江 杰 何 波 吳 莉 謝曉潔 金文鳳 韓 丹

(昆明醫(yī)科大學(xué)第一附屬醫(yī)院醫(yī)學(xué)影像科，昆明650032)

惡性胸膜間皮瘤(Malignant pleural mesothel-ioma,MPM)是來(lái)源于胸膜的少見(jiàn)惡性腫瘤，具有早期不易診斷、惡性程度及病死率高、預(yù)后差等特點(diǎn)[1]。早期診斷、治療對(duì)改善生活質(zhì)量、延長(zhǎng)生存周期具有重要臨床價(jià)值。石棉暴露是造成MPM發(fā)病的主要因素，潛伏期可長(zhǎng)達(dá)20～40年[2]，對(duì)高危人群早期篩查、診斷是業(yè)界努力的方向。影像學(xué)檢查在MPM診斷與鑒別診斷中具有一定價(jià)值，但對(duì)高危人群早期診斷意義不大。目前研究認(rèn)為血清可溶性間皮素相關(guān)蛋白(Soluble mesothelin-related proteins，SMRP)僅在間皮細(xì)胞中表達(dá)，在胸膜間皮瘤、卵巢癌、胰腺癌中存在高表達(dá)[2,5]。研究發(fā)現(xiàn)MPM患者SMRP水平明顯高于其他肺或胸膜疾病的患者，有石棉接觸史的高危人群SMRP水平高于非暴露人群，說(shuō)明早期篩查具有重要意義，但相關(guān)報(bào)道較少，主要集中在分析胸腔積液的SMRP[6]，對(duì)血清研究較少，國(guó)內(nèi)未見(jiàn)相關(guān)報(bào)道，并缺乏大樣本研究、未見(jiàn)對(duì)腫瘤不同時(shí)期的SMRP表達(dá)水平進(jìn)行系統(tǒng)研究，尚需要進(jìn)一步深入研究。因此本研究采用青石棉誘導(dǎo)大鼠MPM，分析不同時(shí)間段的SMRP表達(dá)水平，探討早期診斷MPM的可行性。

1 材料與方法

1.1MPM誘導(dǎo) SD大鼠32只，雌雄各半，體重120～150 g，購(gòu)自昆明醫(yī)科大學(xué)動(dòng)物實(shí)驗(yàn)中心，許可證編號(hào)SYXK(滇)K2015-0002。分為3組，A組(實(shí)驗(yàn)組)20只采用青石棉纖維混懸液，胸膜腔閉式注射，每次20 mg/ml，每月一次，連續(xù)兩次；B組(陰性對(duì)照組)6只：采用相同方法胸膜腔注射等量滅菌生理鹽水；C組(空白對(duì)照組)6只：不作任何處理。3組按相同方法飼養(yǎng)。

1.2CT檢查及圖像分析 誘導(dǎo)后3個(gè)月、6個(gè)月進(jìn)行CT掃描。采用GE公司128層CT[Ingenuity CT，Philips Medical Systems(Cleveland)Inc,Israel]，胸腹部平掃及增強(qiáng)。掃描參數(shù)：管電壓為100 kV，管電流100 mAs，準(zhǔn)直器16 mm×0.6 mm，螺距0.7，旋轉(zhuǎn)時(shí)間1.0 s，層厚2.0 mm。對(duì)比劑采用碘普羅胺注射液(Iopromide Injection,370 mgI/ml,Bayer Healthcare,Germany)，流率0.2 ml/s，總量3 ml。圖像分析：CT圖像上觀察有無(wú)胸膜增厚，增厚程度分為輕度增厚<5 mm、中度增厚5～10 mm、明顯增厚>10 mm。

1.3SMRP測(cè)定 抽取大鼠尾靜脈血1 ml，采用ELISA法測(cè)定血清SMRP濃度，檢測(cè)試劑盒及標(biāo)準(zhǔn)品購(gòu)自上海酶聯(lián)生物科技有限公司。分別測(cè)定誘導(dǎo)前、誘導(dǎo)后1個(gè)月、2個(gè)月、3個(gè)月、6個(gè)月三組血清SMRP。

