曲木，張寶龍，于恩浩，黃建，趙國(guó)營(yíng)，翟勝利＊

（1.天津現(xiàn)代晨輝科技集團(tuán)有限公司，天津市水族動(dòng)物功能性飼料企業(yè)重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室，天津 301800；2.天津市寶坻區(qū)畜牧水產(chǎn)業(yè)發(fā)展服務(wù)中心，天津 301800）

隨著社會(huì)經(jīng)濟(jì)的不斷發(fā)展，人民的生活水平不斷提高，喜歡飼養(yǎng)觀賞魚的人越來(lái)越多。獅子頭金魚（Red lion-head goldfish）隸屬鯉形目（Cypriniformes）鯉科（Cyprinidae）鯽屬（Carassius），以其頭部豐滿的肉瘤聞名。近年來(lái)，其養(yǎng)殖范圍日趨廣泛，相關(guān)的著色研究也逐漸增多，而關(guān)于著色劑對(duì)其血液及免疫力方面的影響鮮有研究，但魚體健康程度可直接影響其體表顏色、降低其觀賞價(jià)值[1]。萬(wàn)壽菊（Tagetes erecta）為菊科萬(wàn)壽菊屬一年生草本植物，含有豐富的天然色素——葉黃素[2]。萬(wàn)壽菊在園林綠化、食品著色、化妝品、煙草、醫(yī)療及禽類飼料中廣泛應(yīng)用，開(kāi)發(fā)潛力巨大[3-4]。蝦青素是一種在水產(chǎn)養(yǎng)殖上被廣泛應(yīng)用的粉紅色的晶體，為類胡蘿卜素的一種，許多學(xué)者通過(guò)動(dòng)物和臨床實(shí)驗(yàn)證明蝦青素具有抑制腫瘤發(fā)生、增強(qiáng)免疫功能、提高肌肉性能等多方面的生理功能，具有廣闊的前景[5-7]。本試驗(yàn)以獅子頭金魚為試驗(yàn)對(duì)象，通過(guò)飼喂含有不同水平的萬(wàn)壽菊粉和蝦青素的飼料，研究其生長(zhǎng)、血液指標(biāo)及免疫力的變化情況，旨在篩選出獅子頭金魚飼料中二者的適宜添加水平，為研制獅子頭金魚提升免疫力飼料提供理論依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 試驗(yàn)用魚

試驗(yàn)用獅子頭金魚購(gòu)自天津市金水族水產(chǎn)養(yǎng)殖有限公司。魚體消毒后，暫養(yǎng)1周，挑選體格健壯、規(guī)格一致（15.63±0.22）g的獅子頭金魚720尾，隨機(jī)分為9個(gè)處理組，每組4個(gè)重復(fù)，每個(gè)重復(fù)20尾魚。試驗(yàn)在天津現(xiàn)代晨輝科技集團(tuán)有限公司循環(huán)水試驗(yàn)室進(jìn)行。

1.2 飼養(yǎng)管理

養(yǎng)殖箱長(zhǎng)0.78m、寬0.58m、高0.47 m，有效水體積為150L。養(yǎng)殖過(guò)程中每天投喂兩次，投飼量為魚體質(zhì)量的3%～6%，隨獅子頭金魚生長(zhǎng)狀況及吃食情況調(diào)整。投喂時(shí)間為每天的09:00和15:00。定期檢測(cè)水質(zhì)，每天記錄水溫、死亡條數(shù)及投餌量。每天換一次水，一周清洗循環(huán)水缸一次，20天清洗一次養(yǎng)殖水缸。試驗(yàn)周期為56天。

