劉偉旗 劉偉玲 趙 東 劉玉華 蔡錦河

胰腺癌是目前已知腫瘤中惡性程度最高的腫瘤之一，居消化系統(tǒng)惡性腫瘤第2位[1]。近年全球其發(fā)病率和死亡率明顯上升趨勢(shì)，在美國(guó)與腫瘤相關(guān)死亡中排第4位[1]，據(jù)《2013年中國(guó)腫瘤登記年報(bào)》統(tǒng)計(jì)顯示在我國(guó)胰腺癌列惡性腫瘤發(fā)病率第8位，人群惡性腫瘤死亡率第7位[2]，近年來隨著新技術(shù)、新理念在胰腺癌診治的應(yīng)用下取得了明顯進(jìn)步，但形勢(shì)仍不容樂觀。由于胰腺癌早期癌癥狀態(tài)隱匿性強(qiáng)，臨床實(shí)驗(yàn)室輔助診斷指標(biāo)又較少，且診斷胰腺癌血清腫瘤標(biāo)志物檢測(cè)的特異性和敏感性都難以滿足臨床診斷要求，一直影響著臨床對(duì)胰腺癌的診治。近幾年來隨著新的腫瘤相關(guān)蛋白[3]的不斷涌現(xiàn)，研究者期望在胰腺癌早期診斷方面有新的突破。因此，尋找胰腺癌新的腫瘤標(biāo)志物成為各方關(guān)注的熱點(diǎn)。本文擬通過對(duì)胰腺癌患者血清上人附睪蛋白4(human epididymis gene protein 4，HE4)檢測(cè)，探討血清HE4在輔助診斷胰腺癌中的臨床價(jià)值。

1 材料與方法

1.1 一般資料

收集2017年5月—2018年1月廣州醫(yī)科大學(xué)附屬腫瘤醫(yī)院收治已確診為胰腺癌患者70例，其中男43例，女27例，年齡32～77歲；健康對(duì)照組選取禪城區(qū)中心醫(yī)院健康體檢者51例，男34例，女17例，年齡23～76歲，疾病組與對(duì)照組年齡差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。

1.2 標(biāo)本采集

采集胰腺癌患者空腹靜脈血5 mL，離心，分離血清置-70℃保存，待測(cè)；檢測(cè)胰腺癌患者標(biāo)本當(dāng)天留取健康體檢者血清標(biāo)本，同時(shí)進(jìn)行檢測(cè)項(xiàng)目分析。

1.3 儀器與試劑

采用羅氏cobase 601全自動(dòng)電化學(xué)發(fā)光免疫分析儀電化學(xué)發(fā)光檢測(cè)血清HE4水平，試劑盒、定標(biāo)品及由羅氏公司提供，嚴(yán)格按照相關(guān)操作規(guī)程進(jìn)行操作，質(zhì)控在控后方進(jìn)行標(biāo)本檢測(cè)。

1.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)處理

采用SPSS 17.0、MedCalc 15.0統(tǒng)計(jì)軟件對(duì)實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)進(jìn)行分析，偏態(tài)分布資料分析采用非參數(shù)Mann-WhitneyU檢驗(yàn)；繪制血清HE4在診斷胰腺癌中的ROC曲線，計(jì)算曲線下面積、特異性和敏感性。P<0.05差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 胰腺癌組與對(duì)照組血清HE4水平變化

121例研究對(duì)象血清HE4呈偏態(tài)分布，結(jié)果顯示，胰腺癌組血清HE4水平明顯高于對(duì)照組，兩者進(jìn)行比較，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。見表1。

注：“-”表示無數(shù)據(jù)

2.2 血清HE4診斷胰腺癌的ROC分析

以已確認(rèn)胰腺癌結(jié)果為金標(biāo)準(zhǔn)，繪制血清HE4水平在診斷胰腺癌的ROC曲線，血清HE4水平的ROC曲線下面積為0.899(P<0.05)，其診斷敏感度與特異性為77.1%和90.2%。見圖1。