1.4病理分析 對(duì)實(shí)驗(yàn)期間死亡大鼠進(jìn)行解剖，選取可疑腫瘤及病理分析。

2 結(jié)果

2.1誘導(dǎo)后3個(gè)月、6個(gè)月CT掃描結(jié)果及病理檢查(圖1) A組：3個(gè)月進(jìn)行CT掃描20例，未發(fā)現(xiàn)胸膜病變13例，發(fā)現(xiàn)胸膜病變7例，胸膜輕度增厚4例、中度1例、明顯2例，明顯增厚的2例均死亡。病理檢查均為上皮型胸膜間皮瘤。6個(gè)月CT掃描18例：未發(fā)現(xiàn)胸膜病變3例，出現(xiàn)胸膜病變15例，胸膜輕度增厚6例、中度5例、明顯4例，明顯增厚中3例均死亡。病理檢查2例為上皮型胸膜間皮瘤，1例為肉瘤型胸膜間皮瘤。B組、C組：3個(gè)月、6個(gè)月均未出現(xiàn)胸膜病變。B組、C組：死亡1例。死亡原因未知。

2.2SMRP測(cè)定結(jié)果(表1) A組、B組、C組3組在不同時(shí)間段SMRP濃度差異比較采用方差分析，兩兩比較則用LSD檢驗(yàn)，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(F=161.07，P<0.05)，進(jìn)一步比較，3組誘導(dǎo)前SMRP濃度均沒(méi)有差異，B組、C組各個(gè)時(shí)間段均沒(méi)有差異，與A組注射后各個(gè)時(shí)間點(diǎn)均有差異。A組中誘導(dǎo)前、后均有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異，A組中誘導(dǎo)后一個(gè)月、兩個(gè)月組間無(wú)差異，與3個(gè)月、6個(gè)月均有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異。A組中隨著時(shí)間推移，SMRP濃度逐漸升高。B組、C組SMRP表達(dá)低，隨著時(shí)間推移無(wú)明顯變化。

圖1 CT圖像及病理結(jié)果Fig.1 CT images and pathologic resultNote: A.Lung window；B.Mediastinal window, showed uneven pleural thickening and nodule formation in the upper lobe of the right lung(arrow)；C.The epithelial MPM was confirmed(HE×100).

表2胸膜厚度與SMRP表達(dá)量的差異比較(pmol/ml)

Tab.2RelationshipbetweenpleuralthicknessandSMRPexpressionlevel(pmol/ml)

GroupsnThird monthnSixth monthNegative137.88±0.1138.03±0.91Mild thickening410.51±0.23610.34±0.21Moderate thickening111.84 512.27±0.40Obvious thickening214.13±0.23415.66±1.57F value933.67150.98P value0.0000.000

2.3胸膜厚度與SMRP表達(dá)量之間的關(guān)系(表2) 3個(gè)月：13例為陰性。胸膜增厚7例：輕度4例，中度1例，2例明顯增厚，均死亡。6個(gè)月：3例為陰性。胸膜增厚 15例：輕度6例，中度5例，4例明顯增厚，死亡3例。3個(gè)月、6個(gè)月不同程度胸膜增厚組的SMRP表達(dá)量差異采用方差分析，F(xiàn)值分別為933.67、150.98，P<0.05，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，進(jìn)一步兩兩比較，均具有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異。分析胸膜厚度與SMRP表達(dá)量之間的關(guān)系采用Spearman相關(guān)分析，3個(gè)月、6個(gè)月相關(guān)系數(shù)分別為0.90、0.93，F(xiàn)值分別為0.01、0.007<0.05,具有較強(qiáng)相關(guān)性，隨著胸膜厚度增加，SMRP表達(dá)量逐漸升高。

3 討論

人類間皮素基因是一種新發(fā)現(xiàn)的腫瘤細(xì)胞表面抗原，僅表達(dá)在體腔表面的間皮細(xì)胞。間皮素包括兩個(gè)異構(gòu)體，其中異構(gòu)體2由于保留了第16和17外顯子間的內(nèi)含子，使其蛋白翻譯提前終止，從細(xì)胞表面脫落形成SMRP，與間皮素的膜連接部分完全相同。SMRP在多種腫瘤患者血清中為陽(yáng)性，但在惡性胸膜間皮瘤、非黏液性卵巢癌及胰腺癌中高表達(dá)，也有研究發(fā)現(xiàn)肺癌患者中亦有表達(dá)[7]。目前研究認(rèn)為血清SMRP是一種有助于診斷上述幾種腫瘤的標(biāo)志物，并認(rèn)為SMRP與腫瘤分期及腫瘤負(fù)荷有關(guān)，腫瘤晚期及腫瘤負(fù)荷重者SMRP升高，提示測(cè)定血清SMRP水平可作為一種預(yù)后指標(biāo)來(lái)評(píng)價(jià)病變進(jìn)展過(guò)程及對(duì)治療的反應(yīng)[8]，此外報(bào)道認(rèn)為間皮素可能與腫瘤發(fā)生、形成、轉(zhuǎn)移等多個(gè)環(huán)節(jié)有關(guān)，有望成為生物靶向治療的優(yōu)質(zhì)靶點(diǎn)。

