黃彥峰，韋家河，農(nóng)生斌

(右江民族醫(yī)學(xué)院，廣西百色53000)

中藥的多成分性已成為共識(shí)，而且在同一味中藥中可以含有作用相反的兩種成分，因此某些中藥對(duì)胃腸運(yùn)動(dòng)功能的調(diào)節(jié)表現(xiàn)出既可興奮低下的胃腸運(yùn)動(dòng)，又可抑制過(guò)亢的胃腸運(yùn)動(dòng)[1]。重樓為百合科植物云南重樓或七葉一枝花的干燥根莖[2]，在我國(guó)主要分布于云南、四川、廣西等地區(qū)[3]，藥理作用主要有抗腫瘤、抗菌、抗心肌缺血、抗氧化、免疫調(diào)節(jié)、止血、驅(qū)蟲、鎮(zhèn)靜、鎮(zhèn)痛、止咳、平喘等[4，5]。其主要化學(xué)成分為甾體皂苷類、黃酮類、三萜類、脂肪酸、多糖、糅質(zhì)、氨基酸類化學(xué)成分以及多種微量元素(如Ca)等，其中甾體皂苷為主要活性成分，可分為螺甾烷醇型、異螺甾烷醇型、呋甾烷醇型和變形螺甾烷醇型[6～10]。本課題組在前期實(shí)驗(yàn)研究發(fā)現(xiàn)，重樓水提和醇提兩種提取液均可抑制在體小鼠胃的運(yùn)動(dòng)，而對(duì)小鼠小腸的運(yùn)動(dòng)則因劑量不同產(chǎn)生不同的效應(yīng)[11]。2016年5月～2018年6月，我們觀察了重樓水提液對(duì)不同機(jī)能狀態(tài)(正常、抑制及亢進(jìn))大鼠離體胃腸運(yùn)動(dòng)的影響，并探討重樓的雙向調(diào)節(jié)作用。

1 材料與方法

1.1 主要材料 重樓(廣西省百色市市售藥材，產(chǎn)地為云南，批號(hào)：150701)；氯化乙酰膽堿(國(guó)藥集團(tuán)化學(xué)試劑有限公司，批號(hào)：92720018)；硫酸阿托品注射液(河南潤(rùn)弘制藥股份有限公司，批號(hào)：1606221)。SD大鼠90只，體質(zhì)量180～220 g，雌雄各半，由右江民族醫(yī)學(xué)院實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心提供，合格證號(hào):SCXK桂2012-0003。BL-420F生物機(jī)能實(shí)驗(yàn)系統(tǒng)、HW-400E恒溫平滑肌槽(成都泰盟科技有限公司)，JH-2型肌張力換能器(北京航天醫(yī)學(xué)工程研究所)。

1.2 實(shí)驗(yàn)方法

1.2.1 重樓水提液的制備[11]稱取重樓飲片50 g，常溫浸泡18 h；加入10倍量水(500 mL)在加熱回流的條件下提取2 h，過(guò)濾留下濾液；取濾渣再加水400 mL提取2 h，合并兩次濾液過(guò)濾，隔水蒸發(fā)濃縮，定容為50 mL；冰箱冷藏，用時(shí)恢復(fù)至室溫，并將藥液pH調(diào)至7。

1.2.2 大鼠離體胃、腸平滑肌的制備 取30只大鼠，頸椎脫臼處死后剖腹,立即取出胃和十二指腸，放入盛有室溫臺(tái)氏液的培養(yǎng)皿中；培養(yǎng)皿中持續(xù)供應(yīng)95% O2和5% CO2的混合氣體，去除相連的腸系膜，并用注射器連接圓鈍的針頭小心沖洗腸腔內(nèi)容物；分別取胃體和十二指腸縱行肌條，每條肌條長(zhǎng)約2 cm。

1.2.3 重樓水提液對(duì)大鼠正常離體胃腸平滑肌收縮活動(dòng)的影響觀察 分別取胃和小腸平滑肌肌條各30段，隨機(jī)分為3組。取一段肌條安放在38 ℃臺(tái)氏液的恒溫平滑肌槽內(nèi)，一端固定在玻璃通氣鉤上，另一端固定于張力換能器上與生物機(jī)能實(shí)驗(yàn)系統(tǒng)相連。維持浴槽內(nèi)臺(tái)氏液溫度(38.0±0.5)℃,并持續(xù)均速通入空氣(約60個(gè)/min氣泡)，調(diào)節(jié)肌條收縮的前負(fù)荷為1.5 g，平衡30 min后記錄正常胃腸平滑肌活動(dòng)曲線。低、高劑量組用微量移液器向平滑肌槽中加入終濃度分別為4×10-6、6×10-6g/L重樓水提液，正常對(duì)照組給等量臺(tái)氏液，記錄給藥前后2 min胃腸運(yùn)動(dòng)曲線。每一次藥液實(shí)驗(yàn)記錄結(jié)束后，用臺(tái)氏液沖洗3次，待胃腸管恢復(fù)后再進(jìn)行下一項(xiàng)實(shí)驗(yàn)。每個(gè)劑量分別進(jìn)行10次，計(jì)算給藥前后大鼠胃腸平滑肌收縮幅度和收縮頻率。

