H7N9流感的病例[3]。2017年1月25日，遂寧市蓬溪縣發(fā)生四川省首例人感染H7N9流感病例。為摸清H7N9流感在禽群中的流行態(tài)勢(shì)，降低養(yǎng)殖風(fēng)險(xiǎn)，消除輿論對(duì)養(yǎng)禽業(yè)的負(fù)面影響，我們開(kāi)展了本次流行病學(xué)調(diào)查。

2 調(diào)查方法

2.1 流行病學(xué)調(diào)查方法 先期采用橫斷面調(diào)查方法，對(duì)2017年1月25日至5月1日期間遂寧市發(fā)生的8例人感染H7N9流感病例情況進(jìn)行流行病學(xué)分析；后期對(duì)2017年全年遂寧市多個(gè)禽群的健康狀況進(jìn)行整體監(jiān)測(cè)。

2.2 抽樣方法 初期采用簡(jiǎn)單隨機(jī)抽樣方式，采集8例患者所在社（小區(qū)）存欄家禽的咽喉拭子和泄殖腔拭子；中期采用系統(tǒng)分層抽樣+集群抽樣的方式，采集患者所在社（小區(qū)）周邊鄉(xiāng)鎮(zhèn)規(guī)模養(yǎng)殖場(chǎng)的家畜（豬）及鴿子、野雞、野鳥(niǎo)等病原學(xué)樣品；后期則采用系統(tǒng)分層抽樣+集群抽樣+多級(jí)抽樣的方式，將抽樣范圍擴(kuò)大至遂寧全市行政區(qū)劃的活禽交易市場(chǎng)（屠宰場(chǎng)）。

全市共采集3536份樣品，其中雞2066份，鴨342份，鵝207份，鴿子119份，野雞3份，野鳥(niǎo)21份，豬55份，環(huán)境拭子723份。采集場(chǎng)點(diǎn)涉及散戶村19個(gè)，活禽交易市場(chǎng)16個(gè)，規(guī)模禽場(chǎng)8個(gè)，規(guī)模豬場(chǎng)1個(gè)，規(guī)模化禽類屠宰加工企業(yè)1個(gè)。

活禽樣品采樣方法：深入喉頭和上顎來(lái)回刮3～5次取咽喉拭子，深入泄殖腔轉(zhuǎn)一圈取泄殖腔拭子。同一活禽的雙拭子放入含雙抗的10%甘油保存液中保存?zhèn)溆谩?/p>

組織樣品采樣方法：無(wú)菌采集腦、氣管、肺臟等組織2.0 g于組織勻漿機(jī)中充分研磨，加入PBS混勻，3860r/min離心5min，取上清液備用。

2.3 實(shí)驗(yàn)室檢測(cè)方法 H7亞型流感的熒光RTPCR檢測(cè)方法：根據(jù)《H7亞型禽流感熒光RT-PCR檢測(cè)方法》標(biāo)準(zhǔn)（GB/T 19438.3-2004），在生物安全柜中用去RNA酶的帶濾芯吸頭和離心管提取RNA；再按照北京世紀(jì)元亨動(dòng)物防疫技術(shù)有限公司生產(chǎn)的禽流感病毒H7亞型實(shí)時(shí)熒光RT-PCR檢測(cè)試劑盒（批號(hào)：AIVH7 20170118P）的說(shuō)明書(shū)配制擴(kuò)增反應(yīng)體系，設(shè)置反應(yīng)程序，判斷反應(yīng)結(jié)果。每次實(shí)驗(yàn)設(shè)陰、陽(yáng)性對(duì)照，陰性對(duì)照檢測(cè)結(jié)果無(wú)特異性擴(kuò)增，陽(yáng)性對(duì)照Ct值符合試劑盒說(shuō)明書(shū)要求并出現(xiàn)對(duì)數(shù)擴(kuò)增曲線，符合實(shí)驗(yàn)質(zhì)控標(biāo)準(zhǔn)，實(shí)驗(yàn)結(jié)果成立。檢測(cè)樣品無(wú)Ct值并且無(wú)擴(kuò)增曲線，判為陰性。

