于士龍 ，羅勝男 ，徐菁陽(yáng) ，崔思嬌 ，汪 宇

（1.中國(guó)人民解放軍第463醫(yī)院，遼寧 沈陽(yáng) 110042； 2.沈陽(yáng)藥科大學(xué)，遼寧 沈陽(yáng) 110000）

匹多莫德是人工合成的免疫調(diào)節(jié)劑，能顯著下調(diào)由植物血凝素誘導(dǎo)的血單核細(xì)胞白細(xì)胞介素4（IL－4）等細(xì)胞因子的分泌，增加γ干擾素（IFN－γ）和IL－12等Th1型細(xì)胞因子的分泌，從而調(diào)節(jié)Th1／Th2細(xì)胞因子平衡。匹多莫德通過(guò)免疫功能調(diào)節(jié)機(jī)制發(fā)揮其抗細(xì)菌和病毒作用，預(yù)防和降低感染的復(fù)發(fā)[1－2]。其口服制劑市售劑量下可快速起效，服用方便，無(wú)注射疼痛，且水溶性良好，各口服劑型的生物利用度無(wú)明顯差異，因而應(yīng)用廣泛。但由于匹多莫德的分子結(jié)構(gòu)中含有2個(gè)酰胺結(jié)構(gòu)，其在有水的條件下易受pH和溫度等條件影響而水解。本研究中探討了匹多莫德水溶液穩(wěn)定性的影響因素[3]，考察不同條件下匹多莫德水溶液的穩(wěn)定性，為其口服液體制劑或注射劑的處方工藝篩選提供參考。

1 儀器與試藥

1.1 儀器

高效液相色譜儀（美國(guó)SSI科學(xué)系統(tǒng)公司）；pHS－25型pH計(jì)（上海儀電科學(xué)儀器股份有限公司）；HNP－400GSD型綜合藥品穩(wěn)定性試驗(yàn)箱（重慶宇碩實(shí)驗(yàn)儀器公司）；ATY224型電子分析天平（日本島津公司）；CSF－18型超聲波清洗儀（上海超聲波儀器廠，功率為500 W）；DK－98－Ⅱ型恒溫水浴鍋（天津市泰斯特儀器有限公司）。

1.2 試藥

匹多莫德原料藥（批號(hào)為151102，江蘇吳中醫(yī)藥集團(tuán)公司）；匹多莫德對(duì)照品（中國(guó)食品藥品檢定研究院，含量為99.9%，批號(hào)為100588－201402）；甲醇和異丙醇為色譜純，氫氧化鈉和磷酸二氫鈉為分析純。

2 方法與結(jié)果

2.1 樣品溶液制備[4]

稱(chēng)取匹多莫德原料藥約80 g，加入2 000 mL水中，將樣品水溶液置30℃水浴中，攪拌溶解，完全溶解后停止加熱，冷卻至室溫。將樣品均分成15份，以30%氫氧化鈉分別調(diào)節(jié) pH 為 1.8，2.5，3.0，3.5，4.0，4.5，5.0，5.5，6.0，6.5，7.0，7.5，8.0，8.5，9.0（分別編號(hào)為 1 ～15）。重復(fù)以上步驟，平行制備3份，作為3種不同存放條件下的試驗(yàn)樣品。

2.2 含量測(cè)定[5－6]

2.2.1 色譜條件

色譜柱：Diamonsil C18柱（250 mm × 4.6 mm，5 μm）；流動(dòng)相：0.01mol／L 磷酸二氫鈉 － 甲醇 － 異丙醇（95∶4∶1，磷酸調(diào) pH 至 2.5）；檢測(cè)波長(zhǎng)：210 nm；柱溫：30℃；流速：1.0 mL ／min。

