于艷嵐 于 洋 費秀珍

首都醫(yī)科大學(xué)附屬北京婦產(chǎn)醫(yī)院懷柔婦幼保健院，北京 101400

聽力損失是世界上最常見的感音神經(jīng)疾病，是由多種環(huán)境和/或遺傳因素共同作用導(dǎo)致，與90多個基因中的1000多個突變有關(guān)，遺傳因素占先天性聽力障礙的60%左右[1-3]。分子生物診斷技術(shù)可及時發(fā)現(xiàn)遲發(fā)性、藥物性耳聾，對新生兒聽力篩查起到重要作用[4]。對于許多民族群體來說，遺傳性耳聾的最普遍形式是由基因間隙連接蛋白β2（GJB2）的隱性突變引起的[5-6]。相關(guān)研究表明，核基因GJB2、SLC26A4、GJB3和線粒體基因12SrRNA是我國常見的4個致聾基因，但不同地區(qū)、民族人群可能存在差異[7-10]。北京市2012年即開展新生兒耳聾基因篩查惠民工作，為了解懷柔區(qū)人群耳聾基因突變情況，本研究分析了2013年1月～2017年12月在懷柔區(qū)助產(chǎn)機(jī)構(gòu)出生的新生兒GJB2、SLC26A4、GJB3和線粒體12rRNA基因的9個熱點突變位點資料，旨在探討懷柔地區(qū)新生兒耳聾易感基因攜帶情況，為臨床遺傳性耳聾早發(fā)現(xiàn)、早診斷、早治療提供理論依據(jù)，現(xiàn)將結(jié)果報道如下。

1 資料與方法

1.1 一般資料

選擇2013年1月～2017年12月在懷柔區(qū)助產(chǎn)機(jī)構(gòu)出生的活產(chǎn)新生兒17290例為本次研究對象，進(jìn)行耳聾基因篩查。耳聾基因篩查數(shù)據(jù)信息下載自“新生兒耳聾基因篩查數(shù)據(jù)庫”，該數(shù)據(jù)庫為北京市耳聾基因篩查官方信息管理系統(tǒng)。所有研究對象均自愿接受耳聾基因篩查者作，篩查前由家長簽署知情同意書。

1.2 耳聾基因篩查方法

耳聾基因篩查采用晶芯?九項遺傳性耳聾基因檢測試劑盒（微陣列芯片法），進(jìn)行常見4個耳聾基因9個熱點突變位點的檢測，即GJB2基因的35del G、176 del 16、235 del C 和299 del AT 4個位點，GJB3 基因的538 C＞T位點，SLC26A4基因的2168 A＞G和IVS7-2 A＞G，線粒體12s rRNA 基因的1494 C＞T和1555 A＞G。新生兒于生后3d（與遺傳代謝病采血時間同時）采集足跟血，在特制帶信息頁的濾紙卡上制成2個10mm直徑圓形血斑，送至指定6家兒童聽力障礙診治機(jī)構(gòu)的耳聾基因篩查實驗室完成檢測。初檢結(jié)果經(jīng)復(fù)核后向家長短信發(fā)布，并建立網(wǎng)絡(luò)信息查詢平臺。對耳聾基因篩查結(jié)果顯示“未通過”者，家長可通過查詢獲知咨詢就診方式，接受后續(xù)咨詢服務(wù)。6家兒童聽力障礙診治機(jī)構(gòu)在接診時，會同時依據(jù)該兒童的耳聾基因篩查和新生兒聽力篩查結(jié)果，給出后續(xù)咨詢診斷的合理建議。其中耳聾基因篩查“未通過”指4個基因的9個位點出現(xiàn)任一位點的雜合突變，反之則為“通過”。

表1 805例新生兒耳聾基因突變位點情況

1.3 統(tǒng)計學(xué)方法

采用SPSS19.0統(tǒng)計軟件進(jìn)行統(tǒng)計分析，基因頻數(shù)及百分比采用χ2檢驗。P＜0.05為差異有統(tǒng)計學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 耳聾基因篩查率

2013年1月～2017年12月在懷柔區(qū)助產(chǎn)機(jī)構(gòu)出生的活產(chǎn)新生兒共有17429例，其中17290例進(jìn)行耳聾基因篩查，篩查率99.20%。

2.2 耳聾基因篩查結(jié)果

17290例中，耳聾基因篩查陽性805例，陽性率4.66%。檢出GJB2基因突變410例（包括1例235del C雜合突變復(fù)合299del AT 雜合突變），檢出率為2.37%；檢出GJB3基因突變56例，檢出率為0.32%；檢出SLC26A4基因突變286例（包括1例2168A＞G雜合突變復(fù)合IVS7-2 A＞G雜合突變），檢出率為1.65%；檢出線粒體12SrRNA基因突變47例，檢出率為0.27%；同時具有兩個基因攜帶者6例，檢出率為0.03%，檢出率由高到低依次為GJB2基因、SLC26A4基因、GJB3基因、線粒體12SrRNA基因，見表1。

