陳志勇 ，敖·德古里那，羅巧慧，王良治，劉 艷，黃艷玲*

（1.西南民族大學(xué)生命科學(xué)與技術(shù)學(xué)院，四川成都610041；2.遼寧禾豐牧業(yè)股份有限公司，遼寧沈陽(yáng)110064）

銅是山羊和其他動(dòng)物必需的微量元素之一，在動(dòng)物體內(nèi)發(fā)揮重要的生理功能。研究已證實(shí)銅與動(dòng)物脂類代謝存在著密切的關(guān)系[1-2]。肉牛飼糧中添加20～40 mg/kg銅能降低血清和肌肉中膽固醇含量[3]，減少背膘厚[4]，提高肌肉中多不飽和脂肪酸含量[5]，進(jìn)而改變肌肉中脂肪酸的組成。綿羊上的研究也得到了類似的結(jié)果。Cheng等[1]研究發(fā)現(xiàn)，飼糧中添加10 mg/kg銅改變了綿羊羔羊的脂類代謝，降低了背膘厚和血清膽固醇含量。以上研究表明，飼糧銅水平調(diào)節(jié)了動(dòng)物的脂類代謝，但其影響與動(dòng)物種類、添加劑量有關(guān)。目前，生理劑量的銅對(duì)反芻動(dòng)物脂類代謝的研究多集中在肉牛和綿羊，對(duì)山羊研究較少。Solaiman等[6]研究表明，在山羊飼糧中添加100～200 mg/kg銅降低了山羊12肋骨脂肪含量以及脂肪厚度。然而，生理劑量的銅是否能改變黑山羊的脂類代謝有待進(jìn)一步研究。本課題前期試驗(yàn)表明，在黑山羊飼糧中添加生理劑量的銅（20 mg/kg）即可提高肌內(nèi)脂肪含量，降低背膘厚并改善肌肉中脂肪酸組成[7-8]。故本次試驗(yàn)選擇低劑量的銅（10、20、30 mg/kg）對(duì)斷奶黑山羊的生長(zhǎng)性能和血清脂類代謝進(jìn)行研究，為銅在山羊?qū)嶋H生產(chǎn)中的應(yīng)用及銅對(duì)脂類代謝的調(diào)控提供科學(xué)的理論依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 試驗(yàn)設(shè)計(jì) 選用 48只健康、日齡（60±5）d、體重（12.09±1.70）kg的2月齡斷奶黑山羊，根據(jù)體重?zé)o差異原則隨機(jī)分為4個(gè)處理組，每個(gè)處理組12個(gè)重復(fù)，每個(gè)重復(fù)1只羊。采用單因素試驗(yàn)設(shè)計(jì)，對(duì)照組飼喂基礎(chǔ)飼糧，試驗(yàn)組飼喂在基礎(chǔ)飼糧中分別添加10、20、30 mg/kg銅（銅源為試劑級(jí)五水硫酸銅，銅含量為25.20%）的飼糧。預(yù)試期14 d，正試期30 d。

1.2 飼養(yǎng)管理 試驗(yàn)于2017年2月—4月在四川省資陽(yáng)市樂至縣天龍農(nóng)牧科技有限公司樂至黑山羊原種場(chǎng)進(jìn)行。試驗(yàn)開始前對(duì)圈舍消毒并對(duì)黑山羊進(jìn)行驅(qū)蟲和編號(hào)，統(tǒng)一編號(hào)后的黑山羊按分組置于1.9 m×2.1 m的欄位中，單欄單飼。前14 d為過渡期，期間逐漸增加基礎(chǔ)飼糧的飼喂量，以至完全適應(yīng)基礎(chǔ)飼糧，第14 天后各處理組黑山羊飼喂相應(yīng)銅水平的試驗(yàn)飼糧?；A(chǔ)飼糧（不添加銅）為全顆?；旌巷暭Z，參考NRC（2007）山羊營(yíng)養(yǎng)需要，其組成和營(yíng)養(yǎng)成分見表1，實(shí)測(cè)基礎(chǔ)飼糧中銅含量為8.84 mg/kg。每天07:00和16:00各飼喂1次，飼喂時(shí)對(duì)每只黑山羊的喂料進(jìn)行稱重，并于第2天清晨飼喂前清掃每只黑山羊的剩料進(jìn)行稱重。自由采食和飲水，常規(guī)免疫。保證圈舍衛(wèi)生、通風(fēng)和自然光照。觀察黑山羊采食量，每7 d調(diào)整飼喂量。

