晏家友，張 純，李書偉，鄺聲耀

（四川省畜牧科學研究院，動物遺傳育種四川省重點實驗室，四川成都 610066）

銅是動物機體必需的微量元素。銅作為各種酶（如銅藍蛋白、銅鋅超氧化物歧化酶、賴氨酰氧化酶、酪氨酸酶等）的組成成分或激活劑，直接參與機體代謝，發(fā)揮重要的營養(yǎng)功能[1-2]。目前，飼料工業(yè)應用的銅源主要有氨基酸絡(luò)（螯）合銅、蛋白銅、酵母銅、硫酸銅和堿式氯化銅等，其中氨基酸絡(luò)（螯）合銅、蛋白銅和酵母銅為有機銅，硫酸銅和堿式氯化銅為無機銅。大量研究證實，有機銅的生物學利用率高于無機銅；與無機銅相比，有機銅可以減少動物排泄物中的銅含量，降低重金屬對環(huán)境的污染[3-5]。近年來，隨著人們對食品安全和環(huán)境保護意識增強，動物飼料中限制無機銅用量的呼聲越來越高。因此，本試驗旨在研究日糧中添加不同銅源對仔豬生長性能、腹瀉率及血清免疫和抗氧化功能的影響，為有機銅在仔豬上的進一步推廣和應用提供依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 試驗材料 檸檬酸銅由四川省畜科飼料有限公司生產(chǎn)，銅含量≥34.0%；硫酸銅由成都蜀星飼料有限公司生產(chǎn)，銅含量≥25.1%；堿式氯化銅由四川康貝爾生物科技有限公司生產(chǎn)，銅含量≥58.1%。

1.2 試驗設(shè)計 選用21日齡斷奶、健康、平均體重（6.41±0.32）kg的杜×長×大仔豬64頭，按單因素試驗設(shè)計原則，隨機分為4個處理，每個處理4個重復，每個重復4頭豬（公、母各半）。對照組不額外添加銅，試驗在基礎(chǔ)日糧中分別添加了90 mg/kg硫酸銅、90 mg/kg堿式氯化銅或90 mg/kg檸檬酸銅，均以銅計。預試期3 d，正試期28 d。

1.3 試驗日糧 試驗日糧參照NRC（2012）《豬的營養(yǎng)需要》和《中國飼料成分及營養(yǎng)價值表（2017）》配制。日糧組成及營養(yǎng)成分見表1。

表1 日糧組成及營養(yǎng)成分（風干基礎(chǔ)）

1.4 飼養(yǎng)管理 飼養(yǎng)試驗在西南大學科教實訓基地進行。豬舍舍溫控制在25～28 ，相對濕度控制在50%～70%。仔豬在斷奶后最初3 d內(nèi)限量飼喂，3 d后自由采食。試驗期間仔豬自由飲水。每日清掃豬舍1次，每隔4 d對豬舍進行噴霧消毒1次。仔豬免疫程序及其他飼養(yǎng)管理按常規(guī)進行。

1.5 樣品采集 試驗結(jié)束后，從每個重復隨機選取1頭公豬，前腔靜脈采血10 mL，于室溫下靜置0.5 h，2 000 r/mim 離心10 min，制備血清，于-20 冷凍保存，用于測定免疫和抗氧化指標。

1.6 測定指標與方法

1.6.1 生長性能 試驗開始和結(jié)束時，分別對每頭仔豬進行空腹稱重。試驗期內(nèi)，以重復為單位，記錄投料量和剩料量（余料量+損耗量），實際采食量=投料量—剩料量。根據(jù)平均日增重（ADG）和平均日采食量（ADFⅠ）計算耗料增重比（F/G）。

1.6.2 腹瀉率 試驗期內(nèi)，每天連續(xù)觀測仔豬的排糞情況，并對糞便進行感觀評分（0分：條形或粒形；1分：軟糞、成形；2分：稠狀、成形、糞水無分離現(xiàn)象；3分：液狀、不成形、糞水有分離現(xiàn)象），將得分為2分和3分者判定為腹瀉[6]。統(tǒng)計整個試驗期各處理仔豬腹瀉頭次數(shù)，計算腹瀉率：

1.6.3 血清免疫和抗氧化指標 血清免疫指標包含免疫球蛋白A（ⅠgA）、免疫球蛋白G（ⅠgG）和免疫球蛋白M（ⅠgM），血清抗氧化指標包含丙二醛（MDA）和銅藍蛋白（CuP）。血清免疫和抗氧化指標按照南京建成生物工程研究所生產(chǎn)的試劑盒說明書進行測定，使用的儀器為日立7600全自動生化儀和UVⅠKON XS型分光光度計。

1.7 統(tǒng)計分析 利用SAS V8 軟件包編程進行數(shù)據(jù)統(tǒng)計分析。試驗結(jié)果以平均值±標準差表示。試驗數(shù)據(jù)采用One-Way ANOVA檢驗，組間差異進行Tukey多重比較。各處理與對照組間腹瀉率差異顯著性采用U檢驗。以P＜0.05為差異顯著判斷標準。

