布力布·吉力斯?jié)h，唐勇，達(dá)熱拜·熱達(dá)提，賽福丁·柯尤木

(新疆醫(yī)科大學(xué)附屬腫瘤醫(yī)院，烏魯木齊830011)

結(jié)直腸癌的復(fù)發(fā)和轉(zhuǎn)移率均較高，其術(shù)后5年生存率不到50%[1]。探討結(jié)直腸癌發(fā)生、發(fā)展的分子機(jī)制，尋找特異性強(qiáng)、準(zhǔn)確性高的分子生物學(xué)標(biāo)志物，對結(jié)直腸癌的早期診斷、術(shù)后監(jiān)測及基因靶向治療具有重要價(jià)值。B細(xì)胞轉(zhuǎn)位基因3(BTG3)是新發(fā)現(xiàn)的致癌基因，在細(xì)胞增殖、分化、細(xì)胞周期進(jìn)展、血管生成、細(xì)胞表型、上皮間質(zhì)轉(zhuǎn)化等方面發(fā)揮重要作用。BTG3已被確定為諸多癌癥的候選驅(qū)動基因，在食管癌[2]、胃癌[3]、非小細(xì)胞肺癌[4]、宮頸癌[5]等多種腫瘤中存在異常表達(dá)，但其在結(jié)直腸癌中的作用尚不清楚。本研究通過檢測結(jié)直腸癌組織中BTG3蛋白的表達(dá)情況，分析BTG3蛋白表達(dá)與結(jié)直腸癌患者臨床病理特征的關(guān)系，旨在為結(jié)直腸癌的早期診斷和靶向治療提供依據(jù)。

1 資料與方法

1.1 臨床資料 收集2016年9月～2017年1月在新疆醫(yī)科大學(xué)第三臨床醫(yī)學(xué)院行手術(shù)治療的結(jié)直腸癌患者120例，男66例、女54例，年齡35～72(52.1±9.4)歲。根據(jù)結(jié)直腸癌2018年AJCC(第8版)TNM分期標(biāo)準(zhǔn)[6]，Ⅰ期10例、Ⅱ期24例、Ⅲ期75例、Ⅳ期11例?；颊呔鶠樵l(fā)性腫瘤，術(shù)前未行放化療、免疫治療及生物治療。取手術(shù)切除的癌組織和相應(yīng)的癌旁正常組織(距腫瘤組織>10 cm)，置入10%甲醛溶液中固定。本研究經(jīng)我院醫(yī)學(xué)倫理委員會批準(zhǔn)，患者均簽署知情同意書。

1.2 結(jié)直腸癌組織及癌旁組織中BTG3蛋白檢測方法 采用免疫組化染色法。將組織標(biāo)本常規(guī)石蠟包埋，切成4 μm厚切片。將切片置入80 ℃烤箱烘烤30 min，乙醇脫水，加入內(nèi)源性過氧化物酶滅活，枸櫞酸緩沖液行高溫高壓水化修復(fù)。依次加入一抗(1∶100)、二抗孵育。DAB顯色，蘇木精復(fù)染，鹽酸乙醇分化后流動清水沖洗10 min，梯度乙醇脫水，松節(jié)油透明和樹膠行封片處理。以PBS代替一抗作為陰性對照，光鏡下觀察。

1.3 免疫組化結(jié)果判定方法 由2名資深病理科醫(yī)師判讀。光鏡下每個樣本隨機(jī)取5個高倍視野(×400)，每個視野觀察細(xì)胞不少于200個。BTG3陽性染色主要集中于細(xì)胞質(zhì)和細(xì)胞膜，呈棕黃色或褐色顆粒。根據(jù)陽性細(xì)胞比例和染色強(qiáng)度進(jìn)行評分，陽性細(xì)胞比例：無染色為0分，1%～10%染色為1分，11%～50%為2分，50%以上為3分；染色強(qiáng)度：無染色為0分，淺黃色為1分，棕黃色為2分，棕褐色為3分。二者相乘<3為陰性，≥3為陽性。

2 結(jié)果

2.1 結(jié)直腸癌組織及癌旁組織中BTG3蛋白表達(dá)比較 結(jié)直腸癌組織中BTG3蛋白表達(dá)陽性29例，陽性率為24.17%；癌旁組織中BTG3蛋白表達(dá)陽性84例，陽性率為70.00%。結(jié)直腸癌組織中BTG3蛋白表達(dá)陽性率高于癌旁組織(P<0.01)。

2.2 不同臨床病理特征患者結(jié)直腸癌組織中BTG3蛋白表達(dá)比較 TNM分期Ⅲ～Ⅳ期、腫瘤侵及漿膜、伴淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移和肝轉(zhuǎn)移患者結(jié)直腸癌組織中BTG3蛋白表達(dá)陽性率低于TNM分期Ⅰ～Ⅱ期、未侵及漿膜、無淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移和肝轉(zhuǎn)移患者(P均<0.01)。見表1。

