何俊婷 ，張芳俠 ，曹愛蘭 ，王景峰 ，惠選柱

（1.陜西醫(yī)藥控股醫(yī)藥研究院有限公司，陜西 西安 710075； 2.陜西中藥研究所，陜西 西安 710075； 3.陜西醫(yī)藥控股山海丹藥業(yè)有限公司，陜西 西安 710075； 4.陜西省中藥提取分離與制劑工藝工程研究中心，陜西 西安 710075）

魚金注射液是由魚腥草、金銀花經(jīng)重蒸餾得到的芳香水制成的純中藥制劑，用于急性上呼吸道感染、急性支氣管炎[1]。魚腥草與金銀花的芳香水為乳白色混懸液，需加入吐溫－80增溶，使其成為澄明溶液。增溶劑的添加是中藥注射劑提高有效成分溶解度、保證溶液穩(wěn)定的常用方法，也是影響中藥注射劑質(zhì)量和安全性的關(guān)鍵技術(shù)[2]。吐溫－80是一種聚合物，穩(wěn)定性不佳，含有大量雜質(zhì)或降解產(chǎn)品，是引發(fā)急性過敏癥狀的主要原因[3－4]。本研究中采用羥丙基－β－環(huán)糊精、磺丁基 －β－環(huán)糊精、甲基－β－環(huán)糊精作為吐溫－80的替代品。其中，羥丙基－β－環(huán)糊精相對表面活性和溶血活性比較低，且對肌肉無刺激性，是一種理想的注射劑增溶劑[5]；磺丁基－β－環(huán)糊精是陰離子型高水溶性環(huán)糊精衍生物，有較好的增溶作用，能降低腎毒性、緩和藥物溶血性等；甲基－β－環(huán)糊精能很好地對藥物進行分子包合，從而提高藥物的穩(wěn)定性、水溶性、安全性[6－8]。采用3種不同的替代吐溫－80的增溶劑制備魚金注射劑，通過穩(wěn)定性考察在溫度和光線的影響下制劑隨時間變化的規(guī)律，為產(chǎn)品生產(chǎn)、儲存、包裝等提供科學(xué)依據(jù)[9]，為輔料及穩(wěn)定性研究、魚金注射液再研究、再評價工作的重要切入點?，F(xiàn)報道如下。

1 儀器與試藥

1.1 儀器

Agilent 7890A型氣相色譜儀（美國安捷倫公司）；AG－135型電子分析天平（德國，MettlerToledo）；WD－A型藥物穩(wěn)定性檢查儀（天津藥典標準儀器廠）。

1.2 試藥

羥丙基－β－環(huán)糊精（西安德立生物化工有限公司，批號為 171002）；磺丁基－β－環(huán)糊精（批號為170301），甲基 －β －環(huán)糊精（批號為 170301），均為淄博千匯生物科技有限公司產(chǎn)品；吐溫－80（分析純，上海申宇醫(yī)藥化工有限公司）；活性炭（上?；钚蕴繌S有限公司，批號為160305）；甲基正壬酮對照品（批號為111640－201005），乙酸龍腦酯對照品（批號為110759－200303），芳樟醇對照品（批號為 1503－200001），均由中國食品藥品檢定研究院提供；魚金注射液（批號分別為 20170103，20170104，20170105），魚腥草、金銀花芳香水，均為陜西醫(yī)藥控股集團山海丹藥業(yè)有限責(zé)任公司產(chǎn)品；磷酸鹽標準緩沖液（pH＝6.86，25℃，上海虹北試劑廠）；水為純化水，其余試劑均為分析純。

2 方法與結(jié)果

2.1 制備方法

取魚腥草4 kg，金銀花2 kg，加水8倍量，水蒸氣蒸餾，收集餾液6 000 mL，將蒸餾液進行重蒸餾，收集餾液近1 000 mL，鞣質(zhì)項檢查合格后，用稀釋法分次加入增溶劑，混勻，再依次加入焦亞硫酸鈉、氯化鈉和枸櫞酸鈉溶液適量調(diào)節(jié)pH為5.9～6.5，攪勻，配制至1 000 mL，濾過，再用 0.45 μm微孔濾膜，精濾 3次，取濾液，灌裝，流通蒸氣滅菌30 min，即得。魚腥草、金銀花重蒸餾得到的芳香水為微帶乳（黃）色的液體，經(jīng)試驗驗證，當(dāng)加入0.50%羥丙基 －β－環(huán)糊精或1.50%磺丁基－β－環(huán)糊精或0.45%甲基－β－環(huán)糊精增溶后，肉眼可見魚腥草、金銀花重蒸餾溶液變澄清。

2.2 檢查

取供試品溶液，照2015年版《中國藥典（四部）》不溶性微粒檢查法（通則0903）測定，可見異物檢查法（通則0904）測定，pH測定法（通則0631）測定。結(jié)果顯示，3種不同增溶劑配制的魚金注射液各項檢測指標均符合規(guī)定。

