廈門(mén)市中醫(yī)院，福建 廈門(mén) 361009

防風(fēng)屬于臨床常用的一種中藥，最早記載見(jiàn)于《神農(nóng)本草經(jīng)》，屬于傘形科植物防風(fēng)的干燥根。東北地區(qū)和內(nèi)蒙古東部是該藥物的主產(chǎn)地，多數(shù)情況下在春秋兩季進(jìn)行采挖，將沒(méi)有抽花莖植株的根上須去除，并對(duì)泥沙進(jìn)行徹底的清除處理，在曬干處理之后切片，即得藥材。防風(fēng)性微溫、味辛甘，具有解表祛風(fēng)、勝濕止痛、止痙的治療功效[1]。現(xiàn)代研究顯示，揮發(fā)油、色原酮、香豆素、雜多糖等是中藥防風(fēng)的主要有效成分[2]，具有解熱、鎮(zhèn)痛、抗炎及抗腫瘤等活性。但不同地區(qū)因氣候、土地、溫度、濕度等外在環(huán)境的差異，導(dǎo)致防風(fēng)在生長(zhǎng)過(guò)程中受到影響，其主要成分出現(xiàn)失衡，并影響藥效[3-4]。2015年新修訂的《中國(guó)藥典》規(guī)定對(duì)防風(fēng)含量進(jìn)行測(cè)定應(yīng)該以升麻素苷、5-O-甲基維斯阿米醇苷為指標(biāo)成分[5]。研究就不同產(chǎn)地防風(fēng)飲片中有效成分含量開(kāi)展研究，側(cè)重于分析內(nèi)蒙古、黑龍江、遼寧、安徽等地區(qū)藥物中的升麻素苷、5-O-甲基維斯阿米醇苷等含量進(jìn)行了檢測(cè)，現(xiàn)報(bào)道如下。

1 儀器與材料

1.1 儀器 DHG-9240電熱恒溫鼓風(fēng)干燥箱(上海徐吉電氣有限公司)；LC-2010AHT 高效液相色譜儀( 日本島津公司) ；XS105 電子分析天平(梅特勒-托利多儀器有限公司)；FA1004 電子分析天平(上海精密科學(xué)儀器有限公司天平儀器廠) ；HH-S8數(shù)顯恒溫水浴鍋(上海醫(yī)療器械五廠) 。

1.2 試劑與試藥 升麻素苷對(duì)照品(批號(hào): 111522-201508，中國(guó)藥品生物制品檢定所)；5-O-甲基維斯阿米醇苷對(duì)照品(批號(hào): 111523-201507，中國(guó)藥品生物制品檢定所)；防風(fēng)飲片，采購(gòu)自?xún)?nèi)蒙古、黑龍江、遼寧、安徽藥材公司。甲醇為色譜純，水為純化水。

1.3 數(shù)據(jù)處理 采取SPSS18.0統(tǒng)計(jì)學(xué)軟件進(jìn)行數(shù)據(jù)處理，計(jì)量資料以(x±s)形式表示，統(tǒng)計(jì)分析采取t檢查，計(jì)數(shù)資料統(tǒng)計(jì)分析采取x2檢驗(yàn)，P<0.05時(shí)表示差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 方法與結(jié)果

2.1 水分測(cè)定 將各地區(qū)采購(gòu)的防風(fēng)飲片經(jīng)過(guò)充分的粉碎處理之后，將其過(guò)80目篩。取供試品2 g，通過(guò)平鋪的方式，全部置于完全處于干燥狀態(tài)的扁形稱(chēng)量瓶中，厚不能超過(guò)5 mm，精稱(chēng)后打開(kāi)瓶蓋，在100～105 ℃之間的條件下進(jìn)行干燥處理5 h左右，而后再次蓋上瓶蓋，并再次轉(zhuǎn)移至干燥器，進(jìn)行30 min左右的冷卻處理，進(jìn)行精密稱(chēng)定之后仍然在上述溫度條件下進(jìn)行干燥處理1 h左右，進(jìn)行充分冷卻后稱(chēng)重，連續(xù)兩次稱(chēng)重差異沒(méi)有超過(guò)5 mg為合格。以減失重量為依據(jù)，對(duì)供試品中的含水量進(jìn)行計(jì)算。防風(fēng)飲片水分在10%以下。見(jiàn)表1。

2.2 含量測(cè)定

2.2.1 色譜條件 色譜柱：Lichrospher C18(150 mm×4.6 mm，10 μm)；流動(dòng)相：甲醇-水(35∶65)；檢測(cè)波長(zhǎng)：254 nm；柱溫：40℃[3]；流速：1.0 mL/min；檢測(cè)波長(zhǎng)：254 nm。理論板數(shù)按升麻素苷峰計(jì)算應(yīng)不低于2000。流動(dòng)相稀釋5～10倍后進(jìn)樣，對(duì)不同產(chǎn)地防風(fēng)飲片中有效成分進(jìn)行檢測(cè)分析。

