王詩瑤 楊平 徐昕 張婉悅 湯震宇 劉影

【摘 要】 本實(shí)驗(yàn)以研究促鈣吸收肽的可控制備為主要內(nèi)容，用超聲波輔助提取出魚鱗中的酸溶性膠原蛋白，酶解法將膠原蛋白水解成小分子肽，測(cè)定與鈣的結(jié)合量找到制備促鈣吸收肽的最佳工藝，采用鯉魚鱗為原料，減少可利用營養(yǎng)物質(zhì)的浪費(fèi)。

【關(guān)鍵詞】 鯉魚鱗；促鈣吸收肽；超聲波輔助提取

[Abstract] In order to study the controllable preparation of calcium promoting peptide， the acid-soluble collagen from fish scales was extracted by ultrasonic assisted extraction， and the collagen was hydrolyzed into small peptide by enzymatic hydrolysis. The optimum technology for preparing calcium-promoting peptide was found by determining the binding amount of calcium and the waste of available nutrients was reduced by using carp scale as raw material.

[Keywords] carp scale； calcium stimulating peptide； ultrasonic assisted extraction

我國水產(chǎn)品產(chǎn)量一直處于領(lǐng)先地位，每年產(chǎn)生250萬噸的下腳料，大部分被浪費(fèi)[1]。超聲波提取技術(shù)作為一種新技術(shù)，具有傳統(tǒng)提取方法達(dá)不到的優(yōu)點(diǎn)[2]。鈣是一種必需微量營養(yǎng)元素，美國農(nóng)業(yè)部國家營養(yǎng)數(shù)據(jù)庫的數(shù)據(jù)表明[3]， 通常食用的谷物中鈣含量均無法達(dá)到3.3%推薦鈣攝入量。本研究以鯉魚鱗為原料，利用超聲波輔助提取出ASC，并用酶解技術(shù)將ASC分解成小分子肽促進(jìn)鈣的吸收。

1 材料與方法

1.1 材料與試劑

鯉魚鱗 水產(chǎn)品市場(chǎng)取得；堿性蛋白酶，中性蛋白酶，復(fù)合蛋白酶 丹麥Novozymes公司；其余試劑均為國產(chǎn)分析純。

1.2 主要儀器設(shè)備

SB25-12DTD超聲波清洗機(jī) 寧波新芝生物科技股份有限公司；SHA-B/C數(shù)顯恒溫水浴振蕩器 天津市賽得利斯實(shí)驗(yàn)分析儀器制造廠；721G可見分光光度計(jì) 上海儀電分析儀器有限公司；LGJ-12冷凍干燥機(jī) 北京松源華興科技發(fā)展有限公司；TGL-15GE離心機(jī) 湖南科學(xué)儀器有限公司。

1.3 試驗(yàn)方法

1.3.1 膠原蛋白提取 將除雜后的魚鱗于0.5M乙酸溶液（1：10（w/v））浸泡48h（以上過程均在4℃下進(jìn)行），并在30℃于500W的超聲波下輔助分離30min，過濾后濾液中加入NaCl至最終濃度為0.9M，靜置12h，懸浮液用8000r/min離心20min，沉淀重新溶于0.5M乙酸，轉(zhuǎn)入透析袋內(nèi)，用0.5M乙酸和蒸餾水分別透析12h，每隔3h換一次溶液，冷凍干燥后即為ASC[4-5]。

1.3.2 促鈣吸收肽制備 將膠原蛋白用水配成10%的懸濁液。（1）底物濃度不同：調(diào)整溫度40℃，pH5.5，酶解時(shí)間50min，底物濃度分別為1mg/mL、5mg/mL、10mg/mL、15mg/mL、20mg/mL。（2）溫度不同：調(diào)整底物濃度20mg/mL，pH5.5，酶解時(shí)間50min，溫度分別為40℃、45℃、50℃、55℃、60℃。（3）pH不同：其余條件同上，pH分別為5.5、6.0、6.5、7.0、7.5。（4）酶解時(shí)間不同：調(diào)整底物濃度20mg/mL。

復(fù)合蛋白酶：溫度55℃，pH7.0。

中性蛋白酶：溫度50℃，pH6.5。

堿性蛋白酶：溫度55℃，pH7.5。

酶解時(shí)間分別為50min、108min、165min、223min、280min。恒溫2h，100℃下滅酶10min，測(cè)定不同底物濃度下所得樣品的鈣結(jié)合率[6]。

鈣結(jié)合率的測(cè)定：參照文獻(xiàn)[7-8]的方法，測(cè)定并計(jì)算鈣結(jié)合率。

2 結(jié)果分析

2.1 pH不同

由圖1可知，復(fù)合蛋白酶在pH 7、中性蛋白酶在pH 6.5、堿性蛋白酶在pH 7.5達(dá)到最大值，且三種蛋白酶中中性酶的鈣濃度最高。

2.2 酶解溫度不同

由圖2可知，復(fù)合蛋白酶在55℃、中性蛋白酶在50℃、堿性蛋白酶在60℃達(dá)到最大值，且三種蛋白酶中中性酶的值最高。

2.3 酶解時(shí)間不同

由圖3可知，復(fù)合蛋白酶在165min、中性蛋白酶在223min、堿性蛋白酶在280min達(dá)到最大值，且三種蛋白酶中中性酶的值最高。

3 結(jié)論

由上圖可知，中性蛋白酶效果最佳。本試驗(yàn)采用單因素試驗(yàn)的方法獲得制備促鈣吸收肽的最佳工藝，中性蛋白酶酶解、pH 6.5、酶解溫度50℃、酶解時(shí)223min的條件下是制備促鈣吸收肽的最佳工藝。

參考文獻(xiàn)：

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