晏家友，張 純，李書偉，鄺聲耀

（四川省畜牧科學(xué)研究院，動(dòng)物遺傳育種四川省重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室，四川成都 610066）

銅是動(dòng)物機(jī)體必需的微量元素。銅作為各種酶（如銅藍(lán)蛋白、銅鋅超氧化物歧化酶、賴氨酰氧化酶、酪氨酸酶等）的組成成分或激活劑，直接參與機(jī)體代謝，發(fā)揮重要的營養(yǎng)功能[1-2]。目前，飼料工業(yè)應(yīng)用的銅源主要有氨基酸絡(luò)（螯）合銅、蛋白銅、酵母銅、硫酸銅和堿式氯化銅等，其中氨基酸絡(luò)（螯）合銅、蛋白銅和酵母銅為有機(jī)銅，硫酸銅和堿式氯化銅為無機(jī)銅。大量研究證實(shí)，有機(jī)銅的生物學(xué)利用率高于無機(jī)銅；與無機(jī)銅相比，有機(jī)銅可以減少動(dòng)物排泄物中的銅含量，降低重金屬對(duì)環(huán)境的污染[3-5]。近年來，隨著人們對(duì)食品安全和環(huán)境保護(hù)意識(shí)增強(qiáng)，動(dòng)物飼料中限制無機(jī)銅用量的呼聲越來越高。因此，本試驗(yàn)旨在研究日糧中添加不同銅源對(duì)仔豬生長性能、腹瀉率及血清免疫和抗氧化功能的影響，為有機(jī)銅在仔豬上的進(jìn)一步推廣和應(yīng)用提供依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 試驗(yàn)材料 檸檬酸銅由四川省畜科飼料有限公司生產(chǎn)，銅含量≥34.0%；硫酸銅由成都蜀星飼料有限公司生產(chǎn)，銅含量≥25.1%；堿式氯化銅由四川康貝爾生物科技有限公司生產(chǎn)，銅含量≥58.1%。

1.2 試驗(yàn)設(shè)計(jì) 選用21日齡斷奶、健康、平均體重（6.41±0.32）kg的杜×長×大仔豬64頭，按單因素試驗(yàn)設(shè)計(jì)原則，隨機(jī)分為4個(gè)處理，每個(gè)處理4個(gè)重復(fù)，每個(gè)重復(fù)4頭豬（公、母各半）。對(duì)照組不額外添加銅，試驗(yàn)在基礎(chǔ)日糧中分別添加了90 mg/kg硫酸銅、90 mg/kg堿式氯化銅或90 mg/kg檸檬酸銅，均以銅計(jì)。預(yù)試期3 d，正試期28 d。

1.3 試驗(yàn)日糧 試驗(yàn)日糧參照NRC（2012）《豬的營養(yǎng)需要》和《中國飼料成分及營養(yǎng)價(jià)值表（2017）》配制。日糧組成及營養(yǎng)成分見表1。

表1 日糧組成及營養(yǎng)成分（風(fēng)干基礎(chǔ)）

1.4 飼養(yǎng)管理 飼養(yǎng)試驗(yàn)在西南大學(xué)科教實(shí)訓(xùn)基地進(jìn)行。豬舍舍溫控制在25～28 ，相對(duì)濕度控制在50%～70%。仔豬在斷奶后最初3 d內(nèi)限量飼喂，3 d后自由采食。試驗(yàn)期間仔豬自由飲水。每日清掃豬舍1次，每隔4 d對(duì)豬舍進(jìn)行噴霧消毒1次。仔豬免疫程序及其他飼養(yǎng)管理按常規(guī)進(jìn)行。

1.5 樣品采集 試驗(yàn)結(jié)束后，從每個(gè)重復(fù)隨機(jī)選取1頭公豬，前腔靜脈采血10 mL，于室溫下靜置0.5 h，2 000 r/mim 離心10 min，制備血清，于-20 冷凍保存，用于測定免疫和抗氧化指標(biāo)。

