李江平，劉 峰，王苗苗，林明明，李文軍，孫業(yè)全

動物模型能夠用于研究腫瘤的發(fā)生及發(fā)展機(jī)制。裸鼠是乳腺癌常用的建模動物，但是，裸鼠乳腺癌模型發(fā)生腋窩淋巴結(jié)的轉(zhuǎn)移率較低，無法滿足乳腺癌淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移研究的需要。兔性情溫順、體型較裸鼠大、易飼養(yǎng)，是外科手術(shù)或操作常用的實(shí)驗(yàn)研究對象［1］。 近年來，劉玉璽等［2，3］報(bào)道利用新西蘭兔成功建立了乳腺癌腋窩淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移模型。

兔作為具有生命的個體，其自主活動不受人為控制，在行磁共振檢查的過程中易產(chǎn)生嚴(yán)重的偽影。因此，良好的麻醉是關(guān)系兔實(shí)驗(yàn)操作成功的必備條件［4］。據(jù)文獻(xiàn)報(bào)道，水合氯醛及戊巴比妥是實(shí)驗(yàn)研究中常用的麻醉劑，但由于水合氯醛的單純麻醉劑量不好控制，麻醉過程中易出現(xiàn)不良反應(yīng)，如腸梗阻、抑制心肌收縮力、縮短心肌不應(yīng)期、抑制延髓呼吸中樞等［5，6］。 因此，筆者主要對戊巴比妥在行磁共振檢查時(shí)所需最佳濃度進(jìn)行探討，現(xiàn)報(bào)告如下。

1 材料與方法

1.1 主要材料戊巴比妥（上海源葉生物科技有限公司（分裝），德國，批號 69020100），50只 8月齡雌性經(jīng)產(chǎn)新西蘭兔購于山東省農(nóng)科院 （許可證號SCXK20090013），美國 GE signa 3.0T MRI，膝關(guān)節(jié)線圈，固定裝置（自制）。

1.2 溶液配制先用分析天平分別稱取0.5 g、1 g的戊巴比妥，再用0.9%的氯化鈉溶液配置成濃度分別為0.5%和1%的戊巴比妥鈉溶液。

1.3 動物模型的建立將液氮保存的VX2瘤組織在37℃的生理鹽水中復(fù)蘇，然后裁剪成1 mm3大小的組織塊種植于雄兔右后肢肌肉豐富區(qū)，3 W后取出1 cm3大小的瘤組織，去除表面纖維結(jié)締組織和血液，在滴有慶大霉素的生理鹽水中裁剪，大小1 mm3，將裁剪好的瘤組織種植于50只雌兔左側(cè)第3乳腺內(nèi)，待腋窩處能觸及腫大的淋巴結(jié)后將乳腺移植瘤切除，保留乳頭。

1.4 模型分組從建成的動物模型中隨機(jī)選出40只并將其隨機(jī)分為A、B兩組，A、B兩組分別用0.5%和1%的戊巴比妥鈉進(jìn)行麻醉，麻醉劑量30 mg/kg，麻醉滿意后行常規(guī)T1WI和T2WI檢查，觀察并記錄麻醉劑的起效時(shí)間，掃描圖像的質(zhì)量及掃描結(jié)束后兔的狀態(tài)，圖像質(zhì)量。

1.5 麻醉效果評價(jià)標(biāo)準(zhǔn)［7］（1）麻醉優(yōu)良，表現(xiàn)為呼吸減慢，四肢松弛，角膜反射；（2）麻醉不良，呼吸抑制；（3）死亡。

1.6 圖像質(zhì)量評價(jià)圖像主要由兩位主任醫(yī)師評價(jià)，意見不統(tǒng)一時(shí)由第3位主任醫(yī)師判定。標(biāo)準(zhǔn)：優(yōu)良，圖像無偽影，組織結(jié)構(gòu)清晰可辨；中等：圖像有偽影，組織尚可辨；差：圖像有偽影，組織不可辨。

1.7 統(tǒng)計(jì)學(xué)分析利用SPSS 20.0軟件進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)分析，率的比較以%表示，采用χ2檢驗(yàn)；起效時(shí)間、使用量的比較用（±s）表示，采用t檢驗(yàn)。 取P＜0.01為差異具有極顯著性。

2 結(jié)果

0.5%戊巴比妥鈉麻醉起效時(shí)間（6±1.6）min，麻醉維持時(shí)間約1 h；1%戊巴比妥鈉麻醉起效時(shí)間約（1±0.2）min，維持時(shí)間約 2.5 h 左右；掃描圖像均清晰無運(yùn)動偽影，檢查完成后實(shí)驗(yàn)兔均處于麻醉狀態(tài)，整個實(shí)驗(yàn)過程中A組實(shí)驗(yàn)兔未出現(xiàn)因麻醉過量死亡，B組中麻醉致死1只。麻醉效果及對比分析分別見表1、表2。