表1 遂寧市2017年1～5月人感染H7N9流感的流行病學(xué)調(diào)查情況

3 調(diào)查結(jié)果

3.1 患者流行病學(xué)調(diào)查 8例病患的流行病學(xué)調(diào)查結(jié)果詳見(jiàn)表1。

3.2 禽類調(diào)查情況

3.2.1 家禽養(yǎng)殖情況 第1例患者家養(yǎng)殖禽5只，第2例患者家養(yǎng)殖禽39只，第3例患者家養(yǎng)殖禽18只，其余5例患者家均未養(yǎng)殖家禽。

3.2.2 家禽臨床診斷情況 省、市、縣（區(qū)）動(dòng)物疫病防控專家先后深入患者家中對(duì)存欄家禽進(jìn)行臨床診斷，結(jié)果均無(wú)異常。

3.3 實(shí)驗(yàn)室檢測(cè)結(jié)果 經(jīng)省、市動(dòng)物疫病預(yù)防控制中心獸醫(yī)實(shí)驗(yàn)室檢測(cè)，所采3536份樣品均顯示為H7亞型流感病毒核酸陰性。

4 分析與討論

4.1 人感染H7N9流感是散發(fā)病例 本次調(diào)查發(fā)現(xiàn)：8例患者分屬船山區(qū)、蓬溪縣、大英縣及射洪縣4個(gè)不同縣域的8個(gè)鄉(xiāng)鎮(zhèn)（街道），無(wú)彼此接觸史，且距離相對(duì)較遠(yuǎn)，是為零星散發(fā)病例。

4.2 禽類健康且未檢測(cè)出H7亞型流感病毒核酸陽(yáng)性 按照流行病學(xué)抽樣原理，對(duì)8例患者家周邊及全遂寧市范圍內(nèi)的禽類進(jìn)行抽樣檢測(cè)（共檢測(cè)3536份病原樣品），結(jié)果顯示均為陰性，并未檢測(cè)出H7亞型流感病毒核酸陽(yáng)性。

4.3 遂寧市人感染H7N9流感與家禽無(wú)直接關(guān)系 流行病學(xué)調(diào)查與檢測(cè)結(jié)果顯示：8例患者分屬不同鄉(xiāng)鎮(zhèn)，僅3例為家禽散養(yǎng)戶，而該3例家養(yǎng)的禽無(wú)任何異常癥狀且家中其他人員均未感染H7N9流感；其余5例患者均未從事涉禽行業(yè)的工作；同時(shí)，全遂寧市范圍內(nèi)的抽檢家禽無(wú)一例呈H7N9流感病毒核酸陽(yáng)性。綜上，我們認(rèn)為遂寧市2017年1月25日至5月1日發(fā)生的8例人感染H7N9流感與家禽無(wú)直接關(guān)聯(lián)。

4.4 人感染H7N9流感的可能原因 吳秀娟等[4]對(duì)上海某批發(fā)市場(chǎng)活雞感染H7N9風(fēng)險(xiǎn)進(jìn)行研究，發(fā)現(xiàn)攜帶H7N9流感病毒進(jìn)入批發(fā)市場(chǎng)的不僅是活雞，還有其他介質(zhì)因素如人員、車輛、野鳥(niǎo)等。據(jù)王琦梅等[5]研究發(fā)現(xiàn)，目前有關(guān)H7N9流感病毒的傳染源仍存在許多未知因素，攜帶H7N9病毒的雀形目鳥(niǎo)也可能是主要傳染源[6]。根據(jù)此次遂寧市人感染H7N9流感病例的動(dòng)物流調(diào)分析結(jié)果，排除了家禽直接感染人的因素。人感染H7N9流感病毒的原因很可能是野鳥(niǎo)或某種低劣環(huán)境如人流密集、衛(wèi)生管理差、潮濕不通風(fēng)等因素造成的感染與傳播。針對(duì)此次遂寧市人感染H7N9流感事件，筆者認(rèn)為臨時(shí)關(guān)閉市場(chǎng)并非長(zhǎng)久之策，更多的應(yīng)加強(qiáng)野鳥(niǎo)監(jiān)測(cè)，加強(qiáng)批發(fā)、交易、屠宰等環(huán)節(jié)的衛(wèi)生管理，強(qiáng)化相關(guān)人員的疫病防范意識(shí)。