1.6 測定指標(biāo)與方法

1.6.1 生長性能 試驗(yàn)開始和結(jié)束時(shí)，分別對(duì)每頭仔豬進(jìn)行空腹稱重。試驗(yàn)期內(nèi)，以重復(fù)為單位，記錄投料量和剩料量（余料量+損耗量），實(shí)際采食量=投料量—剩料量。根據(jù)平均日增重（ADG）和平均日采食量（ADFⅠ）計(jì)算耗料增重比（F/G）。

1.6.2 腹瀉率 試驗(yàn)期內(nèi)，每天連續(xù)觀測仔豬的排糞情況，并對(duì)糞便進(jìn)行感觀評(píng)分（0分：條形或粒形；1分：軟糞、成形；2分：稠狀、成形、糞水無分離現(xiàn)象；3分：液狀、不成形、糞水有分離現(xiàn)象），將得分為2分和3分者判定為腹瀉[6]。統(tǒng)計(jì)整個(gè)試驗(yàn)期各處理仔豬腹瀉頭次數(shù)，計(jì)算腹瀉率：

1.6.3 血清免疫和抗氧化指標(biāo) 血清免疫指標(biāo)包含免疫球蛋白A（ⅠgA）、免疫球蛋白G（ⅠgG）和免疫球蛋白M（ⅠgM），血清抗氧化指標(biāo)包含丙二醛（MDA）和銅藍(lán)蛋白（CuP）。血清免疫和抗氧化指標(biāo)按照南京建成生物工程研究所生產(chǎn)的試劑盒說明書進(jìn)行測定，使用的儀器為日立7600全自動(dòng)生化儀和UVⅠKON XS型分光光度計(jì)。

1.7 統(tǒng)計(jì)分析 利用SAS V8 軟件包編程進(jìn)行數(shù)據(jù)統(tǒng)計(jì)分析。試驗(yàn)結(jié)果以平均值±標(biāo)準(zhǔn)差表示。試驗(yàn)數(shù)據(jù)采用One-Way ANOVA檢驗(yàn)，組間差異進(jìn)行Tukey多重比較。各處理與對(duì)照組間腹瀉率差異顯著性采用U檢驗(yàn)。以P＜0.05為差異顯著判斷標(biāo)準(zhǔn)。

2 結(jié)果與分析

2.1 不同銅源對(duì)仔豬生長性能的影響 由表2可以看出，檸檬酸銅組仔豬ADG較對(duì)照組提高25.89%（P＜0.05），而硫酸銅組、堿式氯化銅組ADG與對(duì)照組無顯著差異（P＞0.05）。各組仔豬ADFⅠ和F/G無顯著差異（P＞0.05）。

2.2 不同銅源對(duì)仔豬腹瀉率的影響 對(duì)照組、硫酸銅組、堿式氯化銅組和檸檬酸銅組仔豬腹瀉率分別為2.68%、2.68%、2.46%和0.89%，檸檬酸銅組仔豬的腹瀉率較對(duì)照組、硫酸銅組或堿式氯化銅組顯著降低（P＜0.05）。

2.3 不同銅源對(duì)仔豬血清免疫和抗氧化功能的影響 由表3可以看出，檸檬酸銅組仔豬血清MDA含量較對(duì)照組降低21.38%（P＜0.05），而硫酸銅組、堿式氯化銅組與對(duì)照組無顯著差異（P＞0.05）。各組仔豬血清ⅠgA、ⅠgG、ⅠgM和CuP含量均無顯著差異（P＞0.05）。