2.2.2 溶液制備

供試品溶液：精密量取樣品0.5 mL，置50 mL容量瓶中，以流動(dòng)相定容至刻度，搖勻，即得。

對(duì)照品貯備液：取匹多莫德對(duì)照品適量，精密稱(chēng)定，加流動(dòng)相溶解，即得質(zhì)量濃度為0.9 g／L的溶液。

2.2.3 方法學(xué)考察

線(xiàn)性關(guān)系考察：精密吸取對(duì)照品貯備液適量，加流動(dòng)相分別稀釋成質(zhì)量濃度為 0.450，0.225，0.113，0.056，0.028，0.014 g／L 的對(duì)照品溶液，分別精密吸取上述溶液各20 μL，注入液相色譜儀，記錄峰面積，以峰面積（Y）對(duì)質(zhì)量濃度（X）進(jìn)行線(xiàn)性回歸，得回歸方程Y＝2.530 9×104X＋15.175 2×104，r＝0.999 7（n＝6）。結(jié)果表明，匹多莫德質(zhì)量濃度在0.45～0.014 g／L范圍內(nèi)與峰面積線(xiàn)性關(guān)系良好。

重復(fù)性與精密度試驗(yàn)：取匹多莫德對(duì)照品適量，精密稱(chēng)定，加流動(dòng)相溶解，平行制備6份質(zhì)量濃度為0.25g／L的溶液，測(cè)定含量。結(jié)果平均百分含量為99.65%，RSD為1.21%（n＝6），表明方法重復(fù)性良好。另取其中1份匹多莫德對(duì)照品溶液，精密吸取20 μL，連續(xù)進(jìn)樣6次，測(cè)定含量。結(jié)果平均百分含量為99.23%，RSD為0.99%（n＝6），表明儀器精密度良好。

穩(wěn)定性試驗(yàn)：取匹多莫德對(duì)照品貯備液，分別室溫放置 0，1，2，4，6 h，用 0.45 μm 微孔濾膜濾過(guò)，精密吸取20 μL，注入液相色譜儀，測(cè)定匹多莫德含量。結(jié)果的RSD為1.25%（n＝4），表明溶液在6 h內(nèi)穩(wěn)定。

加樣回收試驗(yàn)：精密吸取已知含量的同一匹多莫德樣品溶液6份，每份1 mL，加流動(dòng)相稀釋200倍，每份各精密吸取5 mL，分別精密加入對(duì)照品貯備液2.0 mL，按擬訂色譜條件進(jìn)樣測(cè)定。結(jié)果見(jiàn)表1。

表1 匹多莫德加樣回收試驗(yàn)結(jié)果（n＝6）

2.3 穩(wěn)定性影響因素考察[7－8]

2.3.1 室溫普通光照試驗(yàn)

將2.1項(xiàng)下制備的供試品溶液于室溫和普通光照條件下保存3個(gè)月，按擬訂色譜條件，分別于第0，15，30，60，90 d時(shí)測(cè)定樣品中匹多莫德含量，同時(shí)檢測(cè)各樣品的pH。結(jié)果見(jiàn)表2。

表2 常溫光照條件下不同pH樣品含量和pH變化

2.3.2 60℃光照試驗(yàn)

將2.1項(xiàng)下制備的供試品溶液于60℃和普通光照條件下保存3個(gè)月，按擬訂色譜條件，分別于第0，15，30，60，90天時(shí)測(cè)定樣品中匹多莫德含量，同時(shí)檢測(cè)各個(gè)樣品的pH。結(jié)果見(jiàn)表3。

表3 60℃光照條件下不同pH樣品含量和pH變化

2.3.3 室溫強(qiáng)光（4 500 lx）[9－10]試驗(yàn)

將2.2.2項(xiàng)下制備的供試品溶液于室溫和強(qiáng)光（4 500 lx）條件下保存3個(gè)月，按擬訂色譜條件，分別于第 0，15，30，60，90 d 時(shí)測(cè)定樣品中匹多莫德含量，同時(shí)檢測(cè)各個(gè)樣品的pH。結(jié)果見(jiàn)表4。

