徐光科，左春生，吳海港

(信陽農林學院牧醫(yī)工程學院,河南 信陽 464000)

環(huán)境中有害氣體如氨氣進入呼吸道后被吸收，引起支氣管或細支氣管周圍細胞損傷，肺功能下降。此外，在有害氣體刺激下肺泡巨噬細胞和淋巴細胞增多，分泌腫瘤壞死因子-α、干擾素、IL-1等炎性介質，啟動早期炎癥反應并維持炎癥反應，對肺血管以及肺組織造成長期的慢性炎癥刺激[1-2]。炎癥反應的基礎是肺血管內皮細胞損傷。自然情況下，肺血管內皮細胞對肺毛細血管血管及肺組織起保護作用。氨氣長期刺激的情況下，肺血管內皮細胞受損，炎癥反應就會產生，嗜中性粒細胞是最早出現在炎癥部位的細胞。當肺組織受損時，肺組織中浸潤嗜中性粒細胞，它會釋放炎癥介質、蛋白酶、氧自由基[3]，進而再損傷肺組織

止咳化痰乳劑是一種純天然副作用小的中藥，主要成分包括紫蘇，陳皮和桉葉。紫蘇中含有多種植物多酚類物質和黃酮類物質。這些物質大多有酚羥基，而酚羥基能夠清除活性氧和自由基[4]。紫蘇中的植物多酚類具有較強的抗氧化能力，包括迷迭香酸、咖啡酸乙烯酯、咖啡酸烯萜酯等。紫蘇提取物中迷迭香酸具有清除羥自由基的作用[5]。此外，紫蘇提取物具有鎮(zhèn)咳作用，用紫蘇種子脂肪油以2.5 g/kg·bw劑量灌服小鼠，小鼠咳嗽次數明顯減少并且咳嗽間隔時間變長。

陳皮中的黃酮類化合物主要有黃酮、黃酮醇等，其以糖苷的形式存在于陳皮素、橙皮苷等物質中。川陳皮素能抑制自由基和羥自由基的產生，減少某些細胞中活性氧的產生，從而起抗氧化作用。試驗研究發(fā)現，陳皮水提液能抑制動物心、肝組織的脂質過氧化反應，還可以增強SOD酶活性[6-7]。

桉葉是常用的中草藥，有祛痰、抗菌、消炎鎮(zhèn)痛等作用。藥理試驗表明，桉葉油能促進唾液分泌，隨即激活吞咽反射，抑制隨即發(fā)生的咳嗽[8]，因而可作為氣體吸入劑用于呼吸道疾病的治療。鞣質、黃酮類和萜類是桉葉非油成分中主要的抗氧化物質。國外學者研究了19種桉屬植物并分離到9種活性物質，發(fā)現具有沒食子酰基的鞣質和?；S酮醇類化合物抗氧化活性很強[9]。

本試驗率先使用氨氣刺激家兔初步探索構建肺損傷模型，并用止咳化痰乳劑治療并評估藥物抗病理損傷的療效。

1 材料與方法

1.1 實驗動物 健康家兔，雌雄各半，體重約2 kg，購自信陽職業(yè)技術學院實驗動物中心。

1.2 試劑與藥品 氨水、甲醛、二甲苯、無水乙醇，均購自上海國藥集團試劑公司；止咳化痰乳劑(信陽農林學院獸藥實驗室自制)。

1.3 儀器 BS-490生化分析儀，BC-2800 Ve.t.獸用血細胞分析儀，邁瑞生物醫(yī)療電子股份有限公司；QPJ-1B病理石蠟切片機，上海斯歐醫(yī)療器械有限公司；NE-C25S霧化器，歐姆龍(大連)有限公司；BW GAXT-A 氨氣檢測儀，加拿大BW科技有限公司。

1.4 方法 自制3個容器，分別標記為甲箱、乙箱、丙箱。本試驗采用一個長150 cm，寬100 cm，高80 cm的塑料密閉容器，上邊側面開數個小孔以保證箱內為常壓狀態(tài)及箱內外溫濕度一致。

