劉 濤，黃子晏

(1. 莆田學(xué)院環(huán)境與生物工程學(xué)院，福建 莆田 351100;2. 福建省新型污染物生態(tài)毒理效應(yīng)與控制重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室，福建 莆田 351100)

0 引 言

雙酚A(BPA)是聚碳酸酯的生產(chǎn)單體，生產(chǎn)聚氯乙烯的穩(wěn)定材料，環(huán)氧樹脂的主要組成部分，由俄國科學(xué)家Alexander P.Dianin在1891年利用兩分子苯酚和一分子丙酮在氯化氫催化下第一次合成出來[1]。由于雙酚A制品的良好機(jī)械性能、低吸水性及熱穩(wěn)定性，因此被大量用于制作水管、水杯、奶瓶、玩具以及其他食品容器。然而雙酚A是一種環(huán)境類激素，能夠干擾人體內(nèi)分泌系統(tǒng)[2]，不僅能夠?qū)е路逝謫栴}同時(shí)還有增加癌變[3]、畸形的可能。市場所售桶裝水，絕大部分水桶材均質(zhì)為聚碳酸酯，雙酚A作為聚碳酸酯的合成單體，水桶中殘留的雙酚A有可能會(huì)從水桶遷移至飲用水中，進(jìn)而進(jìn)入人體內(nèi)。

目前，雙酚A的殘留可通過液-液萃取[4]、固相萃取[5]進(jìn)行富集，而后利用高效液相-熒光法[6]、液相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用[7]或氣相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用法[8]進(jìn)行檢測，此外電化學(xué)[9-10]也是一種高靈敏檢測BPA的方法。LC-MS、GC-MS等儀器價(jià)格昂貴且操作復(fù)雜，而液相紫外檢測器在大多數(shù)實(shí)驗(yàn)室都較為常見且操作簡單、維護(hù)方便。本文利用高效液相色譜-紫外檢測器建立一種簡單、高靈敏檢測桶裝水及水桶中雙酚A的檢測方法，并抽取莆田市售的桶裝水及水桶中雙酚A含量進(jìn)行檢測。

1 實(shí)驗(yàn)部分

1.1 實(shí)驗(yàn)儀器和試劑

實(shí)驗(yàn)儀器：高效液相色譜儀(LC1100)，美國安捷倫公司，配備隔膜真空泵、自動(dòng)進(jìn)樣系統(tǒng)、柱溫箱、可變波長掃描紫外檢測器；純水機(jī)(ultra pure)，上海和泰儀器有限公司；電子天平(Sartorius BS224S)，賽多利斯；全自動(dòng)固相萃取儀(Sepaths UP)，萊伯泰科儀器股份有限公司；紫外可見分光光度計(jì)(UV-2500)，島津；0.45 μm 有機(jī)濾膜，上海市新亞凈化器件廠。

化學(xué)試劑：甲醇，色譜純，天津市化學(xué)試劑供銷公司；無水乙醇，分析純，天津市化學(xué)試劑供銷公司；四氫呋喃，分析純，國藥集團(tuán)化學(xué)試劑有限公司；乙酸乙酯，分析純，天津市鼎盛鑫化工有限公司；乙腈，色譜純，上海阿拉丁生化科技有限公司；雙酚A，分析純，上海麥克林生物制藥有限公司。

1.2 實(shí)驗(yàn)方法

1.2.1 標(biāo)準(zhǔn)溶液配置

準(zhǔn)確稱取 0.025 0 g（精確到 0.000 1 g）雙酚 A，置于燒杯中，甲醇溶解。將溶液轉(zhuǎn)移至250 mL容量瓶中，甲醇定容至刻度線，搖勻，得到0.1 mg/mL的雙酚A標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備溶液，密封保存。使用前根據(jù)需要吸取適量標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備液，用甲醇稀釋配置成質(zhì)量濃度為0.4，1，2，4，5，10 μg/mL 的工作標(biāo)準(zhǔn)溶液，0.45 μm濾膜過濾備用。

1.2.2 色譜分析條件

流動(dòng)相為乙腈-水，V（乙腈）:V(水）=60:40，流量1 mL/min，檢測波長 224 nm，自動(dòng)進(jìn)樣器進(jìn)樣，進(jìn)樣體積 10 μL。

1.2.3 樣品處理

依次用10 mL甲醇、10 mL超純水活化C18固相萃取柱，流量為 1.5 mL/min。上樣 1 000 mL，上樣完畢后氮吹干燥3 min。分兩次用3 mL甲醇洗脫萃取柱，洗脫程序?yàn)榻?0 s，最后氮吹干燥150 s，洗脫液氮吹定量濃縮至 1 mL，0.45 μm濾膜過濾，進(jìn)樣分析。