1.3 試驗(yàn)飼料

以萬(wàn)壽菊粉（葉黃素含量2%）、蝦青素（有效含量10%）為影響因素，采用雙因素試驗(yàn)設(shè)計(jì)中的3×3因子設(shè)計(jì)，設(shè)計(jì)9種飼料，每個(gè)因素各設(shè)3個(gè)水平，分別為萬(wàn)壽菊粉（0.38%、0.76%、1.52%）、蝦青素（0.04%、0.08%、0.16%），依次記為Diet 1，Diet 2，Diet 3，Diet 4，Diet 5，Diet 6，Diet 7，Diet 8，Diet 9。以不含任何增色劑的基礎(chǔ)飼料做對(duì)照飼料，見(jiàn)表1。

1.4 測(cè)定指標(biāo)和方法

1.4.1 飼料不同水平添加劑獅子頭金魚生長(zhǎng)的影響

增重率、特定生長(zhǎng)率、餌料系數(shù)、蛋白質(zhì)效率、肝體指數(shù)的測(cè)定公式如下：

式中，Wt為終末體重（g）；W0為初始體重（g）；t為試驗(yàn)天數(shù)（d）；F為飼料攝入量干重（g）；CP為飼料粗蛋白含量（%）。

1.4.2 飼料不同水平添加劑對(duì)獅子頭金魚免疫指標(biāo)的影響

試驗(yàn)56天后，將試驗(yàn)魚解剖，從魚尾柄腹側(cè)處抽血，將血液注入標(biāo)記好的離心管中，4℃冰箱內(nèi)靜置4～8 h后在4℃、以4200 r/min轉(zhuǎn)速離心10 min，離心后吸取上層血清放置干凈的離心管中，置于-20℃保存?zhèn)溆?。測(cè)定生理指標(biāo)時(shí)，取出組織，在冰浴條件下用研磨器手動(dòng)勻漿，離心，離心機(jī)設(shè)置與血液離心相同，吸取上清液放置在干凈的離心管中，進(jìn)行各指標(biāo)的測(cè)定。

表1 飼料配方

2 結(jié)果與分析

2.1 飼料不同水平添加劑對(duì)獅子頭金魚生長(zhǎng)的影響

由表2、表3、表4可知，飼料中添加不同水平的萬(wàn)壽菊粉、蝦青素獅子頭金魚生長(zhǎng)性能有顯著影響（P＜0.05）。增重率在Diet 2最高，與Diet 9差異不明顯（P＞0.05），但顯著高于其他飼料組（P＜0.05）；特定增長(zhǎng)率、蛋白質(zhì)效率在Diet 9最高，Diet 2與之差異不顯著（P＞0.05），但顯著高于其他組（P＜0.05）；餌料系數(shù)最低值在Diet 2，與Diet 9差異不顯著（P＞0.05），但顯著低于其他組（P＜0.05）；肝體指數(shù)在Diet 3組最低，與Diet 1、Diet 2、Diet 6、Diet 9飼料組差異不顯著（P＞0.05）。萬(wàn)壽菊粉水平對(duì)獅子頭金魚肝體指數(shù)有顯著影響（P＜0.05），最優(yōu)水平為1.52%；萬(wàn)壽菊粉和蝦青素及其交互作用對(duì)其他指標(biāo)無(wú)顯著影響（P＞0.05）。

2.2 飼料不同水平著色劑對(duì)獅子頭金魚血液指標(biāo)的影響

由表5、表6、表7可知，飼料中添加不同水平的萬(wàn)壽菊粉、蝦青素對(duì)獅子頭金魚血液指標(biāo)有顯著影響（P＜0.05）。甘油三酯受著色劑的影響不顯著（P＞0.05）；血清總膽固醇含量在Diet 1飼料組最低，與Diet 2、Diet 5、Diet 9飼料組無(wú)顯著差異（P＞0.05），但是顯著低于其他組（P＜0.05）；高密度值蛋白膽固醇含量最高值出現(xiàn)在Diet 9飼料組，與Diet 2、Diet 7、Diet 8飼料組差異不顯著（P＞0.05）；低密度脂蛋白膽固醇最低值出現(xiàn)在Diet 2飼料組，與Diet 1、Diet 9飼料組差異不顯著（P＞0.05），但是顯著低于其他組（P＜0.05）。萬(wàn)壽菊粉水平對(duì)血清總膽固醇含量及高密度值蛋白膽固醇含量影響顯著（P＜0.05），最優(yōu)水平均為1.52%。萬(wàn)壽菊粉、蝦青素及其交互作用對(duì)獅子頭金魚其他血液指標(biāo)無(wú)顯著影響。