2.3 含量測定

色譜條件與系統(tǒng)適用性試驗：色譜柱為鍵合交聯(lián)聚乙二醇為固定液的毛細管柱（DM WAX氣相色譜柱，30 m ×0.32 mm，0.25 μm ）；起始溫度 70 ℃ ，維持5 min，再以5℃ ／min的速率升溫至140℃，維持2 min，再以30℃ ／min的速率升溫至 250℃，維持 5 min；進樣口溫度230℃；檢測器溫度280℃。理論板數(shù)按甲基正壬酮峰計應(yīng)不低于2 000。在此條件下的色譜圖見圖 1。

圖1 氣相色譜圖

溶液制備：分別取甲基正壬酮、乙酸龍腦酯及芳樟醇對照品適量，精密稱定，分別加乙酸乙酯制成每1 mL分別含 100，25，10 μg 的溶液，即得對照品溶液。精密量取魚金注射液25 mL，置具塞試管中，加入乙酸乙酯5 mL，再加氯化鈉5 g，振搖3 min，分取乙酸乙酯層，再加入乙酸乙酯5 mL，振搖3 min，分取2次乙酸乙酯層提取液，定容至10 mL容量瓶中，搖勻，作為供試品溶液。

含量測定：分別精密吸取對照品溶液與供試品溶液各1 μL，注入氣相色譜儀，測定，計算，結(jié)果見表1。

表1 不同增溶劑配制樣品含量測定結(jié)果（ g／mL）

2.4 影響因素試驗

高溫試驗：取魚金注射液，60℃條件下放置10 d，于0，5，10 d時取樣檢測。與0 d比較，供試品性狀、含量、pH、可見異物、不溶性微粒均未發(fā)生顯著變化。

強光照射試驗：供試品于照度為（4 500±500）lx條件下放置 10 d，在0，5，10 d時取樣檢測。供試品性狀、含量、pH、可見異物、不溶性微粒均未發(fā)生顯著變化。

低溫凍融試驗：低溫試驗中，分別將魚金注射液置冰箱中，在4℃條件下觀察2 d，然后取出樣品置40℃加速條件下考察2 d，反復(fù)循環(huán)3次。凍融試驗中，分別將3批魚金注射液置低溫冰箱中，在－20℃條件下觀察2 d，然后取出樣品置40℃加速條件下考察2 d，反復(fù)循環(huán)3次。取樣檢查外觀色澤、可見異物、不溶性微粒、pH及甲基正壬酮、乙酸龍腦酯、芳樟醇含量，結(jié)果見表2。

加速穩(wěn)定性試驗：供試品溶液在（40±2）℃條件下放置 6 個月，在 0，1，2，3，6 個月時分別取樣，檢查供試品性狀（無色、澄明）、含量、pH、可見異物（符合規(guī)定）、不溶性微粒。結(jié)果見表3。顯示3種增溶劑樣品均未發(fā)生顯著變化。

表2 低溫凍融穩(wěn)定性試驗結(jié)果

3 討論

3.1 穩(wěn)定性試驗

對魚金注射液外觀形狀、不溶性微粒、pH、可見異物及含量測定進行了全面分析。結(jié)果表明，影響因素試驗對魚金注射液穩(wěn)定性無明顯影響。低溫凍融試驗結(jié)果表明，試驗前后，3組供試品pH、不溶性微粒、有效成分含量變化不大，前后均符合質(zhì)量標準要求。因此，低溫及冷凍對3種增溶劑配制的魚金注射液穩(wěn)定性基本無影響。

3.2 加速穩(wěn)定性試驗

羥丙基－β－環(huán)糊精、甲基－β－環(huán)糊精組供試品外觀形狀、不溶性微粒、pH、可見異物及含量均未發(fā)生明顯變化；磺丁基－β－環(huán)糊精組供試品溶液在經(jīng)過6個月加速穩(wěn)定性試驗后，不溶性微粒量增多，供試品外觀有輕微的乳光產(chǎn)生。磺丁基－β－環(huán)糊精作為增溶劑，添加量為1.5%時才可使魚金注射液澄清，輔料用量較大，但增溶效果相對較差，制劑穩(wěn)定性不佳，因此其不適用于魚金注射液的增溶。

表3 不同增溶劑下供試品溶液加速穩(wěn)定性試驗結(jié)果

3.3 后續(xù)研究方向

截至目前，已完成6個月長期加速穩(wěn)定性研究，3種增溶劑制備的魚金注射液各項指標均符合規(guī)定，未來將繼續(xù)對羥丙基－β－環(huán)糊精、甲基－β－環(huán)糊精組供試品進行長期穩(wěn)定性研究。