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        苦參素聯(lián)合扁桃苷治療小鼠肝纖維化的相關研究

        2018-12-04 10:52:30閆冰川江鵬江偉熾洪健
        新中醫(yī) 2018年12期
        關鍵詞:天狼星抗肝苦參素

        閆冰川,江鵬,江偉熾,洪健

        廣州醫(yī)科大學附屬腫瘤醫(yī)院,廣東 廣州 510095

        肝纖維化是指由肝炎病毒感染、酒精、寄生蟲等多種致病因素導致的肝內纖維異常沉積與結締組織異常增生過程,是包括乙型肝炎,酒精性肝炎在內的大多數(shù)慢性肝臟疾病的共同病理過程,并且最終可以發(fā)展為肝硬化甚至肝癌[1~2]。我國是肝病大國,目前各類肝病人口約有2億[3],其中相當一部分伴有肝纖維化甚至肝硬化。但目前尚無非常有效的肝纖維化治療藥物,因此迫切需要研究開發(fā)新的抗肝纖維化藥物[4]。

        苦參素是由中草藥苦參中提取分離的一種活性生物堿。研究顯示其對病毒性肝炎、肝纖維化、肝硬化以及肝癌均有一定的治療效果[5~7]。扁桃苷又名苦杏仁苷,是中藥苦杏仁及桃仁中的主要有效成分。報道顯示扁桃苷對肝纖維化也有一定的治療作用[8]。但目前尚不明確這2種藥物在治療肝纖維化方面是否具有協(xié)同作用。本研究利用四氯化碳(CCl4)誘導小鼠肝纖維化模型,以探討苦參素聯(lián)合扁桃苷對肝纖維化的治療效果。

        1 材料與方法

        1.1 實驗動物與主要試劑 6周齡雄性C57BL/6小鼠,體質量18~22 g,購自北京維通利華公司,實驗動物許可證號:SCXK(京)2016-0011。CCl4和橄欖油購自國藥試劑公司,苦參素購自上海藍木化工公司,扁桃苷購自美國Sigma公司,天狼星紅染色試劑盒購自珠海貝索公司,羥脯氨酸檢測試劑盒購自英國Abcam公司,谷丙轉氨酶(ALT)和谷草轉氨酶(AST)檢測試劑盒購自南京建成公司。實驗所用CCl4用橄欖油稀釋至實驗所需濃度。

        1.2 模型制備及給藥方法 將40只小鼠隨機分為正常組5只、模型組5只、苦參素組10只、扁桃苷組10只、聯(lián)合治療組10只。其中正常組小鼠給予每周3次100 μL橄欖油灌胃,其他各組小鼠給予每周3次100 μL 40%CCl4(橄欖油稀釋)灌胃,誘導肝纖維化。灌胃持續(xù)8周,其中第5~8周按實驗設計分別給予苦參素組、扁桃苷組和聯(lián)合治療組小鼠單藥或聯(lián)合用藥治療??鄥⑺亟M小鼠給予200 mg/(kg·d)的苦參素灌胃;扁桃苷組給予200 mg/(kg·d)的扁桃苷灌胃;聯(lián)合用藥組小鼠同時給予200 mg/(kg·d)的苦參素和200 mg/(kg·d)的扁桃苷灌胃??鄥⑺厥褂蒙睇}水溶解,配制成50 mg/mL濃度的工作液;扁桃苷難溶于水,使用0.5%濃度的羥甲基纖維素鈉水溶液配置成50 mg/mL濃度的懸濁液,于每次灌胃前經(jīng)超聲混勻;聯(lián)合用藥組藥物,先配制50 mg/mL濃度的扁桃苷懸濁液,再溶入苦參素,使苦參素的終濃度達到50 mg/mL。給藥期間,正常組及模型組小鼠每天給予等量生理鹽水灌胃。