2.2.2 對(duì)照品溶液制備 精稱(chēng)升麻素苷和5-O-甲基維斯阿米醇苷對(duì)照品6.62 mg和6.35 mg置50 mL量瓶中進(jìn)行溶解，并稀釋至刻度線(xiàn)的位置之后進(jìn)行充分的搖勻處理，為儲(chǔ)備液。精取1 mL上述儲(chǔ)備液置于量瓶，加流動(dòng)相至刻度線(xiàn)的位置并充分搖勻，為對(duì)照品溶液。

2.2.3 供試品溶液的制備 精稱(chēng)防風(fēng)飲片粉末0.5 g后，置于規(guī)格為100 mL的圓底燒瓶中，加20 mL甲醇，稱(chēng)重后進(jìn)行水浴回流處理2 h左右，充分放冷之后再次稱(chēng)重，采用甲醇補(bǔ)足減失重量，并進(jìn)行搖勻、過(guò)濾，取1 mL續(xù)濾液，置于5 mL的量瓶中，加入流動(dòng)相，稀釋至刻度的位置，隨后進(jìn)行搖勻處理，過(guò)0.45 μm微孔濾膜，獲得供試品溶液。

2.2.4 線(xiàn)性關(guān)系考察 精密量取對(duì)照品混合儲(chǔ)備液0.25、0.5、1、2、4 mL，置于10 mL的量瓶，經(jīng)流動(dòng)相稀釋后，搖勻，定容至刻度，按照2.2.1所示色譜條件下進(jìn)樣，對(duì)峰面積水平進(jìn)行記錄，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)，橫坐標(biāo)為對(duì)照品溶液濃度，縱坐標(biāo)為峰面積，回歸方程：5-O-甲基維斯阿米醇苷：Y=38498X+2114.6，r= 1；升麻素苷：Y= 35471X+693. 25，r= 0.9999。表明升麻素苷和5-O-甲基維斯阿米醇苷分別在3.31～52.96 μg和18.00～50.80 μg范圍內(nèi)的時(shí)候具有良好的線(xiàn)性關(guān)系。

2.2.5 精密度試驗(yàn) 精稱(chēng)2.2.2項(xiàng)制備對(duì)照品20 uL，按照2.2.1所示色譜條件下，重復(fù)6次，測(cè)定升麻素苷及5-O-甲基維斯阿米醇苷峰面積值，結(jié)果RSD分別為0.87% 和 0.64%，均在2%以?xún)?nèi)，說(shuō)明儀器的精密度良好。

2.2.6 重復(fù)性試驗(yàn) 取內(nèi)蒙古產(chǎn)地的防風(fēng)飲片樣品，按照2.2.3項(xiàng)下所示方法制備6份供試品溶液，在2.2.1所示條件下進(jìn)樣檢測(cè)，記錄峰面積，結(jié)果RSD值分別為1.85%、1.67%，證實(shí)方法的重復(fù)性良好。

2.2.7 穩(wěn)定性試驗(yàn) 取同一供試品溶液，分別在配置后0、4、8、12、24 h后進(jìn)樣檢測(cè)，升麻素苷峰面積RSD值1.87%，5-O-甲基維斯阿米醇苷為1.65%，證實(shí)供試品溶液室溫下24 h內(nèi)穩(wěn)定性良好。

2.2.8 回收率試驗(yàn) 升麻素苷平均回收率為100.7%，5-O-甲基維斯阿米醇苷平均回收率為99.7%，對(duì)比差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)，提示兩種藥材加樣回收率處于較高水平。見(jiàn)表2。

表2 加樣回收率試驗(yàn)結(jié)果

2.2.9 樣品含量測(cè)定 按照2.2.3項(xiàng)下所示方法對(duì)樣品進(jìn)行制備，在2.2.1項(xiàng)下所示色譜條件下進(jìn)樣檢測(cè)，記錄峰面積。結(jié)果示內(nèi)蒙古產(chǎn)防風(fēng)飲片中升麻素苷，5-O-甲基維斯阿米醇苷含量均高于其它產(chǎn)地，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。詳見(jiàn)表3。