2.3 飼料不同水平添加劑對(duì)獅子頭金魚免疫指標(biāo)的影響

由表8、表9、表10可知，飼料中添加不同水平的萬(wàn)壽菊粉、蝦青素對(duì)獅子頭金魚免疫指標(biāo)GOT、GPT活性有顯著的影響（P＜0.05），血清中GOT活性在Diet 6最低與Diet 2、Diet 8、Diet 9差異不顯著（P＞0.05），但顯著低于其他組（P＜0.05）；肝胰臟在Diet 9最低，與Diet 2、Diet 1差異不顯著（P＞0.05），但顯著低于其他組（P＜0.05）。GPT中血清含量在Diet 9最低，與Diet 6差異不顯著（P＞0.05），但顯著低于其他組（P＜0.05）；肝胰臟在Diet 6最低，與Diet 2差異不顯著（P＞0.05），但顯著低于其他組（P＜0.05）。萬(wàn)壽菊粉水平對(duì)肝胰臟中GOT活性有顯著影響（P＜0.05），最優(yōu)水平分別為0.38%、0.38%、1.52%；萬(wàn)壽菊粉、蝦青素及其交互作用對(duì)獅子頭金魚血清及肝胰臟中其他指標(biāo)無(wú)顯著影響（P＞0.05）。

表2 各組飼料對(duì)獅子頭金魚生長(zhǎng)指標(biāo)的影響

表3 各組飼料對(duì)獅子頭金魚生長(zhǎng)指標(biāo)的影響的主體間效應(yīng)檢驗(yàn)

表4 各組飼料對(duì)獅子頭金魚生長(zhǎng)指標(biāo)的影響的Two-way ANVOA

表5 各組飼料對(duì)獅子頭金魚血液指標(biāo)的影響

表6 各組飼料對(duì)獅子頭金魚血液指標(biāo)的影響的主體間效應(yīng)檢驗(yàn)

表7 各組飼料對(duì)獅子頭金魚血液指標(biāo)的影響的Two-way ANOVA

表8 各組飼料對(duì)獅子頭金魚組織中GOT、GPT活性的影響

表9 各組飼料對(duì)獅子頭金魚組織中GOT、GPT活性的影響的主體間效應(yīng)檢驗(yàn)

表10 各組飼料對(duì)獅子頭金魚組織中GOT、GPT活性的影響的Two-way ANOVA

3 討論

3.1 飼料不同水平添加劑對(duì)獅頭金魚生長(zhǎng)的影響

蝦青素是一種酮式類胡蘿卜素，屬于萜烯類不飽和化合物，能夠促進(jìn)養(yǎng)殖對(duì)象的生長(zhǎng)、存活[7]。孫劉娟等報(bào)道了蝦青素對(duì)血鸚鵡的生長(zhǎng)有顯著促進(jìn)作用[8]，王魯波等指出，一定濃度的萬(wàn)壽菊葉黃素對(duì)黃顙魚的生長(zhǎng)表現(xiàn)出促進(jìn)作用[9]。本試驗(yàn)也發(fā)現(xiàn)了類似的情況，在飼料中添加蝦青素和萬(wàn)壽菊粉后，各試驗(yàn)組獅子頭金魚的增重率、特定生長(zhǎng)率、餌料系數(shù)和蛋白質(zhì)效率均有所升高，其中Diet 2和Diet 9組增重率顯著高于對(duì)照組。肝指數(shù)是評(píng)價(jià)魚體健康程度的重要指標(biāo)，較低的肝指數(shù)可以說(shuō)明魚體的肝臟負(fù)荷在其自身肝功能調(diào)節(jié)的可控范圍內(nèi)。謝家俊[10]發(fā)現(xiàn)，在飼料中添加蝦青素后，卵形昌鯵幼魚的肝體比和肥滿度大體呈下降的趨勢(shì)。本試驗(yàn)結(jié)果與上述研究相類似，即添加不同含量的蝦青素和萬(wàn)壽菊粉對(duì)獅子頭金魚內(nèi)臟比和肝體比無(wú)顯著影響。