將健康家兔，隨機分為A、B、C 3組，每組5只，A組為正常對照組，B組為模型組，C組為治療組。A組放入甲箱，不用氨氣刺激，連續(xù)飼養(yǎng)10 d。B組放入乙箱用7.8%氨水噴霧刺激，1次2 h，1日2次，兩次刺激間隔3 h，連續(xù)刺激9 d，建立肺損傷模型。C組放入丙箱用相同濃度氨水刺激相同時間，每次開始試驗前1 h以0.5 mL/只的劑量灌服止咳化痰藥，其余條件3組都一樣。(箱內氨氣濃度用氨氣測定儀測定濃度為：97 mg/m3)

整個試驗過程中兔子自由呼吸，自由采食，自由飲水，無窒息現象。在氨氣刺激期及正常飼養(yǎng)時觀察兔子活動行為與精神狀態(tài)等一般形態(tài)，同時監(jiān)測兔子的體溫以及刺激前后呼吸頻率變化的平均值。

在試驗期間采全血進行生化指標檢測和血常規(guī)檢測以摸索建立肺損傷模型合適的條件。氨氣刺激結束后，將A、B、C 3組家兔致死，手術切除全肺，0.9%生理鹽水清洗表面血污等，然后用10%福爾馬林溶液固定24 h，制作病理切片H.E.染色。

2 結果

2.1 對家兔一般行為及呼吸的影響 在刺激10 min左右，兔子出現特別煩躁不安的現象，之后慢慢轉為安靜狀態(tài)；整個過程中，兔子有眨眼甚至閉眼、流眼淚、扒鼻，并伴有噴嚏、間歇性咳嗽現象；刺激結束后，動物飲水、飲食并無明顯改變，5 min后精神狀態(tài)恢復原狀。試驗整個過程中家兔體溫正常，A組呼吸頻率36-45 times/min；B組呼吸頻率48-67 times/min；C組呼吸頻率42-55 times/min

2.2 血液生理指標試驗結果 家兔血液生理指標試驗結果見表1，從表中可以看出模型組兔子白細胞、淋巴細胞、單核細胞、嗜中性粒細胞隨著氨氣刺激時間的增加，呈增高趨勢，比對照組分別提高58.7%、71.7%、50.1%、 116.7%，差異顯著(P<0.05)；而治療組和模型組相比，白細胞、淋巴細胞、單核細胞、嗜中性粒細胞數量顯著下降，分別降低31.%、36.7%、50.1%、29.2%，差異顯著(P<0.05)提示止咳化痰乳劑可以降低肺臟炎癥反應；治療組和對照組相比白細胞、淋巴細胞、單核細胞變化不大，差異不顯著。嗜中性粒細胞差異顯著；試驗各組紅細胞、血小板、血紅蛋白差異不顯著。

表1 各組家兔血液生理指標檢測結果

注：同行不同字母表示差異顯著(P﹤0.05)，相同字母表示差異不顯著(P﹥0.05)，下表同

2.3 血液生化指標檢測結果 家兔血液生化指標檢測結果見表2。對照組相比，模型組中家兔的ALT、BUN、 血氨分別提高106.5%、91.6%、320%，差異顯著(P<0.05)。提示：經藥物治療后，治療組中ALT、BUN、 血氨較模型組分別降低：34.7%、17.39%、31.3%，差異顯著，提示止咳化痰乳劑可以減少氨氣對肝臟和腎臟的功能損傷。試驗各組ALKP、 CREA、GLU、TP 變化不大。差異不顯著。

表2 各組家兔血液生化指標檢測結果

2.4 病理學診斷結果 正常組家兔肺泡結構完整清晰，肺泡隔無腫脹，腔內無滲出物。與治療組(見中插彩版圖1)對比，模型組(見中插彩版圖2)明顯可見肺間質充血、出血，腔內有紅細胞滲出，肺間質大量炎癥細胞浸潤，肺泡大小不一，部分肺泡腔變小且肺泡壁變厚甚至實變。治療組雖有炎癥細胞增生，但不明顯，肺泡腔內無滲出物。肺泡壁雖有增厚，但基本結構完整，從整體上看治療組的肺損傷有明顯好轉。

