高 瑩

(湖北省武漢市中醫(yī)醫(yī)院檢驗科 430000)

呼吸道感染是一種最常見的感染性疾病，根據(jù)其感染部位可將其分為上呼吸道感染及下呼吸道感染[1]。呼吸道感染患者多有咳嗽、咳痰等呼吸道癥狀，但患者臨床表現(xiàn)仍具有個體差異性，且不同病原體感染的患者臨床表現(xiàn)亦不同。目前研究表明，呼吸道感染主要以病毒感染為主，支原體和細菌感染亦可導(dǎo)致其發(fā)生感染[2-3]。因此，感染病原體多樣性導(dǎo)致該病的臨床治療具有難度，及早有效地診斷將為患者的治療贏取時間，降低患者疾病進展的可能性。且近年來不斷有文獻報道[4-6]，我國抗菌藥物濫用情況嚴重，耐藥情況嚴峻，臨床治療中須提高抗感染用藥的針對性。有研究表明，呼吸道感染病原體主要有：腺病毒(ADV)、肺炎衣原體(CPn)、甲型流感病毒(IFVA)、乙型流感病毒(IFVB)、肺軍團菌(LP1)、肺炎支原體(MP)、副流感病毒(PIVs)、Q熱立克次體(QFR)及呼吸道合胞病毒(RSV)[7-8]。本研究采用間接免疫熒光法(IFA)進行病原體IgM聯(lián)合檢測，旨在探討其在成人呼吸道感染診斷中的應(yīng)用價值，現(xiàn)將結(jié)果報道如下。

1 資料與方法

1.1一般資料 選擇2014年7月至2017年8月在本院檢驗科行呼吸道感染全套檢查的成年患者594例。其中男260例，女334例；年齡19～98歲，平均(59.39±7.84)歲；患者送檢前均進行抗菌及抗病原體治療，且本研究經(jīng)本院醫(yī)學(xué)倫理委員會批準(zhǔn)進行。

1.2方法 所有研究對象均抽肘靜脈血2～3 mL，常規(guī)離心后取血清25 μL，并用25 μL磷酸鹽緩沖液(PBS)進行稀釋待用。檢測前先將取150 μL吸附劑于離心管，加入30 μL稀釋后的血清后用移液槍吹打混勻，而后進行高速離心后待用，13 000 r/min，離心10 min。取高速離心后血清15 μL于載玻片孔中，而后將其放入濕盒中固定90 min，溫度控制為37 ℃。固定完成后將玻片放入PBS浸潤的容器中，并放于搖床搖動10 min。而后用蒸餾水緩慢沖洗并風(fēng)干，加入異硫氰酸熒光素(FITC)15 μL后再次放入濕盒中，濕盒條件不變，時間控制為30 min。再次重復(fù)PBS沖洗操作后風(fēng)干并封閉玻片，用熒光顯微鏡觀察染色情況，視野調(diào)至400倍。記錄每個患者感染病原體類型并進行統(tǒng)計分析。

1.3觀察指標(biāo) 所有患者呼吸道病原體檢測結(jié)果；呼吸道病原體合并感染發(fā)生情況；易感染病原體在不同年齡段患者中的感染情況。

1.4統(tǒng)計學(xué)處理 采用SPSS23.0軟件進行分析。計數(shù)資料采用百分數(shù)表示，組間比較采用χ2檢驗；以P<0.05為差異有統(tǒng)計學(xué)意義。

2 結(jié) 果

2.1呼吸道病原體檢測結(jié)果 呼吸道病原體檢測顯示，594例研究對象中共有208例呼吸道病原體陽性表達，總陽性率為35.02%。MP、IFVB、PIVs和IFVA的陽性率明顯較高，分別為16.16%(96/594)、13.13%(78/594)、9.60%(57/594)、7.07%(42/594)，其他病原體感染率由高到低分別為RSV[2.36%(14/594)]、ADV[1.35%(8/594)]、LP1[0.67%(4/594)]、CPn[0.17%(1/594)]、QFR[0.00%(0/594)]。

2.2兩種呼吸道病原體合并感染發(fā)生情況 對伴有兩種呼吸道病原體感染的患者數(shù)進行統(tǒng)計顯示，合并兩種呼吸道病原體感染共53例，陽性率為8.92%，在所有研究對象中所占比例為25.48%；其中“IFA+IFB”“IFB+PIV”“IFB+MP”和“MP+PIV”陽性率明顯高于合并其他兩種呼吸道病原體感染率，差異均有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05)，見表1。

2.33種呼吸道病原體合并感染發(fā)生情況 對合并有3種呼吸道病原體感染的患者數(shù)進行統(tǒng)計顯示，合并3種呼吸道病原體感染共25例，陽性率為4.21%，在所有研究對象中所占比例為12.02%；其中“IFA+IFB+MP”“IFA+IF+PIV”“IFB+MP+PIV”陽性率明顯高于合并其他3種呼吸道病原體感染陽性率，差異均有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05)，見表2。

2.4易感染病原體在不同年齡組患者中的感染情況 通過對各年齡段主要呼吸道病原體IFVA、IFVB、MP及PIVs的統(tǒng)計分析顯示，隨著年齡的增長，這4種病原體的感染率增加，且>18～30、>30～40歲年齡組的患者IFVB、MP及PIVs的感染率明顯更高，>18～30歲年齡組患者IFVA感染率高于其他各組感染率，差異均有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05)，見表3。