圖1 血清HE4在輔助診斷胰腺癌的ROC曲線

3 討論

胰腺癌的病因尚不十分清楚,一般認(rèn)為慢性胰腺炎、酗酒、吸煙、肥胖等是引起胰腺癌的危險(xiǎn)因素，接觸苯類化合物可使罹患胰腺癌的風(fēng)險(xiǎn)大大增加。糖尿病也是患胰腺癌的風(fēng)險(xiǎn)因素之一，特別是低身體質(zhì)量指數(shù)、新發(fā)Ⅱ型糖尿病、糖尿病家族史等患者應(yīng)警惕胰腺癌的可能。同時(shí)個(gè)體遺傳因素在胰腺癌的發(fā)生、發(fā)展中起著重要作用，如遺傳性胰腺炎、家族性惡性黑色素瘤、Peutz-Jeghers綜合征等均可能胰腺癌的發(fā)病風(fēng)險(xiǎn)顯著升高。

絕大多數(shù)胰腺癌為非家族性的散發(fā)性胰腺癌，由于胰腺生理解剖位置的原因，臨床特異性的癥狀較難發(fā)現(xiàn)，當(dāng)出現(xiàn)癥狀表現(xiàn)時(shí)大多數(shù)癌癥患者已發(fā)生癌癥轉(zhuǎn)移。研究表明胰腺癌患者確診時(shí)大約 60%患者已發(fā)生遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移，大約25%患者為局部晚期，不能行根治性切除術(shù)，中位生存期僅為 6～9個(gè)月；能夠手術(shù)切除的患者僅為15%，5年生存率5%左右[4-5]。現(xiàn)臨床常用CA199與癌胚抗原(CEA)輔助診斷胰腺癌，雖然CA199的特異性及敏感性在診斷胰腺癌中分別達(dá)到87%及77%[6]，但由于非惡性疾病也可導(dǎo)致CA199假陽性結(jié)果[6]，影響了CA199的臨床應(yīng)用；CEA常用于輔助診斷消化道癌癥，雖然CEA與胰腺癌具有相關(guān)性，但由于它的特異性與敏感性都較低，常與其他實(shí)驗(yàn)室指標(biāo)聯(lián)合應(yīng)用，有研究表明[7]CA199與CEA聯(lián)合應(yīng)用可提高診斷的敏感性及診斷胰腺癌是否發(fā)生轉(zhuǎn)移。隨著人們對(duì)胰腺癌越來越重視和實(shí)驗(yàn)室檢測(cè)技術(shù)的不斷更新，學(xué)者們迫切的希望尋找一種在胰腺癌診斷中具有足夠敏感性、特異性的腫瘤標(biāo)志物，但至今仍未找到一種對(duì)胰腺癌，特別是針對(duì)早期胰腺癌對(duì)臨床可疑患者進(jìn)行篩查。

人附睪分泌蛋白4(human sapiens epididymis specific protein 4，HE4)是一個(gè)相對(duì)分子質(zhì)量較小、酸性、半胱氨酸含量豐富的分泌性蛋白，因含有2個(gè)乳酸蛋白(whey acidic protein, WAP)重鏈，也被稱為WFDC2。自1991年在男性附睪組織中發(fā)現(xiàn)以來[8]，仍未完全了解HE4的全部生理功能。目前較多用來監(jiān)測(cè)上皮性卵巢癌復(fù)發(fā)或進(jìn)展的血清腫瘤標(biāo)志物，Yang等[9]研究結(jié)果顯示在卵巢癌診斷中HE4比CA125有著更高的靈敏度和特異性；同時(shí)國(guó)外已有一些關(guān)于HE4與肺癌之間關(guān)系的報(bào)道，Tokuishi 等[10]在肺癌細(xì)胞胞漿中發(fā)現(xiàn)了免疫熒光染色著色的HE4蛋白；Yamashita 等[11]通過免疫組化法對(duì)137例肺腺癌患者組織中 HE4 蛋白表達(dá)情況進(jìn)行測(cè)定，發(fā)現(xiàn)41.6%的患者HE4呈陽性表達(dá)， 且HE4陽性表達(dá)者的5年無病生存率及5年總體生存率均較對(duì)應(yīng)的陰性表達(dá)者明顯降低；Yamashita等[12]研究發(fā)現(xiàn)肺癌患者HE4水平明顯高于肺部良性疾病與健康對(duì)照組，因此，HE4已成為肺癌篩查指標(biāo)之一。