1.3 樣品采集與制備 試驗(yàn)第30天，清晨空腹（飼喂前2 h）采血，每只黑山羊頸靜脈采血10 mL，室溫靜置30 min后，在4 條件下以2 000 ×g離心15 min，取得血清并保存在-20 條件下，待測(cè)。

表1 基礎(chǔ)飼糧組成及營(yíng)養(yǎng)成分（風(fēng)干基礎(chǔ)）

1.4 指標(biāo)測(cè)定與方法

14.1 生長(zhǎng)性能 正試期第0天和第30天清晨（空腹12 h）稱重，記錄初始體重（ⅠBW）、結(jié)束體重（FBW）以及每日每只羊的喂料量和剩料量，計(jì)算平均日增重（ADG）、平均日采食量（ADFⅠ）和耗料增重比（F/G）。

1.4.2 血清脂類代謝指標(biāo) 測(cè)定指標(biāo)包括總膽固醇（TC）、總甘油三酯（TG）、高密度脂蛋白膽固醇（HDLC）和低密度脂蛋白膽固醇（LDLC）。采用膽固醇氧化酶-過氧化物酶（COD-PAP）法測(cè)定血清中TC含量，采用磷酸甘油氧化酶-過氧化物酶（GPO-PAP）法測(cè)定血清中TG含量；采用選擇性清除法測(cè)定血清中HDLC和LDLC含量。以上指標(biāo)均用試劑盒測(cè)定，所有試劑盒均來源于南京建成生物工程研究所。

1.4.3 基礎(chǔ)飼糧中銅含量測(cè)定 采用濕消化法測(cè)定基礎(chǔ)飼糧中銅含量，將顆粒狀的基礎(chǔ)飼糧樣品研碎后，稱取0.5 g置于微波消解管中，加入10 mL濃HNO3（優(yōu)級(jí)純）過夜。樣品經(jīng)微波消解儀消化后用超純水少量多次無損地轉(zhuǎn)移到50 mL燒杯中，蓋上經(jīng)酸缸浸泡過的玻璃皿，置于180 的電熱板上消煮至近干。將溶液無損的轉(zhuǎn)移到50 mL容量瓶中，用0.05%硝酸定容至刻度，使用石墨爐原子吸收光譜儀（SOLAAR S2，賽默飛世爾科技有限公司，美國(guó)）測(cè)定基礎(chǔ)飼糧中的銅含量。

1.5 統(tǒng)計(jì)分析 數(shù)據(jù)采用SAS 9.2軟件中MⅠXED程序進(jìn)行單因素方差分析和GLM程序的不相關(guān)比較法進(jìn)行線性和二次曲線分析，用LSD法進(jìn)行多重比較。以P＜0.05為差異顯著，0.05＜P＜0.10為有顯著差異趨勢(shì)。結(jié)果以平均值±標(biāo)準(zhǔn)差表示。

2 結(jié) 果

2.1 不同銅水平飼糧對(duì)斷奶黑山羊生長(zhǎng)性能的影響 由表2可知，各處理組間斷奶黑山羊的ⅠBW、FBW和F/G差異不顯著（P＞0.05）。斷奶黑山羊FBW和ADFⅠ隨飼糧中銅水平的提高呈線性升高（P＜0.05）。斷奶黑山羊ADG隨飼糧中銅水平的提高呈二次曲線變化的趨勢(shì)（P＞0.05）。由此說明，飼糧中添加銅能在一定程度上促進(jìn)斷奶黑山羊的生長(zhǎng)。

2.2 不同銅水平飼糧對(duì)斷奶黑山羊血清脂類代謝的影響由表3可見，隨著銅水平的提高，斷奶黑山羊血清中TC、TG、HDLC和LDLC含量均呈線性降低（P＜0.05）。由此說明，飼糧中添加銅能改變斷奶黑山羊的血清脂類代謝。

3 討 論

3.1 不同銅水平飼糧對(duì)斷奶黑山羊生長(zhǎng)性能的影響 銅是畜禽生產(chǎn)所必需的礦物質(zhì)元素之一，參與體內(nèi)糖類、蛋白質(zhì)和脂肪三大營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)代謝，提高消化酶活性和營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)消化率[9-10]，促進(jìn)機(jī)體氮的沉積[11]，提高飼料轉(zhuǎn)化效益[10,12]，從而促進(jìn)動(dòng)物生長(zhǎng)。本試驗(yàn)結(jié)果表明，在斷奶黑山羊飼糧中添加30 mg/kg銅可以增加羔羊ADFⅠ，這說明飼糧中添加銅可以促進(jìn)黑山羊采食，與Solaiman等[13]研究結(jié)果一致。陳常秀等[14]研究表明，在山羊基礎(chǔ)飼糧中添加100 mg/kg銅能顯著提高采食量。黑山羊采食量增加可能與銅可以刺激下丘腦分泌神經(jīng)肽Y（NYP）激素有關(guān)[15]，而該激素是一種促進(jìn)動(dòng)物采食量的激素，但對(duì)于該結(jié)論還需進(jìn)一步證實(shí)。