1.2.4 水桶塑料預(yù)處理

取桶裝水塑料，超純水沖洗后，晾干將其剪碎，精密稱取1.000 g樣品置于燒杯中，加入10 mL二氯甲烷，超聲（功率 120 W；頻率 40 kHz）溶解并混勻，加入15 mL甲醇，充分震蕩搖勻，使高分子化合物沉淀，過濾，濾液在40 ℃水浴蒸干，用甲醇溶解殘?jiān)?，轉(zhuǎn)移至10 mL容量瓶中，甲醇定容至刻度，0.45 μm 濾膜過濾，備用。

1.2.5 水樣與水桶雙酚 A 含量的檢測

隨機(jī)選取莆田市售5個(gè)品牌的桶裝水，分別取常溫保留10，20，30 d的桶裝水水樣，每個(gè)時(shí)間的水樣平行測定3組。按照1.2.3方式經(jīng)固相萃取濃縮至1 mL，按1.2.2色譜條件檢測分析。已提取的水桶預(yù)處理液按色譜條件進(jìn)樣分析。

2 結(jié)果與討論

2.1 洗脫劑的選擇

取質(zhì)量濃度為4 μg/mL雙酚A標(biāo)準(zhǔn)液1 mL置于1 000 mL容量瓶中，超純水定容至刻度線，分別用甲醇、四氫呋喃、無水乙醇、乙酸乙酯4種有機(jī)溶劑進(jìn)行固相萃取，樣品經(jīng)過C18萃取柱提取后用高效液相色譜檢測，計(jì)算得到4種洗脫劑的回收率，回收率結(jié)果見圖1。根據(jù)測量計(jì)算結(jié)果，4種洗脫劑中甲醇的洗脫效果最好，因此選用甲醇作為水樣固相萃取的洗脫劑。

圖1 不同洗脫劑洗脫效果

2.2 HPLC紫外檢測波長的選擇

查閱相關(guān)文獻(xiàn)，雙酚A紫外吸收光譜在202，227，278 nm波長下有較強(qiáng)的吸收[11]。對雙酚A溶液在190～300 nm波長范圍內(nèi)進(jìn)行掃描，所得紫外吸收光譜如圖2所示，可以看到，雙酚A在224 nm和278 nm附近有強(qiáng)紫外吸收，且224 nm波長下紫外吸收較強(qiáng)，因此選擇224 nm作為液相檢測的波長。

圖2 雙酚A紫外吸收光譜

2.3 流動(dòng)相的選擇

考察了不同流動(dòng)相對雙酚A色譜峰的影響，在高效液相色譜中常用的流動(dòng)相為甲醇、乙腈和水。首先用甲醇-水為流動(dòng)相，改變甲醇與水的比例，雜峰與雙酚A溶液出峰時(shí)間較近，如圖3所示。雜峰面積較大，在某些比例下會(huì)出現(xiàn)負(fù)峰，對目標(biāo)峰的定性以及定量產(chǎn)生影響，且溶劑甲醇在低波長情況下存在紫外吸收。為了改善分離效果，利用乙腈-水作為流動(dòng)相，調(diào)整比例，在V（乙腈）:V（水）=60:40時(shí)，色譜圖良好，峰形尖銳，對稱性良好，見圖4。雜峰位置在 1～1.5 min，雙酚 A 出峰時(shí)間在 2.790 min，間隔時(shí)間長，雜峰位置不會(huì)對雙酚A產(chǎn)生影響；并且可以在短時(shí)間內(nèi)將雙酚A分離洗脫，因此選乙腈-水（V/V，60:40）作為本實(shí)驗(yàn)的流動(dòng)相。

圖3 甲醇-水雙酚A色譜圖

圖4 乙腈-水雙酚A色譜圖

2.4 線性關(guān)系和重現(xiàn)性

將1.2.1配制系列濃度梯度溶液，在選定的色譜條件下進(jìn)行測定，以雙酚A標(biāo)準(zhǔn)溶液濃度為橫坐標(biāo)，色譜峰面積為縱坐標(biāo)，做標(biāo)準(zhǔn)曲線，如圖5所示。其線性回歸方程為Y=42.152 39X–0.175 58，線性相關(guān)系數(shù)為r2=0.999 8，且在 0.4～10 μg/mL 的濃度范圍內(nèi)線性關(guān)系良好。