隨著對(duì)HE4功能的研究，越來越多研究表明HE4蛋白在胰腺癌患者存在高度表達(dá)，O’Neal等[13]通過組織微陣列分析技術(shù)在220例胰腺癌患者中有103例患者可檢測(cè)到HE4蛋白，而在胰腺上皮肉瘤樣變患者中未能檢測(cè)到HE4蛋白；Galgano等[14]通過基因芯片分析技術(shù)研究證明在胰腺癌患者中HE4 mRNA出現(xiàn)中至高范圍表達(dá)，在6份胰腺癌標(biāo)本結(jié)果顯示有4份為中等表達(dá)，1份為高水平表達(dá)；Faca等[15]通過蛋白質(zhì)組學(xué)分析研究發(fā)現(xiàn)，與正常小鼠血漿相比，胰腺導(dǎo)管腺癌小鼠血漿中HE4蛋白明顯增加。因此，HE4與胰腺癌之間存在密不可分的關(guān)系。本次研究結(jié)果顯示，胰腺癌患者血清中H4水平明顯高于健康體檢者，兩者差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)，再次證明了在胰腺癌患者血清中HE4處于高表達(dá)水平。由于血清HE4檢測(cè)方法成熟，且檢測(cè)時(shí)間較短，一次性抽取靜脈血就能實(shí)現(xiàn)，大大提高了患者的依從性。以已確認(rèn)胰腺癌結(jié)果為金標(biāo)準(zhǔn)，繪制血清HE4水平在診斷胰腺癌的ROC曲線，血清HE4水平的ROC曲線下面積為0.899(P<0.05)，當(dāng)血清HE4水平為63.57 pmol/L時(shí)，其診斷敏感度與特異性為77.1%和90.2%。其敏感度與特異性均高于CA199。因此，對(duì)懷疑斷胰腺癌患者進(jìn)行血清HE4檢測(cè)，有助于胰腺癌的檢出率，降低臨床漏診率。

目前，臨床用于診斷胰腺癌的腫瘤標(biāo)志物雖然種類繁多，但由于其特異性及敏感性均尚不理想，限制了其在人群中的篩查作用。雖然超聲內(nèi)鏡下的腫瘤穿刺對(duì)胰腺癌早期診斷檢出率較高，但由于其操作復(fù)雜且價(jià)格昂貴，限制了其在臨床應(yīng)用的普遍性。有研究報(bào)道[17]微小RNA(miRNA)作為胰腺癌腫瘤標(biāo)志物，聯(lián)合CA199檢測(cè)可提高對(duì)胰腺癌的診斷效能，但由于單分子miRNA尚處于研究起步階段，且商品化試劑盒在實(shí)驗(yàn)室應(yīng)用較少，廣泛應(yīng)用于臨床尚需時(shí)日；而本次研究表明血清HE4在胰腺癌患者血清中呈現(xiàn)高表達(dá)，且敏感性與特異性均高于CA199，血清HE4檢測(cè)方法學(xué)為電化學(xué)發(fā)光法，且試劑盒已實(shí)現(xiàn)商品化，對(duì)其在臨床推廣鋪平了道路。因此，血清HE4可作為胰腺癌診斷腫瘤標(biāo)志物，可協(xié)助臨床輔助診斷胰腺癌。