譚焯針　余丹瑤　魏海峰　張沛林　李慧怡　郭長(zhǎng)虹

【摘 要】建立測(cè)定洗浴產(chǎn)品中6-姜醇、6-姜酚2種生姜活性成分的高效液相色譜分析方法。洗發(fā)水和沐浴露樣品經(jīng)甲醇渦旋混勻及超聲提取后，用AQ-C18反相色譜柱進(jìn)行分離，以乙腈-水作為流動(dòng)相，梯度洗脫，采用二極管陣列檢測(cè)器（PDA）進(jìn)行檢測(cè)，檢測(cè)波長(zhǎng)為280nm。在優(yōu)化的實(shí)驗(yàn)條件下，6-姜醇和6-姜酚在2.5～50.0mg/L范圍內(nèi)線性關(guān)系良好，相關(guān)系數(shù)均為0.9997。在12.5、50.0、250.0mg/kg 3個(gè)添加濃度水平下，加標(biāo)回收率為87.5%～102.8%，相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差為0.8%～4.2%。6-姜醇和6-姜酚的方法檢出限（S/N=3）為4.0 mg/kg，定量限（S/N=10）為12.5mg/kg。該方法簡(jiǎn)單、準(zhǔn)確、穩(wěn)定性高，適用于洗浴產(chǎn)品中6-姜醇、6-姜酚的測(cè)定。

【關(guān)鍵詞】6-姜醇、6-姜酚；洗浴產(chǎn)品；高效液相色譜法

中圖分類號(hào)： R284；O657.72 文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼： A 文章編號(hào)： 2095-2457（2018）23-0287-002

DOI：10.19694/j.cnki.issn2095-2457.2018.23.130

【Abstract】A method of high performance liquid chromatography was developed for the simultaneous determination of 6-gingerol and 6-zingiberol in bath products.The samples of shampoo and body wash were extracted with methanol by ultrasound extraction technology.Chromatographic separation was performed on reversed phase column of AQ-C18，with gradient elution using acetonitrile and water as the mobile phases.The detection was performed with a Photo-Diode Array（PDA）detector.The ultraviolet detection wavelength was set at 280nm.With this method，6-gingerol and 6-zingiberol had good linear crossing range from 2.5 to 50.0mg/L with the same correlation coefficient 0.9997.The average recoveries of 6-gingerol and 6-zingiberol were 87.5%～102.8% with the relative standard deviation in the range of 0.8%～4.2%.The method limits of detection（S/N=3） were 4.0mg/kg，and the method limits of quantification（S/N=10） were 12.5mg/kg.With the advantages of simple，rapid and accuracy，this method was suitable for the determination of 6-gingerol and 6-zingiberol in bath products.

【Key words】6-gingerol and 6-zingiberol；Bath products；High performance liquid chromatography （HPLC）

生姜是一種世界范圍內(nèi)廣泛使用的香辛調(diào)味料，生姜在中醫(yī)藥有止嘔止咳的功效，我國(guó)具有悠久的生姜入藥和食用生姜傳統(tǒng)。姜辣素是構(gòu)成生姜中辛辣口感的主要生物活性成分。研究表明：姜酚類和姜醇類物質(zhì)是姜辣素的主要構(gòu)成成分之一[1]，姜酚實(shí)驗(yàn)證明具有強(qiáng)心、保肝利肝、抗血小板凝膠等多種保健作用[2-3]，姜醇也同樣具有抗氧化、抗炎等生理功效[4]。6-姜酚是生姜中姜酚類物質(zhì)的主要成分，約占75%[5]。生姜以及姜油提取物廣泛應(yīng)用于食品、保健品、化妝品，姜根提取物常添加于洗發(fā)水和沐浴露產(chǎn)品中，增強(qiáng)其香氣及功效作用。

高效液相色譜法是最常用于測(cè)定姜醇和姜酚的方法，目前文獻(xiàn)報(bào)道的檢測(cè)對(duì)象主要是生姜及姜根提取物，并沒(méi)有檢驗(yàn)方法可用于洗浴產(chǎn)品中姜醇和姜酚含量的檢測(cè)。生姜及生姜提取物中姜醇和姜酚的含量較高（0.59～7.91mg/g）[6]，故文獻(xiàn)報(bào)道的方法檢出限均較高。劉雯等建立了生姜提取物中6-姜酚含量HPLC檢測(cè)方法[7]，線性范圍為25～350mg/L，6-姜酚的儀器檢出限為0.8mg/L。張科衛(wèi)等建立高效液相色譜法測(cè)定小半夏湯中6-姜酚和6-姜醇的檢測(cè)方法[8]，6-姜酚的線性范圍127.3～1445.7mg/L，6-姜酚的線性范圍44.4～399.6mg/L。本研究采用高效液相色譜法檢測(cè)洗浴產(chǎn)品中的6-姜醇和6-姜酚，6-姜醇和6-姜酚方法檢出限均達(dá)到4.0mg/kg，該方法操作簡(jiǎn)單、準(zhǔn)確、穩(wěn)定性高，對(duì)洗浴產(chǎn)品中姜辣素的檢測(cè)有重要意義。

