劉 梅， 史 挺， 王玉海， 鄭 美

（1.棗莊學院生命科學學院，山東棗莊 277160；2.北京資源集團，北京大興 102600）

茶多酚是從茶葉中提取的多酚類純天然活性物質(zhì)，通常其含量占茶制品干重的30%左右，主要成分為黃烷醇 （兒茶素）類，兒茶素占60%～80%。茶多酚又稱茶鞣或茶單寧，其是形成茶葉色香味的主要成份之一 （趙磊等，2017；汪水平等，2003）。目前，茶多酚是我國食品添加劑標準委員會批準使用的天然抗氧化劑之一，其可通過保持細胞的完整性，以保證各種細胞功能。故其在畜牧養(yǎng)殖業(yè)中的應用已引起眾多研究者的關注。研究表明，茶多酚對動物和人體是安全的（高海榮等，2016）。有關報道也表明茶多酚對肉雞的增重、料肉比有一定的改善作用（曹兵海等，2003），也可降低鵪鶉及蛋雞血清中的總膽固醇、甘油三酯水平（李樺等2015；尹靖東等，2002）。然而關于茶多酚對肉雞抗氧化能力的影響卻鮮有報道。本研究以AA肉雞為試驗對象，探討茶多酚對肉雞生產(chǎn)性能及抗氧化能力的影響，為其在肉雞生產(chǎn)中應用提供理論依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 試驗材料 茶多酚購自徐州豐瑞生物科技有限公司，純度為99%。

1.2 試驗動物與設計 試驗動物為1日齡AA肉仔雞，購自棗莊市富平孵化場。選擇128只1日齡AA肉仔雞，隨機分成4個日糧處理組，每個日糧處理組分4個重復，每個重復8只雞。第1組為對照組，飼喂基礎日糧，第2、3、4組分別在日糧中添加 40、80、120 mg/kg 的茶多酚。試驗期 42 d。參照美國NRC（1994）營養(yǎng)需要配制的粉狀配合飼料，基礎日糧組成及營養(yǎng)水平見表1。

1.3 飼養(yǎng)管理 各組飼養(yǎng)管理方式一致。試驗肉雞雙層籠養(yǎng)，自由采食和飲水，控制舍內(nèi)溫度、濕度和光照，衛(wèi)生學指標符合雞的衛(wèi)生要求。免疫和消毒程序按常規(guī)程序進行。

1.4 樣品采集與測定方法

1.4.1 生產(chǎn)性能指標的測定 試驗期間每天記錄肉雞采食量，21日齡、42日齡8:00稱重 （稱重前一夜禁食12 h，僅供飲水）。計算各組的平均日增重（ADG）、平均日采食量（ADFI） 和料肉比（F/G）。

1.4.2 血清指標的測定 每個處理組隨機取4只翅下靜脈采血，血液樣品4℃下3000 r/min離心10 min，裝于 1.5 mL的eppendorf管中，置-20℃冰箱中保存?zhèn)溆谩?/p>

血清中丙二醛（MDA）含量的測定采用試劑盒法（硫代巴比妥酸比色法）（南京建成生物工程研究所），nmol/mL 。

血清中超氧化物歧化酶（SOD）活力的測定采用試劑盒法（黃嘌呤氧化酶法）（南京建成生物工程研究所），U/mL。

血清中谷胱甘肽過氧化物酶（GSH-Px）活力的測定采用試劑盒法（DTNB比色法）（南京建成生物工程研究所），U/mL。

血清中CAT活力的測定采用試劑盒法（紫外分光光度計法）（南京建成生物工程研究所），U/mL。

1.4.3 胸肌抗氧化能力指標的測定 靜脈采血后斷頸處死（Close等，1997），分離胸肌并稱重，快速取1～2 g胸大肌組織樣品放入液氮中速凍，-70℃保存用于分析有關酶活性和基因表達。

表1 基礎日糧的組成及營養(yǎng)水平（風干基礎）

根據(jù)Gen Bank上雞GPx4基因m RNA序列設計引物，TRIZOL法提取總RNA后，用Oligo（dT）引物和AMV反轉(zhuǎn)錄酶進行反轉(zhuǎn)錄，RT-PCR反應體系為SYBR Premix Ex Taq，上下游引物和cDNA模板以GAPDH為內(nèi)參，反應程序為：變性95℃，10 s，退火 95 ℃，5 s，延伸 60℃，34 s。引物詳細信息見表2。