表3 不同地區(qū)防風(fēng)飲片中升麻素苷、5-O-甲基維斯阿米醇苷含量測(cè)定

注：與內(nèi)蒙古比較，#P<0.05。

3 討論

防風(fēng)為中醫(yī)臨床上常用中藥，來(lái)源較為復(fù)雜，近緣種作為習(xí)用品的應(yīng)用相對(duì)較多。防風(fēng)性狀鑒定相對(duì)困難，混淆品相對(duì)較多，栽培品種也不確切，從而造成藥材質(zhì)量參差不齊。防風(fēng)產(chǎn)地在歷代古籍中記載，包括有黑龍江、山東、山西、河南、浙江、江蘇、湖北北部等地。目前，防風(fēng)的主要產(chǎn)地在東北和內(nèi)蒙古，質(zhì)量以?xún)?nèi)蒙古產(chǎn)的更佳。

在中藥材中，均會(huì)含有一定的水分，過(guò)多或者過(guò)少均會(huì)影響藥材的質(zhì)量，如果超過(guò)或者是沒(méi)有達(dá)到本身應(yīng)有的含水量水平，藥材質(zhì)量就會(huì)相應(yīng)的出現(xiàn)一定的變化[6]。因此，在本次研究中，對(duì)防風(fēng)飲片含水量觀察發(fā)現(xiàn)，不同產(chǎn)地飲片含水量均符合箱套的要求[7]。將各地區(qū)防風(fēng)飲片的含水量進(jìn)行計(jì)算，其結(jié)果顯示：第一批次平均含水量以安徽最高、其次為黑龍江、內(nèi)蒙古、遼寧。第二批次排序則為內(nèi)蒙古、遼寧、安徽、黑龍江；第三批次為黑龍江、安徽、內(nèi)蒙古、遼寧。由此可見(jiàn)，防風(fēng)飲片的含水量受地域性影響比較明顯。

在藥典規(guī)定采用甲醇溶解樣品后，直接進(jìn)樣檢測(cè)，實(shí)驗(yàn)中發(fā)現(xiàn)，峰形峰底相對(duì)較寬，并且存在嚴(yán)重的拖尾情況，經(jīng)流動(dòng)相稀釋5～10倍后進(jìn)樣檢測(cè)，峰形較高，并且尖，因此，實(shí)驗(yàn)中選擇甲醇提取，流動(dòng)相稀釋的方法對(duì)樣品進(jìn)行了處理[8]。此外，在具體應(yīng)用過(guò)程中，臨床仍舊有必要釋放更提高浸出物及含量測(cè)定的限度，以確保防風(fēng)藥材的有效性。

本次對(duì)不同產(chǎn)地防風(fēng)飲片中有效成分含量對(duì)比分析研究，采取了對(duì)內(nèi)蒙古、黑龍江、遼寧、安徽等地的防風(fēng)飲片中升麻素苷、5-O-甲基維斯阿米醇苷含量進(jìn)行檢測(cè)，發(fā)現(xiàn)不同產(chǎn)地的防風(fēng)飲片升麻素苷、5-O-甲基維斯阿米醇苷的含量存在差異，表現(xiàn)為內(nèi)蒙古>黑龍江>遼寧>安徽，并且各地區(qū)防風(fēng)飲片中升麻素苷、5-O-甲基維斯阿米醇苷含量均高于《中國(guó)藥典》標(biāo)準(zhǔn)，這一結(jié)果與文獻(xiàn)[9-10]報(bào)道結(jié)果一致。研究結(jié)果證實(shí)，不同產(chǎn)地防風(fēng)飲片中有效成分含量差異顯著，產(chǎn)于內(nèi)蒙古防風(fēng)飲片質(zhì)量更優(yōu)(P<0.05)，為今后藥物采購(gòu)與研究分析提供了一個(gè)較好的參考依據(jù)，應(yīng)對(duì)其給予足夠的重視。通過(guò)不同批次含水量和有效成分含量對(duì)比分析，可看出，防風(fēng)飲片的含水量越高，升麻素苷、5-O-甲基維斯阿米醇苷含量則較低。這對(duì)防風(fēng)栽培起到一定指導(dǎo)作用，同時(shí)也為后續(xù)加樣回收創(chuàng)造了有利條件，因升麻素苷、5-O-甲基維斯阿米醇苷加樣回收率處于較高水平。而通過(guò)進(jìn)一步研究防風(fēng)栽培品的用法及用量，得出防風(fēng)栽培品的體重質(zhì)實(shí)，含水分及糖分較之于野生防風(fēng)較多，但含量則相對(duì)較少，因此在實(shí)際應(yīng)用過(guò)程中，仍舊有必要結(jié)合臨床和藥理，制定更為合理的用法和用量，確保治療效果。

綜上所述，不同地區(qū)防風(fēng)飲片中有效成分含量差存在差異，其中產(chǎn)于內(nèi)蒙古防風(fēng)飲片質(zhì)量最佳，在藥物采購(gòu)與研究分析中，應(yīng)對(duì)其給予足夠的重視。