2 結(jié)果與分析

2.1 不同銅源對仔豬生長性能的影響 由表2可以看出，檸檬酸銅組仔豬ADG較對照組提高25.89%（P＜0.05），而硫酸銅組、堿式氯化銅組ADG與對照組無顯著差異（P＞0.05）。各組仔豬ADFⅠ和F/G無顯著差異（P＞0.05）。

2.2 不同銅源對仔豬腹瀉率的影響 對照組、硫酸銅組、堿式氯化銅組和檸檬酸銅組仔豬腹瀉率分別為2.68%、2.68%、2.46%和0.89%，檸檬酸銅組仔豬的腹瀉率較對照組、硫酸銅組或堿式氯化銅組顯著降低（P＜0.05）。

2.3 不同銅源對仔豬血清免疫和抗氧化功能的影響 由表3可以看出，檸檬酸銅組仔豬血清MDA含量較對照組降低21.38%（P＜0.05），而硫酸銅組、堿式氯化銅組與對照組無顯著差異（P＞0.05）。各組仔豬血清ⅠgA、ⅠgG、ⅠgM和CuP含量均無顯著差異（P＞0.05）。

表2 不同銅源對仔豬生長性能的影響

表3 不同銅源對仔豬血清免疫和抗氧化功能的影響

3 討 論

植物性飼料中銅含量普遍較低，不能滿足動物對銅的營養(yǎng)需要，所以在配合飼料中需要額外補銅。養(yǎng)殖生產(chǎn)中使用高劑量無機銅會給動物自身、畜禽產(chǎn)品及生態(tài)環(huán)境來極大的安全隱患。我國農(nóng)業(yè)農(nóng)村部發(fā)布的第2625號公告《飼料添加劑安全使用規(guī)范》對飼料中銅使用作出了進一步限制和限量。因此，研究和應用安全環(huán)保的有機銅已成為當今飼料行業(yè)的發(fā)展趨勢。Peng等[7]研究表明，在日糧中添加30 mg/kg或60 mg/kg檸檬酸銅可以顯著提高斷奶仔豬ADG。本試驗也表明，在日糧中添加90 mg/kg檸檬酸銅可以顯著提高仔豬ADG。由此可見，檸檬酸銅可改善仔豬生長性能。關(guān)于不同銅源對仔豬生長性能的影響結(jié)果不盡一致。Zhai等[8]研究顯示，與硫酸銅相比，在日糧中添加0、125、250 mg/kg堿式氯化銅或蛋氨酸銅對仔豬的生長性能并無顯著影響。本試驗也表明，在日糧中添加90 mg/kg硫酸銅或堿式氯化銅對仔豬的生長性能無顯著影響。這可能與幼齡動物對日糧中不同銅源的吸收率不同有關(guān)[9]。本試驗還指出，較對照組、硫酸銅組、堿式氯化銅組，在日糧中添加90 mg/kg檸檬酸銅可以顯著降低仔豬腹瀉率，硫酸銅組和堿式氯化銅組仔豬的腹瀉率并無顯著差異。本研究結(jié)果為實際生產(chǎn)中應用檸檬酸銅解決仔豬的腹瀉問題提供了新思路，但關(guān)于檸檬酸銅降低仔豬腹瀉率的具體作用機制還有待進一步研究。

Bunch等[10]研究認為，銅對仔豬的促生長效應可能與銅在仔豬胃腸道中具有抗生素樣功能有關(guān)。Bonham等[11]還發(fā)現(xiàn)，銅對動物機體維持免疫功能具有重要作用。本試驗表明，在日糧中添加90 mg/kg檸檬酸銅、硫酸銅、堿式氯化銅對仔豬血清ⅠgA、ⅠgG和ⅠgM含量均無顯著影響，與Yan等[6]和Peng等[7]研究結(jié)果一致。銅是活躍的氧化物前體，高濃度的銅可引起組織氧化損傷和脂質(zhì)過氧化[12]。MDA是衡量脂質(zhì)過氧化的重要指標。本試驗中，在日糧中添加90 mg/kg檸檬酸銅可以顯著降低仔豬血清MDA含量，而添加90 mg/kg硫酸銅或堿式氯化銅對仔豬血清MDA含量無顯著影響。這提示，檸檬酸銅可增強機體抗氧化能力。CuP是一種廣泛存在于動物體內(nèi)的含銅的α-糖蛋白，具有結(jié)合血清中的銅以及通過自身的亞鐵氧化酶活性抑制鐵離子產(chǎn)生自由基的功能[13]。本試驗表明，在日糧中添加90 mg/kg檸檬酸銅、硫酸銅或堿式氯化銅對仔豬血清CuP含量無顯著影響，但檸檬酸銅可提高仔豬血清CuP含量。因此，檸檬酸銅組仔豬血清MDA含量降低是否與血清中CuP含量較高有關(guān)需要進一步研究。

4 結(jié) 論

在仔豬日糧中添加90 mg/kg檸檬酸銅，可以提高ADG、降低腹瀉率和降低血清MDA含量。