2.3 耳聾基因突變位點分布

通過對805例耳聾基因陽性個案的分析，發(fā)現(xiàn)突變頻率最高的位點為235delC（311例），占總突變例數(shù)的38.63%；其次為IVS7-2 A＞G（229例），占 28.45%；299 del AT（82例），占 10.19%，538 C＞T和2168 A＞G各56例，各占6.96%；1555 A＞G（47例），占5.84%；176 del 16（14例），占1.74%；235 del C復(fù)合538 C＞T（3例），占0.37%；35 del G和235 del C復(fù)合2168 A＞G各2例，各占0.25%；2168 A＞G復(fù)合IVS7-2 A＞ G、235 del C復(fù)合299 del AT和538 C＞T復(fù)合2168 A＞G各1例，各占0.12%；未檢測出1494 C＞T雜合突變。突變位點前五位分別是235delC、IVS7-2 A＞G、299 del AT、538 C＞T、2168 A＞ G。

2.4 不同年份突變陽性率及突變基因分布情況

2013～2017年不同年份的突變陽性率基本相同，差異無統(tǒng)計學(xué)意義（P＞0.05），見表2。而不同年份間各突變基因分布情況不同（χ2=0.000，P=0.000），見表 3。

3 討論

先天性耳聾是人類嚴(yán)重和不可逆轉(zhuǎn)的狀態(tài)，據(jù)估計，我國每年約有30000名新生兒被診斷為先天性聽力障礙，嚴(yán)重影響受影響個人的生活質(zhì)量和社會適應(yīng)能[11]。新生兒耳聾基因篩查可將確診時間提早到7～14d之內(nèi)，真正做到早發(fā)現(xiàn)，早干預(yù)，患兒大大收益2012年4月懷柔區(qū)積極執(zhí)行北京市政府決策，努力推進(jìn)新生兒聽力和耳聾基因聯(lián)合篩查工作。無論是聽力篩查還是耳聾基因篩查，任何一項未通過的兒童均需轉(zhuǎn)診至北京定點診斷機(jī)構(gòu)，進(jìn)行后期診斷、干預(yù)、咨詢和指導(dǎo)。

表2 不同年份突變陽性率情況表

表3 不同年份突變基因分布情況表

本研究檢測了懷柔區(qū)2013～2017年17290例新生兒的常見耳聾基因GJB2、SLC26A4、GBJ3和12SrRNA，結(jié)果顯示，新生兒耳聾基因篩查率99.20%，其中耳聾基因陽性率為4.66%，與張晚霞等[12]研究結(jié)果（4.73%）接近，且不同年份耳聾基因突變陽性率基本相同，差異無統(tǒng)計學(xué)意義。相關(guān)研究[13]顯示，GJB2 235位點突變是東亞人群GJB2基因突變的主要形式，本研究中235delC位點突變檢出率最高（1.80%），占GJB2基因突變總例數(shù)的75.85%。研究報告[14]說明，攜帶GJB2基因突變的兒童并非均能通過新生兒傳統(tǒng)的篩查方法來鑒定，這可能與診斷耳聾標(biāo)準(zhǔn)有關(guān)，也可能由于耳聾確實為遲發(fā)性的。本研究檢出GJB2基因突變410例，彌補(bǔ)了傳統(tǒng)新生兒聽力篩查可能漏診的遲發(fā)性或進(jìn)行性聽力下降患兒。除GJB2基因引起的遲發(fā)性或進(jìn)行性聽力下降外，線粒體12SrRNA基因1555G位點突變和SLC26A4基因突變患者出生時可不表現(xiàn)為聽力損失，而是在接觸藥物或頭部震蕩外傷后才出現(xiàn)聽力損失。Zhu等[15]綜述了河北省9個城市聾校和特殊需要學(xué)校318名常染色體隱性非綜合征性聽力損失學(xué)生GJB2、SLC26A4、12SrRNA和GJB3基因突變及其患病情況，結(jié)果顯示，GJB2基因純合突變16例（5.03%），雜合突變38例（11.95%），SLC26A4基因純合突變22例（6.92%），雜合突變59例（18.55%），雜合突變1例。線粒體12SrRNA基因檢出率為2（0.63%）。此外，有15個家庭的學(xué)生家長有正常的聽力。GJB2基因復(fù)合雜合突變有3個家系（20%），SLC26A4基因突變9例（60%）。本研究中檢出SLC26A4基因突變286例，檢出率為1.65%，其中IVS7-2 A＞G雜合突變檢出率為1.32%，略高于周怡等[16]在北京地區(qū)檢出結(jié)果（1.00%），占SLC26A4基因突變總例數(shù)的80.07%，是SLC26A4基因的主要突變位點；檢出線粒體12SrRNA基因均/異質(zhì)突變共47例，檢出率為0.27%，與張晚霞等[12]研究報道（30835中發(fā)現(xiàn)74例12SrRNA基因突變）無統(tǒng)計學(xué)差異（χ2=0.448，P=0.503）。藥物致聾基因的檢出，給耳聾患者提前預(yù)警，使得他們可以有效避免耳毒性藥物的傷害，減少致殘率。

綜上所述，耳聾基因檢測可以從分子水平明確致聾病因，不僅可以發(fā)現(xiàn)先天性遺傳性聾患者，更重要的是發(fā)現(xiàn)藥物敏感性聾基因攜帶者和遲發(fā)性聾基因攜帶者。