表2 不同銅水平飼糧對(duì)斷奶黑山羊生長(zhǎng)性能的影響

表3 不同銅水平飼糧對(duì)斷奶黑山羊血清脂類代謝的影響 mmol/L

此外，本試驗(yàn)各處理組黑山羊的ADFⅠ在0.58～0.72 kg/d，比大多數(shù)報(bào)道中的山羊 ADFⅠ（1.01～1.41 kg/d）[6-7,12,16]偏低?？赡苁秋暭Z類型、組成以及飼喂方式不同。前人研究中大多使用濃縮料和粗料搭配飼喂，其中粗料所占比例均大于30%，而本試驗(yàn)黑山羊飼喂的飼糧類型為全顆?；旌巷暭Z，其中苜蓿顆粒只占基礎(chǔ)飼糧中的15%，這可能是導(dǎo)致本試驗(yàn)當(dāng)中ADFⅠ較低的原因；其次，也可能與山羊品種有關(guān)，本試驗(yàn)所用的山羊?yàn)闃分梁谏窖?，是四川省地方山羊新品種，具有早期生長(zhǎng)速度快的基本特征，與其他學(xué)者銅試驗(yàn)所用山羊品種不一致；最后，也可能與山羊的年齡有關(guān)，前人研究銅試驗(yàn)所用山羊平均在3～5月齡，且初始體重達(dá)20 kg左右，而本試驗(yàn)黑山羊處于2月齡斷奶階段，其初始體重平均為12.09 kg，瘤胃還未發(fā)育完善，ADFⅠ可能偏低。

本試驗(yàn)結(jié)果表明，飼糧中添加銅可以提高斷奶黑山羊的體重和ADG，這與Zhang等[10]結(jié)論一致。NRC（2007）山羊飼養(yǎng)標(biāo)準(zhǔn)中推薦體重為10 kg，ADG為100 g/d的肉山羊銅需要量約為25 mg/kg，而在本試驗(yàn)中（基礎(chǔ)飼糧銅含量為8.84 mg/kg）銅添加水平為10 mg/kg時(shí)ADG達(dá)210 g/d，說明飼糧銅水平為18.84 mg/kg時(shí)即可滿足黑山羊羔羊增重的需要[17]。Hosienpour等[12]研究也表明，在羔羊基礎(chǔ)飼糧（銅含量為8.2 mg/kg）中添加10 mg/kg銅能顯著提高羔羊的ADG。銅對(duì)黑山羊增重的影響可能與銅能提高體內(nèi)含銅酶的活性[18]，并促進(jìn)生長(zhǎng)激素和相關(guān)生長(zhǎng)因子的分泌有關(guān)[19]，而生長(zhǎng)激素具有促進(jìn)蛋白質(zhì)的沉積和抑制氨基酸分解的作用[20]。

本試驗(yàn)還發(fā)現(xiàn)，添加不同水平銅不影響斷奶黑山羊的F/G，這與程建波等[21]研究結(jié)果一致。但張微等[22]研究表明，在內(nèi)蒙古絨山羊基礎(chǔ)飼糧（銅含量為7.46 mg/kg）中添加20 mg/kg銅能顯著提高飼料轉(zhuǎn)化效率。上述結(jié)果的差異可能與基礎(chǔ)飼糧中銅含量、動(dòng)物體內(nèi)銅狀態(tài)、日糧中拮抗劑、銅添加水平及銅來源等因素有關(guān)。

此外，本試驗(yàn)黑山羊F/G在2.99～3.34，比大多數(shù)報(bào)道中山羊的F/G（在5.04～9.09）[6-7,12,16]偏低。這是由于本試驗(yàn)黑山羊ADFⅠ較低而增重偏高導(dǎo)致，山羊F/G的差異可能與山羊的品種、年齡、飼糧類型和組成以及飼喂方式等因素相關(guān)。

