李 婷，唐麗霖，高婷婷，許艷秋，高立明，吳春先

（四川省農(nóng)藥檢定所，成都 610041）

二氯吡啶酸（clopyralid）化學(xué)名稱為3,6-二氯吡啶-2-羧酸，它是美國陶氏益農(nóng)公司開發(fā)的一種具有吡啶羧酸結(jié)構(gòu)的合成激素類除草劑，經(jīng)由植物的根和葉吸收，并在植物體內(nèi)傳導(dǎo)。二氯吡啶酸常用于油菜、玉米、草坪等防除一年生闊葉雜草和多年生闊葉雜草（菊科和豆科雜草）[1]。乙氧氟草醚（oxyfluorfen）化學(xué)名稱2-氯-α,α,α-三氟對甲苯基-(3-乙氧基-4-硝基苯基)醚，它為觸殺型除草劑，在有光的情況下發(fā)揮除草作用。其主要經(jīng)由胚芽鞘、中胚軸進(jìn)入植物體，少量經(jīng)根部吸收。乙氧氟草醚適合在苗前和苗后早期施用，防除闊葉雜草、莎草及稗草，對多種以種子繁殖的雜草有良好的防除效果，且對多年生雜草有一定的抑制作用[2]。目前國內(nèi)報道的二氯吡啶酸分析方法多采用高效液相色譜，乙氧氟草醚的分析方法有氣相色譜內(nèi)標(biāo)法、高效液相色譜外標(biāo)法[3-5]。采用高效液相色譜同時對復(fù)配制劑中二氯吡啶酸和乙氧氟草醚進(jìn)行定性、定量分析的方法尚未見報道。本文建立了高效液相色譜內(nèi)標(biāo)法對二氯吡啶酸與乙氧氟草醚復(fù)配懸浮劑進(jìn)行分析，為其質(zhì)量控制提供了簡便、準(zhǔn)確、有效的分析方法。

1 實驗部分

1.1 試劑與儀器

Waters 2695高效液相色譜儀，帶2996二極管陣列檢測器和Empower工作站；色譜柱：ODS C18不銹鋼柱（250 mm×4.6 mm）。

乙腈（HPLC級）、磷酸（分析純）、聯(lián)苯（分析純）；二氯吡啶酸標(biāo)樣（98%）、乙氧氟草醚標(biāo)樣（99%）、27%氧氟·二氯吡懸浮劑（18%乙氧氟草醚＋9%二氯吡啶酸），四川利爾作物科學(xué)有限公司。

1.2 色譜操作條件

流動相：乙腈＋0.1%磷酸水溶液，采用梯度洗脫，條件見表1。流速：1.0 mL/min；柱溫：30℃；檢測波長：235 nm；進(jìn)樣體積：3 μL。保留時間：二氯吡啶酸約為5.4 min，內(nèi)標(biāo)物聯(lián)苯約為14.2 min，乙氧氟草醚約為16.3 min。

表1 梯度洗脫條件

上述液相色譜操作條件系典型操作參數(shù)，實際操作中可根據(jù)不同儀器特點，對給定的操作參數(shù)進(jìn)行適當(dāng)調(diào)整，以期獲得最佳效果。典型的標(biāo)樣及27%氧氟·二氯吡懸浮劑樣品高效液相色譜圖見圖1和圖2。

圖1 標(biāo)樣液相色譜圖

圖2 27%氧氟·二氯吡懸浮劑液相色譜圖

1.3 測定步驟

1.3.1 內(nèi)標(biāo)溶液的配制

稱取約2 g（準(zhǔn)確至0.000 2 g）聯(lián)苯于500 mL容量瓶中，用乙腈溶解并定容，搖勻作為內(nèi)標(biāo)溶液備用。

1.3.2 標(biāo)樣溶液的配制

稱取二氯吡啶酸標(biāo)樣約0.04 g（準(zhǔn)確至0.000 2 g）、乙氧氟草醚標(biāo)樣0.08 g（準(zhǔn)確至0.000 2 g）于50

式中：A1為標(biāo)樣溶液中二氯吡啶酸（或乙氧氟草醚）與內(nèi)標(biāo)物峰面積之比的平均值；A2為試樣溶液中二氯吡啶酸（或乙氧氟草醚）與內(nèi)標(biāo)物峰面積之比的平均值；m1為二氯吡啶酸（或乙氧氟草醚）標(biāo)樣的質(zhì)量，g；m2為試樣的質(zhì)量，g；P為標(biāo)樣中，二氯吡啶酸（乙氧氟草醚）的質(zhì)量分?jǐn)?shù)，%。mL容量瓶中，準(zhǔn)確加入5.0 mL內(nèi)標(biāo)溶液，再用乙腈溶解并定容，搖勻，超聲波溶解5 min，靜置，備用。

1.3.3 試樣溶液的配制

稱取27%氧氟·二氯吡懸浮劑樣品約0.45 g（準(zhǔn)確至0.000 2 g）于50 mL容量瓶中，加入少量水溶解樣品，準(zhǔn)確加入5.0 mL內(nèi)標(biāo)溶液，用乙腈溶解并定容，搖勻，超聲波溶解5 min，靜置，備用。

1.3.4 測定

在上述色譜條件下，待儀器基線穩(wěn)定后連續(xù)注入數(shù)針標(biāo)樣溶液，直至相鄰2針中二氯吡啶酸（乙氧氟草醚）的響應(yīng)值相對變化＜1.5%，按照標(biāo)樣溶液、試樣溶液、試樣溶液、標(biāo)樣溶液的順序進(jìn)行測定。