1.2.4 重樓水提液對(duì)阿托品作用后大鼠離體胃腸平滑肌收縮活動(dòng)的影響觀察 分別取胃和小腸平滑肌肌條各60段，隨機(jī)分為6組。前期處理同1.2.3，低、高劑量組分別加入終濃度為4×10-6、6×10-6g/L重樓水提液，阿托品組、阿托品+低劑量組、阿托品+高劑量組均先加入阿托品(2×10-1g/L)，阿托品+低劑量組、阿托品+高劑量組再分別加入終濃度為4×10-6、6×10-6g/L重樓水提液，正常對(duì)照組加入等量的臺(tái)氏液。記錄加入各組藥液后2 min離體胃腸平滑肌收縮縮幅度和收縮頻率，方法同1.2.3。

1.2.5 重樓水提液對(duì)乙酰膽堿作用后大鼠離體胃腸平滑肌收縮活動(dòng)的影響觀察 分別取胃和小腸平滑肌肌條各60段，前期處理同1.2.3，分組方法、實(shí)驗(yàn)操作及記錄方法同1.2.4，僅操作中將阿托品更換為乙酰膽堿(4×10-6g/L)。

2 結(jié)果

2.1 重樓水提液對(duì)大鼠離體胃、腸平滑肌收縮活動(dòng)的影響 與給藥前比較，高、低劑量組大鼠離體胃平滑肌收縮幅度減小、收縮頻率減慢(P均<0.01)，小腸平滑肌收縮幅度增大(P<0.05或<0.01)；低劑量組大鼠離體小腸平滑肌收縮頻率減慢(P均<0.01)，但高劑量組收縮頻率無(wú)明顯變化(P均>0.05)。見(jiàn)表1。

2.2 重樓水提液對(duì)阿托品誘導(dǎo)的離體胃腸平滑肌收縮活動(dòng)的影響 與正常對(duì)照組比較，其余各組大鼠離體胃平滑肌收縮幅度減小、收縮頻率減慢(P均<0.01)；與阿托品組比較，高劑量組、低劑量組、阿托品+低劑量組胃平滑肌收縮幅度增大、頻率加快(P<0.05或<0.01)。與正常對(duì)照組比較，高劑量組小腸平滑肌收縮幅度增大(P﹤0.05)，阿托品組收縮幅度減小、頻率減慢(P均﹤0.01)，阿托品+

表1 重樓水提液對(duì)大鼠離體胃腸平滑肌收縮活動(dòng)的影響

注：與同組給藥前比較，aP<0.05，bP<0.01。低劑量組、阿托品+高劑量組收縮幅度減慢(P均﹤0.01)，阿托品+低劑量組收縮頻率減慢(P﹤0.05)；與阿托品組比較，高劑量組、低劑量組、阿托品+低劑量組、阿托品+高劑量組小腸平滑肌收縮幅度增大、頻率加快(P<0.05或<0.01)。見(jiàn)表2。

表2 重樓水提液對(duì)阿托品誘導(dǎo)的離體胃腸平滑肌收縮活動(dòng)的影響

注：與正常對(duì)照組比較，aP<0.05，bP<0.01；與阿托品組比較，cP<0.05，dP<0.01。

2.3 重樓水提液對(duì)乙酰膽堿誘導(dǎo)的離體胃腸平滑肌收縮活動(dòng)的影響 與正常對(duì)照組比較，高、低劑量組胃平滑肌收縮幅度減小、收縮頻率減慢(P均﹤0.01)，乙酰膽堿組、乙酰膽堿+低劑量組、乙酰膽堿+高劑量組胃平滑肌收縮幅度增大、收縮頻率減慢(P<0.05或<0.01)；與乙酰膽堿組比較，高劑量組、低劑量組、乙酰膽堿+低劑量組、乙酰膽堿+高劑量組胃平滑肌收縮幅度減小(P均﹤0.01)。與正常對(duì)照組比較，高劑量組小腸平滑肌收縮幅度增大(P﹤0.05)，乙酰膽堿組收縮幅度增大且收縮頻率減慢(P均﹤0.05)，乙酰膽堿+低劑量組、乙酰膽堿+高劑量組收縮幅度減小(P均﹤0.01)；與乙酰膽堿組比較，乙酰膽堿+低劑量組、乙酰膽堿+高劑量組小腸平滑肌收縮幅度減小且收縮頻率加快(P<0.05或<0.01)。見(jiàn)表3。

3 討論

胃腸平滑肌痙攣所致腹痛、腹瀉等是臨床常見(jiàn)的疾病[12]，西醫(yī)臨床治療常以抗膽堿能藥解除胃痙攣，不良反應(yīng)比較大，所以應(yīng)用中藥治療逐漸被人們重視。