表1 兩種呼吸道病原體合并感染發(fā)生情況(%)

注：與IFVA+IFVB比較，*P<0.05；與IFVB+PIV比較，#P<0.05；與IFVB+MP比較，&P<0.05；與MP+PIV比較，△P<0.05

表2 3種呼吸道病原體合并感染發(fā)生情況(%)

注：與IFVA+IFVB+MP比較，★P<0.05；與IFVA+IFVB+PIV比較，◆P<0.05；與IFVB+MP+PIV比較，□P<0.05

表3 易感染病原體在不同年齡段患者中的感染情況[n(%)]

注：與>18～30歲年齡組比較，☆P<0.05；與>30～40歲年齡組比較，◎P<0.05

3 討 論

呼吸道作為人體與外界進行氣體交換的重要場所，是人體生命活動的基本保證，當(dāng)其發(fā)生炎癥時可刺激炎癥部位組織分泌炎性介質(zhì)而產(chǎn)生咳痰等相應(yīng)癥狀，且患者呼吸功能可受到顯著影響，若不能得到及時治療患者病情可進一步加重[9-10]。呼吸道感染的主要病原體為病毒和支原體，其主要傳播途徑為飛沫傳播或污染物接觸傳播。有文獻報道，隨著我國人口的不斷增加和城市人口的密集化，呼吸道感染疾病的發(fā)病率呈明顯上升的趨勢[11-12]。由于其傳播速度較快，及早預(yù)防和有效地診斷治療對疾病傳播情況的控制和患者疾病治療均有重要意義。且近年來不斷有文獻報道，MP、CPn等非典型性病原體引起的呼吸道感染發(fā)病率逐年上升，患者可在無明顯誘因情況下出現(xiàn)高熱[13-15]。既往我國對抗菌藥物用藥限制較小，臨床對非典型性呼吸道感染患者的用藥主要是多種藥物聯(lián)合治療，使得抗菌藥物使用頻率大大增加，加劇了病原體耐藥的發(fā)展。因此，及早診斷呼吸道感染患者的病原體類型將有利于對患者進行針對性的抗感染治療，一方面降低了抗菌藥物耐藥發(fā)生的可能性，另一方面也減少了患者經(jīng)濟壓力，提高患者臨床治療效果。

目前，臨床上主要診斷呼吸道感染病原體的方法有病原體分離培養(yǎng)、電鏡檢測、PCR及免疫熒光檢測，其中病原體分離培養(yǎng)是既往診斷的金標(biāo)準(zhǔn)，但是其檢測時間過長且檢測率較低；電鏡檢查的準(zhǔn)確度較高，但是其檢測條件較高，且檢測費用昂貴；PCR檢測是一種新型的檢測方式，但是由于其對檢測實驗室具有較高要求，且目前尚不能全部檢測常見的幾種病原體。免疫熒光檢測是一種借助熒光顯微鏡對病原體進行觀察檢測方法，免疫熒光技術(shù)最早在臨床上應(yīng)用是直接在鏡下觀察病原體形態(tài)，并對結(jié)果進行診斷，但此種方法與常規(guī)鏡下觀察的區(qū)別度不大，對呼吸道病毒的診斷具有較大難度。采用IFA法進行病原體IgM檢測是將病原體抗體IgM進行熒光素分子偶聯(lián)后再進行細胞孵育，當(dāng)檢測物中含有某病原體時，熒光標(biāo)記的IgM抗體可特異性結(jié)合抗原，利用熒光顯微鏡進行鏡下觀察即可通過其偶聯(lián)熒光蛋白的顏色進行病原體類型的判斷。由于抗原抗體的反應(yīng)具有特異性，IFA法檢測病原體IgM的準(zhǔn)確度可大大提升，通過聯(lián)合多種病原體IgM進行檢測即可有效診斷呼吸道病原體的類型。

本研究利用IFA法進行病原體聯(lián)合檢測，對呼吸道感染最常見的ADV、CPn、IFVA、IFVB、LP1、MP、PIVs、QFR及RSV共9種病原體進行聯(lián)合檢測，研究結(jié)果顯示，594例檢查對象中呼吸道病原體陽性表達率高達35.02%，且MP、IFVA、IFVB和PIVs的陽性率明顯較高。合并兩種呼吸道病原體感染共53例，陽性率為8.92%，在所有陽性患者中占比25.48%；“IFA+IFB”“IFB+PIV”“IFB+MP”及“MP+PIV”陽性率明顯高于合并其他兩種呼吸道病原體的陽性率，差異均有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05)。合并3種呼吸道病原體感染共25例，陽性率為4.21%，在所有陽性患者中占比12.02%；其中“IFA+IFB+MP”“IFA+IFB+PIV”及“IFB+MP+PIV”陽性率明顯高于合并其他3種呼吸道病原體感染的陽性率，差異均有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05)。通過對患者臨床資料分析顯示，隨著年齡的增長，IFVA、IFVB、MP及PIVs 4種病原體的感染率增加，且IFVB、MP及PIVs的感染率在>18～30、>30～40歲年齡組患者中較高，IFVA感染率在>18～30年齡段患者中最高，與既往成人呼吸道感染診斷情況相符[16-17]。

綜上所述，采用IFA法對病原體IgM進行聯(lián)合檢測能有效診斷成人呼吸道感染類型，有利于臨床對成人呼吸道感染病原體的分析，值得在臨床推廣應(yīng)用。