        1.3 實驗指標檢測方法 于第8周結束后處死所有小鼠,保留肝臟組織新鮮組織標本、石蠟標本和血標本用于檢測肝纖維化及相關指標情況,比較不同治療方式的治療效果。其中新鮮組織標本按照試劑盒說明書檢測羥脯氨酸濃度;石蠟包埋組織標本切取4 μm后組織切片,按相應試劑說明書行天狼星紅染色,按照Ishak標準進行肝纖維化評分[9],并使用ImageJ軟件對天狼星紅染色切片中的膠原染色面積進行定量。保存的血標本按照試劑盒說明書檢測小鼠ALT和AST水平,用于評價小鼠肝功能水平變化。

        1.4 統(tǒng)計學方法 采用SPSS23.0軟件對實驗數(shù)據(jù)進行分析,計量資料以(±s)表示,兩兩比較采用t檢驗或單因素方差分析進行統(tǒng)計,以P<0.05為差異有統(tǒng)計學意義。

        2 結果

        2.1 各組小鼠一般情況及體質量變化結果比較 見圖1。正常組小鼠的體質量呈逐漸增加的趨勢。與正常組比較,模型組小鼠的體質量明顯下降(P<0.01)。與模型組比較,3組給藥治療小鼠精神、活動、毛色和飲食均有所改善,體質量有所增長,但僅聯(lián)合用藥組差異有統(tǒng)計學意義(P<0.01)。

        圖1 各組小鼠體質量變化結果比較

        2.2 各組小鼠天狼星紅染色結果比較 見圖2、3。正常組小鼠無肝纖維化,Ishak評分為0,天狼星紅染色面積與羥脯氨酸占比較低;與正常組比較,模型組小鼠肝纖維化明顯,平均Ishak評分超過4分,天狼星紅染色明顯,羥脯氨酸升高,差異有統(tǒng)計學意義(P<0.01);與模型組比較,苦參素組、扁桃苷組、聯(lián)合用藥組在肝纖維化Ishak評分,天狼星紅染色面積和羥脯氨酸占比方面均有明顯改善,以聯(lián)合用藥組改善最明顯,差異均有統(tǒng)計學意義(P<0.01)。

        圖2 各組小鼠肝臟組織切片典型天狼星紅染色結果比較(×100)

        圖3 各組小鼠肝纖維化Ishak評分、天狼星紅膠原染色面積及羥脯氨酸檢測結果比較

        2.3 各組小鼠血ALT、AST變化結果比較 見圖4。與正常組比較,模型組小鼠的血ALT和AST均明顯升高(P<0.01)。與模型組比較,各給藥組小鼠血ALT、AST均有一定程度的下降,以聯(lián)合用藥組效果最明顯,差異均有統(tǒng)計學意義(P<0.05)。

        圖4 各組小鼠血ALT與AST變化結果比較

        3 討論

        肝纖維化是多種慢性肝病發(fā)生發(fā)展過程中伴隨的肝臟基質與纖維成分異常沉積的病理過程。在各種肝損傷因素的長期作用下引起的慢性肝炎肝損傷,導致肝星狀細胞激活、增殖并分泌產(chǎn)生大量的基質成分,導致肝纖維化,并可以進一步發(fā)展為肝硬化和肝癌[4]。肝纖維化發(fā)病率較高,并且可以發(fā)展為肝硬化和肝癌,是一種嚴重危害人民群眾身體健康的疾病。雖然有研究已經(jīng)發(fā)現(xiàn)了一些具有一定抗肝纖維化作用的藥物,但到目前為止尚無非常理想的抗肝纖維化治療藥物。因此探索多藥聯(lián)合的抗肝纖維化治療方案,提高藥物治療肝纖維化的效果,具有重要的研究意義。本研究通過CCl4誘導的肝纖維化動物模型,證實了苦參素與扁桃苷聯(lián)用可以有效的減輕實驗小鼠的肝纖維化程度,有明顯的肝纖維化治療效果。

        本研究驗證了苦參素與扁桃苷的抗纖維化作用,同時也進一步證實了這2種藥物聯(lián)用具有更顯著的抗肝纖維化治療效果。但目前對于這2種藥物的抗肝纖維化分子機制仍不明確,需要進一步的試驗研究確定相關機制。同時也需要進一步的臨床試驗,評估這2種藥物聯(lián)用的實際臨床應用價值。

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