本試驗采用熒光定量PCR中的雙標準曲線法對肉雞肌肉GPx4的相對表達量進行檢測，按試劑盒（大連寶生物公司）說明書進行操作，反應結束后分析熔解曲線，對引物特異性進行判定。

表2 相關引物序列

1.5 統(tǒng)計分析 采用SPSS（18.0.3）統(tǒng)計處理軟件進行數(shù)據(jù)方差分析，試驗結果采用“平均值±標準差”表示。

2 結果與分析

2.1 茶多酚對肉仔雞生產(chǎn)性能的影響 茶多酚對肉仔雞生產(chǎn)性能的影響見表3。由表3可知，21日齡，120 mg/kg茶多酚組的平均日采食量和平均日增重分別顯著高于對照組18.64%（P＜0.05）、22.86%（P＜0.05），與對照組比較120 mg/kg茶多酚組的料肉比則顯著降低了3.42%（P＜0.05）。而在42日齡時，與對照組相比，茶多酚各添加組的平均日采食量（P＜0.05）和平均日增重（P＜0.05）均顯著增加，茶多酚80 mg/kg與120 mg/kg組的料肉比均顯著降低（P＜0.05）。

2.2 茶多酚對肉仔雞血清抗氧化指標的影響茶多酚對肉仔雞血清抗氧化指標的影響見表4。由表4可知，21日齡時，與對照組相比，80、120 mg/kg茶多酚組肉仔雞血清中GSH-Px、CAT和SOD的活力均顯著上升 （P＜0.05）；在42日齡時，80、120 mg/kg茶多酚組肉仔雞血清中GSHPx和 SOD的活力均顯著上升 （P＜0.05），但CAT活力無顯著性變化 （P＞0.05）。在21日齡時，與對照組相比，各試驗組之間肉雞血清的MDA含量顯著下降（P＜0.05）。而在42日齡時，與對照組相比，茶多酚80、120 mg/kg組肉仔雞血清中的MDA含量分別顯著降低了14.88%、17.79%（P ＜ 0.05）。

表3 茶多酚對肉仔雞生產(chǎn)性能的影響

表4 茶多酚對血清抗氧化相關指標的影響

2.3 茶多酚對肉仔雞胸肌GPx4表達水平的影響茶多酚對肉仔雞胸肌GPx4表達水平的影響見圖1。由圖1可知，與對照組相比較，茶多酚80 mg/kg組和120 mg/kg組的肉仔雞胸肌GPx4表達水平顯著上調(diào)（P ＜ 0.05）。

3 討論

3.1 茶多酚對肉雞生產(chǎn)性能的影響 李樺等（2015）的研究表明，在飲水中添加茶多酚，能不同程度的改善肉雞的平均日增重，降低料重比。李衛(wèi)春等（2008）研究指出，茶多酚能降低料肉比，且對肉雞生產(chǎn)性能的影響存在性別差異。徐曉娟等（2011）報道，在飼糧中添加一定濃度水平的茶多酚能顯著提高青腳麻雞生產(chǎn)性能，但飼料轉(zhuǎn)化率不與日糧中茶多酚添加量成正比。易先國（2014）也報道，飼料中添加茶多酚可使4周齡以上固始雞雛雞極顯著增重，料重比也明顯降低。而曹兵海等（2003）報道，在肉仔雞日糧中添加0.4%的茶多酚，對肉仔雞的增重、料肉比等有顯著改善作用。本研究結果表明，日糧中添加120 mg/kg茶多酚在一定程度上可以改善肉仔雞生產(chǎn)性能，差異顯著（P＜0.05）。此結果與上述研究結果有些不一致，這有可能與肉雞的品種及茶多酚的添加水平不同有關。茶多酚能夠影響動物生產(chǎn)性能，可能由于其屬于黃酮類物質(zhì)，具有植物雌激素活性，可促進動物生長，影響動物生產(chǎn)性能。

圖1 茶多酚對肉仔雞胸肌GPx4表達水平的影響

3.2 茶多酚對肉雞血清抗氧化指標的影響GSH-Px是生物機體細胞內(nèi)H2O2和脂質(zhì)自由基的清除劑。SOD是自由基損害的主要防御酶，其重要意義在于清除H2O2和OH-的前身O2-，進而保護細胞不受毒性氧自由基的損傷，所以其活力可以反映機體清除氧自由基的能力，故測定SOD可以判斷組織內(nèi)的自由基水平及脂質(zhì)過氧化程度（于揚等，2013）。SOD和GSH-PX兩種酶能協(xié)同減弱自由基的損傷效應。CAT能分解H2O2以減少機體受自由基的侵害，保護細胞膜的完整性（李樺等，2016）。生物機體內(nèi)的酶類氧自由基清除劑SOD、GSH-Px和CAT構成酶促抗氧化體系。

