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        69株雞白痢沙門氏菌的分離鑒定及耐藥性分析

        2018-11-14 11:23:44劉洋嚴(yán)專強(qiáng)王占新潘海萍陳倫鋒嚴(yán)麗端覃健萍魯俊鵬
        家禽科學(xué) 2018年11期
        關(guān)鍵詞:氨芐白痢雞場(chǎng)

        劉洋 ,嚴(yán)專強(qiáng) ,王占新 ,潘海萍 ,陳倫鋒 , 嚴(yán)麗端 ,覃健萍 ,魯俊鵬 *

        (1.廣東溫氏食品集團(tuán)股份有限公司,廣東 新興 527439;2.廣東溫氏南方家禽育種有限公司,廣東 新興 527439)

        雞白痢沙門氏菌具有高度適應(yīng)專一宿主的特點(diǎn),禽類中雞最易感,可引起雛雞的急性敗血癥,多侵害3周齡以內(nèi)幼雛,發(fā)病率和病死率極高;隨著日齡增加對(duì)本病的抵抗力迅速上升,成年雞亦可被感染,常導(dǎo)致母雞產(chǎn)蛋減少,生殖道畸形,體質(zhì)量下降,也導(dǎo)致孵化率和出雛率明顯下降,雞白痢是危害養(yǎng)雞業(yè)發(fā)展的重要疾病之一[1,2]。本試驗(yàn)在2017~2018年期間從廣東地區(qū)多個(gè)大型種雞場(chǎng)采集樣品進(jìn)行雞白痢沙門氏菌分離鑒定,對(duì)分離菌株進(jìn)行了部分藥物的耐藥性分析,以期初步了解廣東區(qū)域雞白痢沙門氏菌流行動(dòng)態(tài)和耐藥性情況,為獸醫(yī)工作者在雞白痢的防治提供參考依據(jù),為進(jìn)一步控制和凈化雞白痢沙門氏菌奠定基礎(chǔ)。

        1 材料與方法

        1.1 試驗(yàn)材料 亞硒酸鹽胱氨酸增菌液(SC)、胰蛋白胨大豆肉湯培養(yǎng)基(TSB)、沙門氏菌屬顯色培養(yǎng)基、XLT4瓊脂培養(yǎng)基、藥敏紙片包括氨芐西林、氯霉素、鏈霉素、四環(huán)素、環(huán)丙沙星、磺胺異惡唑甲氧氨芐嘧啶、甲氧氨芐嘧啶和萘啶酸均購(gòu)自環(huán)凱微生物科技有限公司;Ex Taq酶購(gòu)自TAKARA。

        1.2 病原和細(xì)菌分離 無(wú)菌取死胚的卵黃囊、弱雛雞的肝臟,無(wú)菌剪碎后分別接至亞硒酸鹽胱氨酸增菌液(SC)增菌,再取一環(huán)劃線接種于沙門氏菌屬顯色培養(yǎng)基和XLT4培養(yǎng)基,進(jìn)行沙門氏菌的分離鑒定。

        1.3 革蘭氏染色鏡檢 挑取純化好的單菌落置于胰蛋白胨大豆肉湯,培養(yǎng)過(guò)夜。將菌液涂片固定后,再按結(jié)晶紫初染1min、碘液媒染1min、酒精脫碘30s、蕃紅復(fù)染1min的步驟依次進(jìn)行革蘭氏染色操作,待玻片干燥后在顯微鏡下觀察分離菌株的形態(tài)特征。

        1.4 生化鑒定 取適量菌液分別接種于沙門氏菌的生化鑒定管中(三糖鐵、蛋白胨水、尿素、氰化鉀、賴氨酸脫羧酶、甘露醇、山梨醇、β半乳糖苷、衛(wèi)矛醇),24h后觀察并記錄結(jié)果。

        1.5 PCR擴(kuò)增 根據(jù)GenBank已經(jīng)公布的雞白痢沙門氏菌ipaJ基因的保守核苷酸序列設(shè)計(jì)的雞白痢沙門氏菌的特異性引物進(jìn)行PCR擴(kuò)增[3],20μl反應(yīng)體系:Ex Taq 酶 10μl,無(wú)菌水 8μl,上下游引物各 0.5μl,菌液1μl。PCR反應(yīng)程序95℃預(yù)變性 5min;94℃變性 30s,55℃退火 30s,72℃延伸30s,30循環(huán);72℃后延伸10min。將PCR產(chǎn)物進(jìn)行電泳檢測(cè),擴(kuò)增產(chǎn)物目的片段為161bp。