表4 室溫強(qiáng)光（4 500 lx）條件下不同pH樣品含量和pH變化

3 討論

在室溫普通光照儲(chǔ)存條件下，4－15號(hào)樣品（pH 3.5～9）的含量變化均小于10%，說(shuō)明此條件匹多莫德水溶液相對(duì)穩(wěn)定。其中，9－15號(hào)樣品（pH 6～9）在第30天后的含量變化趨緩，均小于1.5%。由表3可知，14號(hào)和15號(hào)樣品在儲(chǔ)存期間pH變化較大，但其pH僅在30 d內(nèi)變化程度較大，30 d后pH穩(wěn)定在7～8范圍內(nèi)不變，說(shuō)明當(dāng)溶液pH大于8時(shí)，其最終穩(wěn)定的pH為7～8。因此，在室溫普通光照條件下，匹多莫德水溶液pH為3.5～8時(shí)相對(duì)穩(wěn)定，pH為6～8時(shí)最穩(wěn)定。

在60℃普通光照儲(chǔ)存條件下，6－15號(hào)樣品（pH 4.5～9）的含量變化均小于10%，說(shuō)明此條件匹多莫德水溶液相對(duì)穩(wěn)定；其中1－2號(hào)樣品的含量變化均超過(guò)了50%，說(shuō)明在低pH條件下升高溫度更容易加速匹多莫德的分解；10－15號(hào)樣品（pH 6.5～9）在第30天后的含量變化趨緩，且均小于1.5%。由表3可知，13－15號(hào)樣品（pH 8～9）在儲(chǔ)存期間pH變化較大，但其pH在30 d后變化趨緩，pH在7左右保持穩(wěn)定?？芍?0℃普通光照條件下，pH為4.5～8的匹多莫德水溶液相對(duì)穩(wěn)定，pH為6～7.5最穩(wěn)定。無(wú)論在60℃普通光照條件下，還是在室溫普通光照條件下，匹多莫德水溶液的含量與pH變化趨勢(shì)均一致；但60℃普通光照條件下，能使匹多莫德水溶液保持穩(wěn)定的條件范圍更窄?？芍邷夭焕谄ザ嗄滤芤旱姆€(wěn)定。

在室溫強(qiáng)光（4 500 lx）條件下，4－15 號(hào)樣品（pH 4.5～9）的含量變化均小于10%，說(shuō)明此條件匹多莫德水溶液相對(duì)穩(wěn)定；其中5－15號(hào)樣品（pH 5～9）在第60天后的含量變化趨緩，均小于1%。由表4可知，13－15號(hào)樣品（pH 8～9）在儲(chǔ)存期間pH變化較大，但其pH在30 d后變化趨緩，基本穩(wěn)定在6～7范圍內(nèi)?？芍?，在室溫強(qiáng)光（4 500 lx）條件下，pH為 4.5～7.5的匹多莫德水溶液相對(duì)穩(wěn)定，pH為5～7.5最穩(wěn)定。室溫強(qiáng)光（4 500 lx）條件下，匹多莫德水溶液的含量和pH變化趨勢(shì)與其他2種條件相一致，而穩(wěn)定性不如條件室溫普通光照，但要強(qiáng)于60℃普通光照?？芍?，光線(xiàn)可以影響匹多莫德的穩(wěn)定性，但并不是主要影響因素。

綜上所述，匹多莫德水溶液保持穩(wěn)定的最佳條件為調(diào)節(jié)pH為6～8，同時(shí)應(yīng)在室溫和避光條件下儲(chǔ)存。匹多莫德水溶液主要用于注射劑和口服制劑，除了注射劑要保持特定的pH范圍外，口服制劑還要受胃液pH的影響。胃液的 pH一般低于3，pH為1.8～3.0時(shí)匹多莫德水溶液最不穩(wěn)定，故本研究結(jié)果可為今后進(jìn)一步進(jìn)行匹多莫德的制劑處方篩選和體內(nèi)穩(wěn)定性研究提供參考。