3 討論

畜舍內，家畜排泄物和飼料等有機物的分解，可產生許多化學物質。其中會出現許多有害成分，危害最大的主要有：氨、硫化氫等。在畜舍內，氨大多由含氮有機物(糞、尿、飼料和墊草等)分解而來。畜舍空氣中一定濃度的氨將影響動物的呼吸道疾病，當空氣中氨的濃度達到50～75 mg/m3，對仔豬抗肺部疾病能力產生不良影響。本試驗采用氨氣刺激法構建肺損傷模型，初步探索得出97 mg/m3的氨氣濃度可用于構建肺損傷模型。

氨氣刺激前后兔子呼吸加快可能的原因為：家兔吸入氨氣，氨氣可能刺激呼吸道黏膜細胞并且損傷肺血管內皮細胞[10]，引起炎癥反應，在炎性介質的參與下，肺微毛細血管損傷進而導致肺水腫。同時，氨氣吸入的早期，家兔體內氧自由基增多，氧自由基會對肺細胞生物膜和肺間質造成破壞，影響肺微血管的結構和功能，降低肺的抗炎和抗氧化能力，對肺組織造成損傷使呼吸功能出現障礙。

生化指標檢測結果顯示，模型組比治療組的ALT升高較多，提示氨氣可能對肝細胞造成損傷；BUN升高和CREA處于正常波動范圍，可能氨氣的吸入對腎臟損傷不及肝臟敏感；進入肺泡的氨，大部分被吸收至血液，結果顯示，血氨持續(xù)升高，提示肝細胞可能受損。若加大氨水濃度或增加刺激時間，肝臟可能出現代謝異常甚至出現嚴重病變；經藥物治療后，治療組中ALT、BUN、 血氨較模型組分別降低：34.7%、17.39%、31.3%，提示止咳化痰乳劑可以減少氨氣對肝臟和腎臟的功能損傷。

肺組織病理學診斷結果為，正常組的兔子未見病理損傷，肺泡結構完整。模型組的兔子明顯可見肺間質有大量紅細胞、炎癥細胞浸潤，肺泡腔大小不一，腔內有少量紅細胞滲出，部分肺泡腔變小且肺泡壁變厚甚至實變。血常規(guī)檢測顯示，模型組兔子氨氣刺激后白細胞、淋巴細胞、單核細胞、嗜中性粒細胞呈增高趨勢，比對照組分別提高58.7%、71.7%、50.1%、 116.7%，結合病理切片觀測提示，肺經過氨氣刺激后炎癥損傷比較明顯。

治療組顯示，炎癥明顯好轉，肺間質有少量的炎癥細胞浸潤，出血不明顯，肺泡腔內無滲出物，肺泡隔結構較完整。血常規(guī)檢測顯示，而治療組和模型組相比，白細胞、淋巴細胞、單核細胞、嗜中性粒細胞數量顯著下降，分別降低31.%、36.7%、50.1%、29.2%。說明紫蘇、陳皮、桉葉等中藥對抑制炎性細胞的浸潤，清除體內氧自由基以及對氨氣引起的肺部炎癥損傷有保護作用。

本試驗所用止咳化痰乳劑富含桉葉素、α-蒎烯、紫蘇醛，其機理可能是：紫蘇乙醇提取物可通過調節(jié) Src-家族 酪氨酸激酶信號傳導通路并減少 Ca升動員，調節(jié) N-甲酰L-甲硫氨酰L-白氨酰-L苯丙氨酸刺激的嗜中性粒細胞的激活[11]；降低慢性支 氣管炎大鼠的內皮素-1、丙二醛(Malondialdehyde，MDA)含量，提高超氧化物歧化酶 (Superoxidedismutase，SOD)活性和 NO含量，清除機體自由基，提高機體抗氧化損傷能力，減輕氣道炎癥反應[12,13]；桉葉素、α-蒎烯可能通過抑制TLR4/MyD88通路及NLRP3炎癥小體活化減少IL-1β表達并抑制Th免疫反應從而減輕了氨氣所致的急性肺炎[14]。

綜上所述，天然獸用止咳化痰乳劑對肺損傷有保護作用，為減少抗生素的使用及推廣天然止咳化痰乳劑提供理論依據，同時也為治療呼吸系統(tǒng)疾病提供了新途徑。