1.3.5 計算

將測得的2針試樣溶液以及試樣前后2針標(biāo)樣溶液中的二氯吡啶酸（或乙氧氟草醚）與內(nèi)標(biāo)物峰面積的比值分別進(jìn)行平均，試樣中二氯吡啶酸（乙氧氟草醚）的質(zhì)量分?jǐn)?shù)w（%）按下式計算。

2 結(jié)果與討論

2.1 流動相的選擇

分別以不同比例的甲醇＋水、乙腈＋水、甲醇＋0.1%磷酸水溶液、乙腈＋0.1%磷酸水溶液為流動相，對試樣進(jìn)行分離檢測。實驗結(jié)果表明，當(dāng)以乙腈＋0.1%磷酸水溶液為流動相時，二氯吡啶酸、乙氧氟草醚和聯(lián)苯能得到有效分離。因二氯吡啶酸極性強(qiáng)，保留時間較短，而乙氧氟草醚極性較弱，保留時間較長，采用等度洗脫難以有效分離，故選擇梯度洗脫進(jìn)行樣品分離。在選定的洗脫條件下，三者的分離效果較好，峰形對稱，且保留時間適中。

2.2 內(nèi)標(biāo)溶液的選擇

以聯(lián)苯、對氯苯酚、癸二酸二丁酯等為內(nèi)標(biāo)物，在相同色譜條件下對二氯吡啶酸及乙氧氟草醚的出峰情況以及吸收波長進(jìn)行比較。結(jié)果顯示，以聯(lián)苯為內(nèi)標(biāo)物最為合適。

2.3 吸收波長的選擇

通過Waters 2996二極管陣列檢測器的光譜數(shù)據(jù)采集功能，獲得二氯吡啶酸、乙氧氟草醚和內(nèi)標(biāo)物聯(lián)苯200～400 nm的吸收波長掃描圖（圖3）。二氯吡啶酸在194、224、281 nm有較好的吸收；乙氧氟草醚在194～240 nm有較好的吸收；聯(lián)苯在200、248 nm有較好的吸收。三者在195 nm處均有最大吸收波長，但受雜質(zhì)影響較大。二氯吡啶酸和乙氧氟草醚在225～240 nm均有較好吸收，且聯(lián)苯在235 nm也有較大吸收。在235 nm波長下，基線平穩(wěn)，雜質(zhì)吸收較小，主峰和雜質(zhì)峰分離效果較好。故確定235 nm為本分析方法的檢測波長。

圖3 二氯吡啶酸、乙氧氟草醚與聯(lián)苯紫外吸收譜圖

2.4 分析方法的線性相關(guān)性

分別稱取二氯吡啶酸和乙氧氟草醚標(biāo)樣于50 mL容量瓶中，準(zhǔn)確加入聯(lián)苯內(nèi)標(biāo)溶液5.0 mL，用乙腈定容。分別配制5個不同質(zhì)量濃度的標(biāo)樣溶液，在上述色譜操作條件下進(jìn)行分析。以標(biāo)樣溶液質(zhì)量濃度為橫坐標(biāo)，二氯吡啶酸（或乙氧氟草醚）與內(nèi)標(biāo)物聯(lián)苯的峰面積之比為縱坐標(biāo)，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線。二氯吡啶酸的線性方程為y=0.358 4 x-0.001 0，R2為1.000 0；乙氧氟草醚的線性方程為y=0.385 0 x-0.027 1，R2為0.999 3。

2.5 分析方法的精密度

從同一個27%氧氟·二氯吡懸浮劑中準(zhǔn)確稱取5個試樣，在上述色譜操作條件下進(jìn)行分析，實驗結(jié)果見表2。

表2 分析方法的精密度實驗結(jié)果

樣品中二氯吡啶酸質(zhì)量分?jǐn)?shù)為9.10%，標(biāo)準(zhǔn)偏差為0.017 8，變異系數(shù)為0.19%；乙氧氟草醚質(zhì)量分?jǐn)?shù)為18.31%，標(biāo)準(zhǔn)偏差為0.101 8，變異系數(shù)為0.55%。

2.6 分析方法的準(zhǔn)確度

以已知質(zhì)量分?jǐn)?shù)的27%氧氟·二氯吡懸浮劑樣品為本底，分別加入一定量的二氯吡啶酸和乙氧氟草醚標(biāo)樣于50 mL的容量瓶中，準(zhǔn)確加入5.0 mL內(nèi)標(biāo)溶液，用乙腈定容。按上述色譜操作條件測定二氯吡啶酸和乙氧氟草醚的質(zhì)量分?jǐn)?shù)。二氯吡啶酸的回收率為99.11%～101.75%，平均回收率為100.75%；乙氧氟草醚的回收率為100.30%～101.63%，平均回收率為101.03%，數(shù)據(jù)見表3。

表3 分析方法的準(zhǔn)確度實驗結(jié)果

3 結(jié)論

本文通過對高效液相色譜分析條件的選擇與優(yōu)化，建立了27%氧氟·二氯吡懸浮劑的高效液相色譜內(nèi)標(biāo)分析方法。實驗結(jié)果表明，本方法準(zhǔn)確度和精密度高，線性關(guān)系良好，具有簡便、快速的特點，是27%氧氟·二氯吡懸浮劑質(zhì)量檢測和監(jiān)測可行的分析方法。