表1 不同臨床病理特征患者結(jié)直腸癌組織中BTG3蛋白表達(dá)比較

3 討論

據(jù)最新流行病學(xué)調(diào)查顯示，2014年我國居民結(jié)直腸癌發(fā)病例數(shù)位居第3位，嚴(yán)重威脅國民健康。結(jié)直腸癌的早期診斷及規(guī)范治療對延長患者生存時(shí)間、提高患者生活質(zhì)量具有重要意義。尋找敏感度高、特異性強(qiáng)的分子生物學(xué)標(biāo)記物已成為結(jié)直腸癌早期診斷的研究熱點(diǎn)，同時(shí)為腫瘤的放化療、靶向治療提供技術(shù)支撐。BTG3是B細(xì)胞ERBB2家族/抗增殖蛋白家族易位基因(BTG)重要成員之一，定位于染色體21q21.1，內(nèi)含一個保守的N-末端結(jié)構(gòu)域，共104～106個氨基酸，包含特殊的盒式A和盒式B結(jié)構(gòu)，以及可塑形變化的C-末端結(jié)構(gòu)域，富含脯氨酸[7]。BTG3是p53下游的靶點(diǎn)，與E2F1相互作用，通過N端結(jié)構(gòu)域的盒式A，抑制E2F1-DP1轉(zhuǎn)錄因子與DNA結(jié)合，對細(xì)胞S期進(jìn)展發(fā)揮負(fù)向調(diào)節(jié)作用[8]；BTG3還能聯(lián)合BTG1和BTG2與SMAD8受體調(diào)控的SMAD轉(zhuǎn)錄因子相互作用，影響細(xì)胞周期的演進(jìn)[9]；此外，BTG3能通過其C-末端富含脯氨酸結(jié)構(gòu)域減弱Src酪氨酸激酶活性，抑制Ras/MAP激酶信號轉(zhuǎn)導(dǎo)，從而抑制細(xì)胞增殖[10]。

Yoneda等[11]報(bào)道，BTG3 mRNA在成鼠中普遍表達(dá)，在心臟、肺、腎和睪丸中呈高表達(dá)狀態(tài)，而在脾臟和骨骼肌中表達(dá)較低。研究顯示，長期伴BTG3缺陷的小鼠，約有8%在出生后21個月發(fā)展為肺腫瘤。在人類的食管癌、胃癌、非小細(xì)胞肺癌等多個實(shí)體腫瘤組織中均發(fā)現(xiàn)并證實(shí)BTG3 mRNA表達(dá)水平下調(diào)。An等[12]報(bào)道，BTG3蛋白在人類上皮性卵巢癌細(xì)胞系中表達(dá)降低，同時(shí)發(fā)現(xiàn)磷酸化絲氨酸/蘇氨酸激酶(p-AKT)、磷酸化糖原合酶激酶3β(p-GSK3β)、β-連環(huán)蛋白等多種蛋白表達(dá)增加，考慮BTG3的低表達(dá)可能通過調(diào)節(jié)AKT/GSK3β/β-catenin信號通路促進(jìn)人類上皮性卵巢癌細(xì)胞的細(xì)胞增殖和侵襲并抑制細(xì)胞凋亡。Ren等[13]報(bào)道，BTG3在胃癌組織中表達(dá)下調(diào)，其表達(dá)與遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移呈正相關(guān)，BTG3表達(dá)較低的患者總生存時(shí)間縮短；同時(shí)證實(shí)BTG3在體外和體內(nèi)抑制胃癌細(xì)胞的增殖、遷移和侵襲。Lv等[14]報(bào)道，BTG3在肝細(xì)胞癌組織中表達(dá)下調(diào)，其表達(dá)與分化和遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移呈正相關(guān)，BTG3表達(dá)較高的患者總生存時(shí)間較長；進(jìn)一步證實(shí)BTG3高表達(dá)能抑制體外細(xì)胞增殖、侵襲并誘導(dǎo)細(xì)胞G1/S、S/G2周期停滯，考慮與啟動子的甲基化有關(guān)。本研究結(jié)果顯示，BTG3蛋白在結(jié)直腸癌組織中的陽性表達(dá)率低于癌旁正常組織，提示BTG3蛋白表達(dá)下調(diào)可能與結(jié)直腸癌的發(fā)生有關(guān)。

Lv等[15]報(bào)道，BTG3蛋白在結(jié)直腸癌組織中的表達(dá)水平下調(diào)，其表達(dá)水平與患者的病理分型、浸潤深度、遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移、TNM分期、總生存期及無病生存期均明顯相關(guān)。本研究結(jié)果顯示，TNM分期Ⅲ～Ⅳ期、腫瘤侵及漿膜、伴淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移和肝轉(zhuǎn)移患者結(jié)直腸癌組織中BTG3蛋白表達(dá)陽性率低于TNM分期Ⅰ～Ⅱ期、未侵及漿膜、無淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移和肝轉(zhuǎn)移患者，表明BTG3低表達(dá)與結(jié)直腸癌的侵襲及轉(zhuǎn)移有關(guān)。

綜上所述，BTG3蛋白表達(dá)下調(diào)可能促進(jìn)結(jié)直腸癌的發(fā)生、發(fā)展。BTG3蛋白在結(jié)直腸癌患者腫瘤組織中的異常表達(dá)可能與病變浸潤深度、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、肝轉(zhuǎn)移及TNM分期均有關(guān)，BTG3有望成為預(yù)測結(jié)直腸癌發(fā)生、發(fā)展的潛在生物學(xué)指標(biāo)之一。