表 2 麻醉劑的濃度及麻醉效果比較

3 討論

磁共振具有極好的組織分辨力，時(shí)間及空間分辨力，不僅廣泛應(yīng)用于動物模型建立的評價(jià)中，而且也可對實(shí)驗(yàn)干預(yù)效果進(jìn)行評價(jià)。不足之處：磁共振檢查時(shí)間長，檢查過程中需要實(shí)驗(yàn)動物保持較長時(shí)間靜止?fàn)顟B(tài)。所以，成功的麻醉是保證實(shí)驗(yàn)順利進(jìn)行的重要環(huán)節(jié)。選擇合適的麻醉藥物、麻醉藥物濃度和劑量、麻醉方法是麻醉成功的先決條件。戊巴比妥是實(shí)驗(yàn)研究中較常用的麻醉劑之一［8］。戊巴比妥鈉為白色粉劑，相對分子質(zhì)量為248.26，易溶于水，水溶液呈堿性，屬于中效巴比妥類中樞神經(jīng)抑制藥，隨劑量由小到大，相繼出現(xiàn)鎮(zhèn)靜、催眠和麻醉作用。戊巴比妥的麻醉的效果與注射濃度和注射方式有關(guān)；因此，不同的實(shí)驗(yàn)?zāi)康男枰渲贸霾煌瑵舛鹊奈彀捅韧兹芤?。目前，關(guān)于戊巴比妥的注射方式、注射劑量及濃度的研究報(bào)道有很多，但是，關(guān)于將其應(yīng)用于磁共振檢查的合適濃度的研究尚少。該研究主要探討了在滿足麻醉效果的前提下經(jīng)靜脈注射戊巴比妥麻醉兔乳腺移植瘤腋窩淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移模型所需的合適劑量。研究發(fā)現(xiàn)：（1）和0.5%的戊巴比妥相比，濃度為1%的戊巴比妥起效時(shí)間短（約1 min），麻醉速度快，節(jié)約實(shí)驗(yàn)時(shí)間。MR掃描儀價(jià)格昂貴，試驗(yàn)用的更甚，非一般實(shí)驗(yàn)室所能承擔(dān)。因此，大部分的實(shí)驗(yàn)研究都是在合作的醫(yī)院進(jìn)行，受各種因素的影響，應(yīng)盡可能地縮短不必要的實(shí)驗(yàn)時(shí)間。1%的戊巴比妥的誘導(dǎo)時(shí)間明顯短于0.5%的戊巴比妥，兩者差異顯著（P＜0.01），大大節(jié)省實(shí)驗(yàn)時(shí)間。（2）安全性。該研究過程中麻醉致死率為95%，與劉為萍等［9］研究不一致。可能原因：①該研究的樣本量較小，未達(dá)到統(tǒng)計(jì)學(xué)要求的理想樣本；②注射速度緩慢。左艷芳等［10］研究發(fā)現(xiàn)，注射速度過快極易引起實(shí)驗(yàn)動物的死亡。該研究的注射速度為0.17ml/s，低速注射能夠使麻醉劑在血液中得到良好的稀釋，麻醉作用較平緩，動物的承受力相對增強(qiáng)，減少了因注射速度快造成實(shí)驗(yàn)動物的死亡。（3）麻醉深度。麻醉狀態(tài)一般分為四期：誘導(dǎo)期、淺麻期、深麻期以及恢復(fù)自主期。磁共振檢查屬于無創(chuàng)操作，相對于有創(chuàng)操作而言其所需的麻醉深度較低，只要動物失去自主活動能力即可。因此，只需將實(shí)驗(yàn)動物麻醉至淺麻期（實(shí)驗(yàn)動物停止爬動后，呈側(cè)臥狀，翻正反射消失，對非疼痛刺激無肢體動作反應(yīng)，以胸式呼吸為主，肌肉松弛即進(jìn)入淺麻期）即可。一般實(shí)驗(yàn)的麻醉標(biāo)準(zhǔn)是角膜反射消失，該標(biāo)準(zhǔn)下麻醉的程度較深，這樣不但浪費(fèi)麻醉藥品，又會對實(shí)驗(yàn)動物造成損害。（4）注射方便。3～4 kg的實(shí)驗(yàn)兔一般用1%的戊巴比妥8 ml即可，而0.5%的戊巴比妥用量約是1%的兩倍，注射時(shí)不方便，且短時(shí)間內(nèi)注入大量液體可能造成心衰。另外注射時(shí)針頭的選取以5 ml注射器配備的為最佳，其直徑略小于充盈狀態(tài)下的耳緣靜脈，落空感明顯。

綜上所述，1%的戊巴比妥在磁共振檢查的應(yīng)用中麻醉效果好、安全性高及麻醉方便，是較為理想的麻醉濃度。