有些研究表明，茶多酚可以誘導GSH-Px、SOD和CAT的生成，同時能激活體內(nèi)抗氧化物酶及其轉(zhuǎn)錄系統(tǒng)，以提高動物機體的抗氧化能力。李衛(wèi)春等（2008）報道，茶多酚能顯著提高肉雞血漿中的抗氧化物GSH-Px、SOD和CAT活性。李樺等（2016）研究結果表明，肉雞飲水中添加綠茶多酚能不同程度改善熱應激狀態(tài)下的血清SOD、GSH-Px抗氧化指標。汪小紅等（2017）研究表明，TP可顯著提高血漿總超氧化物歧化酶 （T-SOD）和谷胱甘肽過氧化物酶（GPx-Px）活性。本研究結果表明，21日齡時，與對照組相比，80、120 mg/kg茶多酚組肉仔雞血清中的的 GSH-Px、CAT和SOD的活力均顯著上升（P＜0.05）；而在42日齡時，80、120 mg/kg茶多酚組肉仔雞血清中GSHPx和SOD的活力均顯著上升（P＜0.05），但CAT活力無顯著性變化（P＞0.05），與以上試驗結果基本一致。

MDA是脂質(zhì)過氧化的代謝產(chǎn)物，其可間接反映氧自由基對細胞的損傷程度。MDA含量可以反映脂質(zhì)過氧化程度。茶多酚與自由基反應生成較為穩(wěn)定的酚氧自由基，從而達到直接清除自由基的目的，同時能抑制脂質(zhì)過氧化作用（Masella等，2005；Wanasundara 等，1998）。 茶多酚對自由基引起的細胞膜脂質(zhì)過氧化損傷有保護作用，對細胞膜MDA的生成有抑制作用（晁婭梅等，2016；Park等，2003）。李衛(wèi)春等（2008）報道，肉雞日糧中添加茶多酚，血漿中的MDA含量與對照組差異不顯著。然而，李樺等（2015）研究則表明，茶多酚能有效抑制血液中MDA的生成，減少機體損傷。本研究結果表明，在21日齡時，與對照組相比，各試驗組之間肉雞血清的MDA含量顯著下降 （P＜0.05）。而在42日齡時，與對照組相比，茶多酚80、120 mg/kg組肉仔雞血清中的MDA含量分別顯著降低了14.88%、17.79%（P＜0.05）。此結果與上述研究相比有些不一致，這有可能與茶多酚的添加水平不同，添加時間長短有關。

3.3 茶多酚對肉仔雞胸肌GPx4表達水平的影響GPx4是GSH-Px家族同工酶的一種，也是哺乳動物細胞中唯一能直接還原生物膜上的磷脂氫過氧化物的抗氧化酶。研究表明，GPx4不但可以分解過氧化氫，而且還可以分解過氧化脂質(zhì)，以減少體內(nèi)脂質(zhì)氫過氧化物的累積。GPx4可與生物膜內(nèi)及其脂蛋白上脂質(zhì)過氧化物結合，保護細胞內(nèi)和細胞膜上的脂蛋白免受過氧化物介導的損傷。所以，在動物屠宰后，如果肌肉中GPx4基因mRNA相對表達量高，那么就說明該雞肉中GPx4酶活性高，就可以更加有效地抑制肉產(chǎn)品的腐?。↙i等，2015；Gatellier等，2004）。 本研究表明，與對照組相比較，茶多酚80、120 mg/kg組的肉仔雞胸肌GPx4表達水平上調(diào)，差異顯著。

4 小結

茶多酚對肉仔雞的生長性能有促進作用。茶多酚對抗氧化物酶GSH-Px、SOD和CAT的活性有提高作用，同時茶多酚的添加能降低肉雞血清中的MDA含量，對機體的抗氧化能力有一定的促進作用。在轉(zhuǎn)錄水平上，茶多酚可顯著提高肉雞胸肌GPx4基因mRNA的表達量，進而提高GSH-Px酶活性，保護肉雞肌肉生物膜不受損傷，為其貨架期延長起到積極作用。