表2 不同銅源對(duì)仔豬生長性能的影響

表3 不同銅源對(duì)仔豬血清免疫和抗氧化功能的影響

3 討 論

植物性飼料中銅含量普遍較低，不能滿足動(dòng)物對(duì)銅的營養(yǎng)需要，所以在配合飼料中需要額外補(bǔ)銅。養(yǎng)殖生產(chǎn)中使用高劑量無機(jī)銅會(huì)給動(dòng)物自身、畜禽產(chǎn)品及生態(tài)環(huán)境來極大的安全隱患。我國農(nóng)業(yè)農(nóng)村部發(fā)布的第2625號(hào)公告《飼料添加劑安全使用規(guī)范》對(duì)飼料中銅使用作出了進(jìn)一步限制和限量。因此，研究和應(yīng)用安全環(huán)保的有機(jī)銅已成為當(dāng)今飼料行業(yè)的發(fā)展趨勢。Peng等[7]研究表明，在日糧中添加30 mg/kg或60 mg/kg檸檬酸銅可以顯著提高斷奶仔豬ADG。本試驗(yàn)也表明，在日糧中添加90 mg/kg檸檬酸銅可以顯著提高仔豬ADG。由此可見，檸檬酸銅可改善仔豬生長性能。關(guān)于不同銅源對(duì)仔豬生長性能的影響結(jié)果不盡一致。Zhai等[8]研究顯示，與硫酸銅相比，在日糧中添加0、125、250 mg/kg堿式氯化銅或蛋氨酸銅對(duì)仔豬的生長性能并無顯著影響。本試驗(yàn)也表明，在日糧中添加90 mg/kg硫酸銅或堿式氯化銅對(duì)仔豬的生長性能無顯著影響。這可能與幼齡動(dòng)物對(duì)日糧中不同銅源的吸收率不同有關(guān)[9]。本試驗(yàn)還指出，較對(duì)照組、硫酸銅組、堿式氯化銅組，在日糧中添加90 mg/kg檸檬酸銅可以顯著降低仔豬腹瀉率，硫酸銅組和堿式氯化銅組仔豬的腹瀉率并無顯著差異。本研究結(jié)果為實(shí)際生產(chǎn)中應(yīng)用檸檬酸銅解決仔豬的腹瀉問題提供了新思路，但關(guān)于檸檬酸銅降低仔豬腹瀉率的具體作用機(jī)制還有待進(jìn)一步研究。

Bunch等[10]研究認(rèn)為，銅對(duì)仔豬的促生長效應(yīng)可能與銅在仔豬胃腸道中具有抗生素樣功能有關(guān)。Bonham等[11]還發(fā)現(xiàn)，銅對(duì)動(dòng)物機(jī)體維持免疫功能具有重要作用。本試驗(yàn)表明，在日糧中添加90 mg/kg檸檬酸銅、硫酸銅、堿式氯化銅對(duì)仔豬血清ⅠgA、ⅠgG和ⅠgM含量均無顯著影響，與Yan等[6]和Peng等[7]研究結(jié)果一致。銅是活躍的氧化物前體，高濃度的銅可引起組織氧化損傷和脂質(zhì)過氧化[12]。MDA是衡量脂質(zhì)過氧化的重要指標(biāo)。本試驗(yàn)中，在日糧中添加90 mg/kg檸檬酸銅可以顯著降低仔豬血清MDA含量，而添加90 mg/kg硫酸銅或堿式氯化銅對(duì)仔豬血清MDA含量無顯著影響。這提示，檸檬酸銅可增強(qiáng)機(jī)體抗氧化能力。CuP是一種廣泛存在于動(dòng)物體內(nèi)的含銅的α-糖蛋白，具有結(jié)合血清中的銅以及通過自身的亞鐵氧化酶活性抑制鐵離子產(chǎn)生自由基的功能[13]。本試驗(yàn)表明，在日糧中添加90 mg/kg檸檬酸銅、硫酸銅或堿式氯化銅對(duì)仔豬血清CuP含量無顯著影響，但檸檬酸銅可提高仔豬血清CuP含量。因此，檸檬酸銅組仔豬血清MDA含量降低是否與血清中CuP含量較高有關(guān)需要進(jìn)一步研究。

4 結(jié) 論

在仔豬日糧中添加90 mg/kg檸檬酸銅，可以提高ADG、降低腹瀉率和降低血清MDA含量。