以往證實(shí)SMRP表達(dá)水平對(duì)于早期診斷MPM具有一定價(jià)值，研究多集中在胸腔積液，而MPM患者出現(xiàn)胸腔積液多屬中晚期，所以分析胸腔積液的SMRP對(duì)早期診斷MPM臨床意義可能不大。

表1A組、B組、C組3組不同時(shí)間段SMRP表達(dá)量的差異比較(pmol/ml)

Tab.1SMRPexpressionlevelsinA,BandCgroups(pmol/ml)

GroupsnBefore injectionFirst monthSecond monthThird monthSixth month A 200.13±0.133.28±0.473.78±0.529.53±1.8512.32±2.16B 60.13±0.250.12±0.170.12±0.210.13±0.090.12±0.15C60.12±0.210.12±0.180.11±0.230.13±0.310.12±0.11F value161.07P value0.000

分析血清SMRP表達(dá)情況較少，研究結(jié)果差異較大[9,10]，Hollevoet 等[10]研究認(rèn)為以間皮素診斷MPM特異性為96%，靈敏度為47%。研究認(rèn)為SMRP與MPM進(jìn)展、總生存率之間沒(méi)有相關(guān)性，也有研究證明SMRP水平與總體生存年限呈負(fù)相關(guān)[10]。因此以SMRP表達(dá)水平來(lái)分析MPM早期診斷、評(píng)估進(jìn)展及預(yù)后需要更多樣本、更標(biāo)準(zhǔn)化的研究進(jìn)一步分析。 本研究分別分析誘導(dǎo)后3、6個(gè)月的CT表現(xiàn)，前期研究認(rèn)為MPM出瘤率主要是第7個(gè)月開(kāi)始，此時(shí)CT檢查多有陽(yáng)性發(fā)現(xiàn)，而早于3個(gè)月CT多為陰性表現(xiàn)，因此本研究設(shè)定3個(gè)月、6個(gè)月行CT檢查。三組在不同時(shí)間的SMRP濃度差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，A組中注射后1個(gè)月、2個(gè)月組間無(wú)差異，與3個(gè)月、6個(gè)月均有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異。A組中隨著時(shí)間推移，SMRP濃度逐漸升高。B組、C組SMRP表達(dá)低，隨著時(shí)間推移無(wú)明顯變化。另外本研究發(fā)現(xiàn)在CT表現(xiàn)為陰性的病例中，同樣發(fā)現(xiàn)SMRP表達(dá)陽(yáng)性，隨著時(shí)間推移，SMRP濃度逐漸升高，說(shuō)明SMRP對(duì)早期診斷MPM有一定價(jià)值，可先于影像學(xué)檢查出現(xiàn)異常，也表明SMRP表達(dá)對(duì)石棉暴露者可能發(fā)展為MPM有一定提示價(jià)值，這與文獻(xiàn)報(bào)道一致[3]。文獻(xiàn)認(rèn)為胸膜厚度可間接反映病變的分期、預(yù)后評(píng)估，尤其是對(duì)術(shù)后患者分析胸膜厚度的變化作為治療療效的一個(gè)重要評(píng)價(jià)指標(biāo)，因此本研究分析了胸膜厚度與SMRP之間的相關(guān)性，發(fā)現(xiàn)具有較強(qiáng)相關(guān)性，隨著胸膜厚度不同程度增加，SMRP表達(dá)量逐漸升高，也可說(shuō)明SMRP表達(dá)對(duì)腫瘤的分期、評(píng)估病變進(jìn)展有一定價(jià)值。本研究屬于研究課題的一部分內(nèi)容，僅分析SMRP不同時(shí)期差異，未分析不同分期MPM的SMRP表達(dá)量差異，未探討影像學(xué)檢查聯(lián)合SMRP表達(dá)早期診斷MPM的價(jià)值，后續(xù)的研究中將進(jìn)一步擴(kuò)展。

綜上所述，SMRP表達(dá)水平對(duì)早期篩查MPM、早期診斷、分期均有一定價(jià)值，可作為早期篩查MPM高危人群的一項(xiàng)重要生化指標(biāo)。