1 實(shí)驗(yàn)部分

1.1 主要儀器與試劑

高效液相色譜儀：Waters 2988（配有PDA檢測(cè)器）；超純水系統(tǒng)：Milli-Q型；

6-姜醇（純度98.7%），6-姜酚（純度95.5%）標(biāo)準(zhǔn)品來(lái)源于ChromaDEX；

甲醇（色譜純），乙腈（色譜純）；超純水（18.2MΩ），實(shí)驗(yàn)室自制。

1.2 標(biāo)準(zhǔn)溶液制備

標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備溶液：分別準(zhǔn)確稱取6-姜醇，6-姜酚標(biāo)準(zhǔn)品10mg（精確至0.1mg），用甲醇定容到刻度，搖勻，配制成濃度為1.0mg/mL的標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備液，-20℃存放。

標(biāo)準(zhǔn)工作液：分別移取一定量的標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備液于10 mL比色管中，用甲醇定容到刻度，搖勻，配制成濃度分別為2.5，5.0，10.0，25.0，50.0mg/L的標(biāo)準(zhǔn)工作液。

1.3 樣品前處理

準(zhǔn)確稱取2.0g（精確至0.001g）樣品，置于10mL比色管中，用甲醇定容至刻度線，渦旋混勻，超聲提取15min，以10000r/min高速離心8min，取部分樣品溶液，過(guò)0.22μm濾膜，待測(cè)。

1.4 色譜條件

色譜柱：AQ-C18（月旭科技（上海））4.6mm×250mm，5μm；流速：1.0mL/min；柱溫：35℃；進(jìn)樣體積：20L。流動(dòng)相：水+乙腈，梯度洗脫；梯度洗脫程序：0～8min，20%乙腈，8～9min，70%乙腈，9～18min，70%乙腈，19～25min，20%乙腈；檢測(cè)波長(zhǎng)為：280nm。

2 結(jié)果與討論

2.1 檢測(cè)波長(zhǎng)的選擇

6-姜醇和6-姜酚在220nm和280nm處有均有較強(qiáng)紫外吸收。280nm處波長(zhǎng)吸收溶劑、基質(zhì)的干擾較小，滿足靈敏度要求，綜合考慮，選擇280nm作為檢測(cè)波長(zhǎng)。

2.2 液相色譜分離條件的優(yōu)化

洗發(fā)水和沐浴露中添加抗菌抑菌的功效成分和多種天然成分提取物，未知物對(duì)6-姜醇和6-姜酚的液相分離干擾較大，采用梯度洗脫能提高分離度，降低未知物對(duì)目標(biāo)化合物的干擾；乙腈有較強(qiáng)的洗脫能力，能使色譜峰有更好的對(duì)稱峰形同時(shí)能節(jié)省色譜分析時(shí)間，所以采用乙腈-水作為流動(dòng)相，梯度洗脫分離。經(jīng)試驗(yàn)優(yōu)化，有效的實(shí)現(xiàn)目標(biāo)化合物在洗浴產(chǎn)品中的色譜分離，且峰形對(duì)稱（見(jiàn)圖1）。

2.3 提取溶劑的選擇

本方法優(yōu)化階段選用化妝品中有機(jī)小分子常用的提取溶劑甲醇作為目標(biāo)物的提取溶劑，甲醇可以完全溶解水基化妝品和香波，6-姜醇和6-姜酚在甲醇均有較高溶解度，方法的提取回收率高，所以確定甲醇作為提取溶劑。

2.4 方法的線性關(guān)系與檢出限

在優(yōu)化實(shí)驗(yàn)條件下，對(duì)1.2中的系列標(biāo)準(zhǔn)工作溶液進(jìn)行測(cè)定，以橫坐標(biāo)為洗浴產(chǎn)品中-姜醇和6-姜酚的質(zhì)量濃度（X，mg/L），縱坐標(biāo)為6-姜醇和6-姜酚的色譜響應(yīng)峰面積（Y）繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，得線性回歸方程及相關(guān)系數(shù)。實(shí)驗(yàn)結(jié)果：在2.5～50.0mg/L范圍內(nèi)，6-姜醇和6-姜酚的線性關(guān)系良好，線性方程分別為y=13809x-11675和y=13695x-10001，相關(guān)系數(shù)（R2）均為0.9997。

采用空白基質(zhì)樣品加標(biāo)，通過(guò)計(jì)算得到6-姜醇和6-姜酚的方法檢出限（MLOD，S/N=3）為4.0mg/kg，方法定量限（MLOQ，S/N=10）為12.5mg/kg，其靈敏度滿足分析要求。

2.5 方法的回收率與精密度

分別選用洗發(fā)水空白樣品為加標(biāo)基質(zhì)，按本試驗(yàn)條件進(jìn)行低、中、高（12.5、50.0、125.0mg/kg）3個(gè)添加水平的添加回收率試驗(yàn)，每一水平設(shè)6個(gè)平行，測(cè)定結(jié)果見(jiàn)表1。結(jié)果顯示，沐浴露產(chǎn)品的平均回收率為87.5%～102.8%，相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差為0.8%～4.2%，表明方法具有較高的回收率，準(zhǔn)確度和精密度。

3 結(jié)語(yǔ)

本研究建立了高效液相色譜法測(cè)定洗浴洗滌產(chǎn)品中6-姜醇和6-姜酚的分析方法，對(duì)色譜分離條件進(jìn)行了優(yōu)化，樣品采用甲醇溶液進(jìn)行提取，采用AQ- C18柱進(jìn)行分離，分離度良好。本方法靈敏度高、重現(xiàn)性好、操作簡(jiǎn)單、準(zhǔn)確可靠，為洗浴產(chǎn)品中6-姜醇和6-姜酚的定性定量檢測(cè)提供可靠的分析方法。

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