表3 重樓水提液對(duì)乙酰膽堿誘導(dǎo)的離體胃腸平滑肌收縮活動(dòng)的影響

注：與正常對(duì)照組比較，aP<0.05，bP<0.01；與乙酰膽堿組比較，cP<0.05，dP<0.01。

食物的研磨、排空、消化及吸收均需要胃腸運(yùn)動(dòng)來(lái)完成，胃腸運(yùn)動(dòng)過(guò)快或太慢都不利于營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)的消化和吸收。重樓水提液能使大鼠離體胃平滑肌收縮幅度減小，收縮頻率減慢；由此推斷，重樓水提液能抑制胃痙攣，緩解胃疼痛，對(duì)治療胃痙攣有一定療效，其解痙機(jī)制可能與重樓主要化學(xué)成分甾體皂苷中的呋甾烷苷元結(jié)構(gòu)有關(guān)[13]。重樓水提液能使大鼠離體小腸平滑肌收縮幅度增大，提示重樓水提液能增強(qiáng)小腸運(yùn)動(dòng)，對(duì)治療便秘、非潰瘍性消化不良等疾病有一定療效；其機(jī)制可能與甾體皂苷抑制磷酸二酯酶達(dá)到抑制血管擴(kuò)張有關(guān)[13]，是否與其微量元素中Ca的含量有關(guān)，尚待進(jìn)一步研究。

中藥雙向調(diào)節(jié)作用，是指同一中藥及其組成的方劑，在機(jī)體不同狀態(tài)下以不同的方式應(yīng)用，可以發(fā)揮出趨向相反的作用[14]。阿托品為膽堿能M受體阻斷劑，與M受體結(jié)合后競(jìng)爭(zhēng)性拮抗乙酰膽堿的激動(dòng)作用[15]。乙酰膽堿是平滑肌內(nèi)興奮傳遞的化學(xué)物質(zhì)能,激動(dòng)M膽堿受體使胞內(nèi)第二信使三磷酸肌醇和二?；视蜐舛壬仙?進(jìn)而引起Ca2+釋放和底物蛋白磷酸化激發(fā)平滑肌產(chǎn)生收縮效應(yīng)[16]。本研究觀察到使用M受體阻斷劑阿托品干預(yù)后，重樓水提液能使大鼠離體胃腸平滑肌收縮幅度增大，收縮頻率加快；使用M受體激動(dòng)劑乙酰膽堿干預(yù)后，重樓水提液能使大鼠離體胃腸平滑肌收縮縮幅度減弱；上述結(jié)果提示，重樓水提液在機(jī)體不同狀態(tài)下發(fā)揮出趨向相反的作用，即中藥雙向調(diào)節(jié)作用。劉星等[17]研究發(fā)現(xiàn)，重樓皂苷能激活細(xì)胞內(nèi)多種信號(hào)傳遞途徑增加細(xì)胞內(nèi)Ca2+濃度，調(diào)節(jié)子宮平滑肌的節(jié)律性收縮。蘇佳等[18]研究發(fā)現(xiàn)，重樓總皂苷對(duì)大鼠子宮平滑肌收縮活動(dòng)的調(diào)節(jié)與PLA2/AA信號(hào)途徑的激活有關(guān)。由此推斷，使用阿托品干預(yù)后,重樓皂苷通過(guò)激活細(xì)胞內(nèi)多種信號(hào)傳遞途徑增加細(xì)胞內(nèi)Ca2+濃度，來(lái)增強(qiáng)大鼠離體胃腸平滑肌收縮幅度和頻率。Corea等[19]研究發(fā)現(xiàn)，呋甾烷皂苷可以顯著抑制乙酰膽堿和組胺誘導(dǎo)的豚鼠離體回腸的強(qiáng)烈痙攣。由此推斷，使用乙酰膽堿干預(yù)后,呋甾烷皂苷通過(guò)直接抑制乙酰膽堿來(lái)減弱大鼠離體胃腸平滑肌收縮幅度。

綜上所述，重樓水提液對(duì)阿托品、乙酰膽堿誘導(dǎo)的離體胃腸運(yùn)動(dòng)具有雙向調(diào)節(jié)作用。如今，中藥的雙向調(diào)節(jié)作用已廣泛應(yīng)用于臨床實(shí)踐。在臨床應(yīng)用此類中藥時(shí)，應(yīng)根據(jù)機(jī)體當(dāng)時(shí)的生理、生化狀態(tài)，采用不同的煎煮、炮制或者使用藥物的不同有效成分，最恰當(dāng)?shù)匕l(fā)揮藥物療效。運(yùn)用好中藥的雙向調(diào)節(jié)作用理論，對(duì)中藥在臨床的辨證用藥有很大的指導(dǎo)意義，有助于推動(dòng)中醫(yī)臨床醫(yī)學(xué)的發(fā)展。