3.2 飼料不同水平添加劑對(duì)獅頭金魚血液指標(biāo)的影響

TG、TC、HDL-C、LDL-C都是反映機(jī)體脂類代謝的指標(biāo)。甘油三酯是機(jī)體內(nèi)存在最多的脂類，其含量升高與動(dòng)脈樣硬化性心血管疾病密切相關(guān)，膽固醇是血液中所有蛋白質(zhì)所含膽固醇之和，高密度脂蛋白膽固醇主要是由肝臟合成，其可以抗動(dòng)脈粥樣硬化，減少患冠狀動(dòng)脈心臟病的危險(xiǎn)，低密度脂蛋白膽固醇含有大量的不飽和脂肪酸，其含量越高，機(jī)體患動(dòng)脈粥樣硬化、冠心病等心血管疾病的概率越大。王述浩等[11]報(bào)道飼料中添加萬(wàn)壽菊粉提高了肉雞血清高密度脂蛋白水平，降低了血清膽固醇和低密度脂蛋白水平。本實(shí)驗(yàn)也發(fā)現(xiàn)了類似的情況，當(dāng)飼料中萬(wàn)壽菊粉、蝦青素水平為0.38%、0.08%時(shí)，獅子頭金魚血液中高密度脂蛋白膽固醇最高，而低密度脂蛋白膽固醇含量最低，表明在飼料中添加萬(wàn)壽菊粉和蝦青素可以維持魚體血脂平衡、保持魚體健康。

3.3 飼料不同水平添加劑對(duì)獅子頭金魚免疫的影響

GOT是轉(zhuǎn)氨酶的一種，主要存在于肝細(xì)胞的線粒體內(nèi)，是醫(yī)學(xué)臨床上肝功能檢查的指標(biāo)，用來(lái)判斷肝臟是否受到損害。當(dāng)肝臟發(fā)生嚴(yán)重壞死或破壞時(shí)，會(huì)引起谷草轉(zhuǎn)氨酶在血清中濃度偏高，所以谷草轉(zhuǎn)氨酶高更能反映肝細(xì)胞受損傷的嚴(yán)重程度。GPT主要存在于肝臟、心臟組織細(xì)胞中，當(dāng)這些組織發(fā)生病變時(shí)，該酶活力增多。付媛媛在飼料中添加黃芪和蝦青素顯著提高中國(guó)對(duì)蝦的免疫相關(guān)酶活，增強(qiáng)非特異性免疫功能及降低中國(guó)對(duì)蝦對(duì)病原的敏感性，增強(qiáng)機(jī)體抗病能力[12]。海璇雋等[13]也報(bào)道了蝦青素可提高小鼠的非特異性免疫和體液免疫功能。本試驗(yàn)中，在飼料中添加萬(wàn)壽菊粉和蝦青素后，各試驗(yàn)組獅子頭金魚的免疫指標(biāo)均有所提升。

4 結(jié)論

投喂萬(wàn)壽菊粉和蝦青素的飼料對(duì)獅子頭金魚的生長(zhǎng)指標(biāo)、免疫指標(biāo)均有顯著影響。實(shí)驗(yàn)中添加0.38%萬(wàn)壽菊粉+0.08%蝦青素和1.52%萬(wàn)壽菊粉+0.16%蝦青素時(shí)效果最佳。從節(jié)約生產(chǎn)成本來(lái)講，建議獅子頭金魚飼料中添加萬(wàn)壽菊粉添加量為0.38%、蝦青素添加量為0.08%。