        1.6 藥敏試驗(yàn) 采用藥敏片法對(duì)8種抗菌藥物進(jìn)行藥敏試驗(yàn),以測(cè)定菌株對(duì)抗菌藥物的敏感性和不同菌株之間的差異。

        2 結(jié)果與分析

        2.1 分離菌株形態(tài) 在顯色瓊脂培養(yǎng)基上形成圓形、光滑凸起的紫紅色菌落,XLT4瓊脂培養(yǎng)基上長(zhǎng)出圓形、無(wú)色透明的菌落;經(jīng)革蘭氏染色后顯微鏡觀察,分離的細(xì)菌為革蘭氏陰性、兩端鈍圓短桿菌。

        2.2 生化鑒定和PCR鑒定結(jié)果 生化試驗(yàn)結(jié)果表明,這69個(gè)分離株在三糖鐵瓊脂(TSI)試驗(yàn)中均產(chǎn)酸、斜面變紅,蛋白胨、尿素、氰化鉀、山梨醇、衛(wèi)矛醇和β-半乳糖苷酶均為陰性,賴氨酸脫羧酶陽(yáng)性,其中14個(gè)分離株表現(xiàn)為甘露醇陰性,其余分離株均為陽(yáng)性,參照生化鑒定試劑盒的說(shuō)明書進(jìn)行判斷,69個(gè)分離株均為沙門氏菌,將其進(jìn)行雞白痢的特異性PCR,69個(gè)分離株均能擴(kuò)增出目的片段。

        2.3 藥敏試驗(yàn)結(jié)果 69株沙門氏菌對(duì)8種藥物的敏感性見(jiàn)下表1所示。由表1可知,50個(gè)分離株表現(xiàn)出多重耐藥,69株受試菌株均對(duì)環(huán)丙沙星表現(xiàn)出敏感,10.14%的菌株對(duì)氯霉素耐藥,24.64%的菌株對(duì)四環(huán)素耐藥,28.99%的菌株對(duì)鏈霉素耐藥,57.97%的菌株對(duì)氨芐西林耐藥,62.32%的菌株對(duì)萘啶酸耐藥,71.01%的菌株對(duì)甲氧氨芐嘧啶耐藥,72.46%的菌株對(duì)磺胺異惡唑甲氧氨芐嘧啶耐藥。

        3 討論

        雞白痢是一種急性的系統(tǒng)性疾病,可引起種蛋受精率、孵化率和健苗率降低及死胚率、弱胚率和弱雛率升高等,給養(yǎng)禽業(yè)造成了巨大的損失。但是目前預(yù)防雞白痢沙門氏菌并無(wú)有效的疫苗,只能通過(guò)淘汰陽(yáng)性雞和用藥來(lái)控制[4]。因此,需要種雞場(chǎng)嚴(yán)格遵守定期檢疫淘汰制度,淘汰感染雞,做好種雞場(chǎng)的凈化、種蛋消毒、加強(qiáng)雛雞飼養(yǎng)管理、藥物防控和衛(wèi)生措施等環(huán)節(jié),保持雞舍干燥、清潔,切斷水平傳播和垂直傳播。

        本研究在2017~2018年期間成功在廣東地區(qū)分離出69株雞白痢沙門氏菌。藥敏試驗(yàn)發(fā)現(xiàn)這69個(gè)分離株對(duì)8種藥物的敏感性具有差異,其中所有受試菌株僅對(duì)環(huán)丙沙星表現(xiàn)出極度敏感,其他分離株均表現(xiàn)出不同程度的耐藥和多重耐藥,同一地區(qū)分離株之間也具有差異。這與其他關(guān)于雞白痢沙門氏菌的抗菌藥物耐藥結(jié)果類似[5-7]。因此,在臨床用藥預(yù)防和治療某種疾病時(shí),臨床用藥必須結(jié)合藥敏試驗(yàn)進(jìn)行輪換用藥和聯(lián)合用藥。當(dāng)然,藥物防控是不得已而為之,最重要的還是加強(qiáng)雞場(chǎng)的飼養(yǎng)管理,定期監(jiān)測(cè)、淘汰疑似陽(yáng)性雞,逐步凈化雞群,提高雞群健康度。

        表1 分離株藥敏試驗(yàn)結(jié)果

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