3.2 不同銅水平飼糧對(duì)斷奶黑山羊血清脂類代謝的影響反芻動(dòng)物體內(nèi)膽固醇的合成和代謝部位主要在肝臟和小腸，血清中TC含量反映了體內(nèi)膽固醇合成與代謝分解的動(dòng)態(tài)平衡，其在一定程度上能夠反映機(jī)體脂類的代謝情況。血清TG也是反映體內(nèi)脂質(zhì)代謝的重要指標(biāo)。LDLC將其他組織中的膽固醇轉(zhuǎn)運(yùn)到肝臟進(jìn)行代謝，而HDLC則是將肝臟中的膽固醇轉(zhuǎn)運(yùn)到其他組織中利用，這2個(gè)指標(biāo)均可一定程度上反映體內(nèi)膽固醇的代謝情況。本試驗(yàn)結(jié)果表明，飼糧中添加銅對(duì)血清脂類代謝有顯著影響，隨著飼糧中銅水平的提高，TC含量降低，這說明飼糧中添加銅有利于機(jī)體清除膽固醇，與Datta等[11]研究結(jié)果相似。Hosienpour等[12]研究表明，在羔羊基礎(chǔ)飼糧（銅含量為8.2 mg/kg）中添加10 mg/kg銅能顯著降低血清中TC含量。在對(duì)牛上的研究也表明，添加銅對(duì)血清TC有顯著影響。Engle等[3]研究表明，在肉牛基礎(chǔ)飼糧（銅含量為4.9 mg/kg）中添加10、20 mg/kg銅能顯著降低血清TC含量。銅可能從2個(gè)方面清除體內(nèi)膽固醇：一是調(diào)控膽固醇的合成，銅能抑制肝臟細(xì)胞中3-羥-3甲基戊二酰-CoA還原酶（HMG-CoA還原酶）的活性，而HMG-CoA還原酶是膽固醇合成的關(guān)鍵限速酶[23]；二是調(diào)節(jié)膽固醇的分解代謝，銅能提高膽固醇7α-羥化酶活性和mRNA表達(dá)水平，而膽固醇7α-羥化酶是膽固醇轉(zhuǎn)變?yōu)槟懼釓臋C(jī)體排泄的關(guān)鍵酶[24]。

本試驗(yàn)發(fā)現(xiàn)，斷奶黑山羊血清中TG含量隨飼糧中銅水平的提高而線性降低，說明銅能加速血清TG的分解。Cheng等[16]研究表明，在山羊基礎(chǔ)飼糧（銅含量為6.74 mg/kg）中添加10、20 mg/kg銅能顯著降低血清TG含量，與本試驗(yàn)結(jié)果一致。但在肉牛上的研究表明，飼糧中銅添加對(duì)肉牛血清TG含量無顯著影響[4]。銅可能間接調(diào)控激素敏感性甘油三酯脂肪酶（HSL）的活性，而HSL又是TG分解的關(guān)鍵限速酶，從而加快TG的分解，清除體內(nèi)TG[25]。

本試驗(yàn)結(jié)果還發(fā)現(xiàn)，隨飼糧中銅水平的提高，斷奶黑山羊血清LDLC含量線性降低。Datta等[11]研究在山羊基礎(chǔ)飼糧（銅含量為9.54 mg/kg）中添加20、40 mg/kg銅，結(jié)果表明，血清LDLC含量隨飼糧中銅添加水平的升高而線性降低。而Huang等[8]研究發(fā)現(xiàn)，基礎(chǔ)飼糧（銅含量為14.30 mg/kg）中添加0～640 mg/kg銅不會(huì)改變山羊血清中LDLC含量。銅對(duì)血清LDLC的影響可能與銅能改變血清中含銅酶濃度有關(guān)。相關(guān)研究也發(fā)現(xiàn)，LDLC與銅藍(lán)蛋白濃度呈負(fù)相關(guān)[18]。前人研究關(guān)于銅對(duì)HDLC的影響尚存在爭(zhēng)議[8,11]。本試驗(yàn)結(jié)果表明，飼糧添加銅顯著降低血清中HDLC含量，這與Datta 等[11]研究結(jié)果相似。銅對(duì)HDLC的影響研究結(jié)果存在差異，這可能與基礎(chǔ)飼糧中銅含量、銅添加水平、銅的來源、日糧中拮抗劑等因素有關(guān)。

4 結(jié) 論

本研究結(jié)果表明，飼糧中添加銅能提高ADFⅠ和ADG，促進(jìn)斷奶黑山羊生長(zhǎng)，降低斷奶黑山羊血清中TC、TG、HDLC和LDLC含量，改變體內(nèi)血清脂類代謝。