取質(zhì)量濃度為1 μg/mL雙酚A標(biāo)準(zhǔn)樣品溶液，連續(xù)進(jìn)樣5次，保留時(shí)間與峰面積如表1所示，相對標(biāo)準(zhǔn)偏差分別為2.05%、2.26%。

圖5 雙酚A溶液標(biāo)準(zhǔn)曲線

表1 保留時(shí)間與峰面積重現(xiàn)性

2.5 檢出限和定量限

根據(jù)方法檢出限計(jì)算方法，以質(zhì)量濃度為0.4 μg/mL的純水加標(biāo)樣品，按照選取的最優(yōu)條件進(jìn)行固相萃取-高效液相測定雙酚A的含量，平行測定6次，6次測定的標(biāo)準(zhǔn)偏差δ值為0.022，根據(jù)檢出限計(jì)算公式 MDL=3.143δ，得到檢出限為 0.069 μg/mL，定量限為 0.23 μg/mL。

相關(guān)國家標(biāo)準(zhǔn)GB4806.7-2016《食品接觸用塑料材料及制品》和GB5009.156-2016《食品接觸材料及制品遷移試驗(yàn)預(yù)處理方法通則》中對水基食品模擬物中雙酚A的檢出限和定量限分別為1 μg/L和10 μg/L；本文建立的雙酚A檢測方法能夠滿足對水中痕量雙酚A的檢測。

2.6 回收率與精密度

為了驗(yàn)證提取方法的可靠性，進(jìn)行回收率試驗(yàn)，以不含雙酚A的超純水為空白基質(zhì)，在1 L容量瓶中分別加入質(zhì)量濃度為 0.4，1，2，4，5 μg/mL 的1 mL雙酚A標(biāo)準(zhǔn)溶液，超純水定容至刻度線。按照選定的最佳條件進(jìn)行固相萃取處理后上機(jī)檢測。計(jì)算回收率見表2，結(jié)果顯示平均回收率為98.3%，對于高、中、低濃度樣品的回收率都有滿意的效果。

選取質(zhì)量濃度為1 μg/mL的純水加標(biāo)樣，按照方法指定的檢測步驟，平行測試6次，檢驗(yàn)該方法的精密度。結(jié)果如表3所示，相對標(biāo)準(zhǔn)偏差為1.99%，數(shù)據(jù)重現(xiàn)性好，精密度高。

表2 回收率實(shí)驗(yàn)結(jié)果

表3 精密度實(shí)驗(yàn)結(jié)果

2.7 檢測結(jié)果

取5個(gè)品牌桶裝水，檢測已保留的桶裝水水樣，每個(gè)品牌分別儲(chǔ)存10天、20天和30天后，經(jīng)檢測均未檢測到雙酚A的存在。雖然在常溫儲(chǔ)存、保質(zhì)期內(nèi)的桶裝水中并未檢測出雙酚A，但仍存在雙酚A向水中遷移的潛在危害。相關(guān)研究表明日曬、儲(chǔ)存溫度及生產(chǎn)過程中洗桶程序等因素對雙酚A的遷移都有一定的影響[12]。

水桶材料中雙酚A的平均含量為37.1 μg/g，且5個(gè)品牌的雙酚A含量大致相同，結(jié)果見表4。相關(guān)資料顯示[13]食品中雙酚A的遷移主要來自聚合物表面降解，而聚合物中雙酚A的殘余量對其遷移影響很小。因此，應(yīng)針對食品包裝容器的PC材質(zhì)進(jìn)行限制，采用PP或其他更安全的材質(zhì)。

表4 水桶檢測結(jié)果

3 結(jié)束語

本文建立了固相萃取高效液相檢測桶裝水中雙酚A含量的檢測方法，對實(shí)驗(yàn)條件進(jìn)行優(yōu)化，以甲醇為洗脫劑對水樣進(jìn)行固相萃取處理，乙腈-水（60:40）為流動(dòng)相，224 nm波長下實(shí)現(xiàn)對水樣中BPA簡單、快速、高靈敏檢測。方法檢出限0.069 μg/mL，定量限為0.23 μg/mL，回收率為98.3%。隨機(jī)選取市售5個(gè)品牌桶裝水，在保質(zhì)期內(nèi)的桶裝水中并未檢測到雙酚A的存在，水桶材質(zhì)中檢測出雙酚A的含量為37.1 μg/g；在水樣中雖未檢測出雙酚A，但仍有一定潛在溶出風(fēng)險(xiǎn)。根據(jù)實(shí)驗(yàn)結(jié)果，針對PC食品包裝材料應(yīng)更換更加健康安全的材質(zhì)。