宋亞娟
【摘 要】目的:對(duì)比分析補(bǔ)陽還五湯類方(補(bǔ)陽還五湯和腦健片)中阿魏酸、洋川芎內(nèi)酯A、藁本內(nèi)酯在大鼠體內(nèi)的藥代動(dòng)力學(xué)特征。方法:將補(bǔ)陽還五湯類方灌胃頸靜脈插管大鼠,采用HPLC-DAD法同時(shí)檢測(cè)3種成分在不同時(shí)間點(diǎn)的血藥濃度,經(jīng)DAS2.0計(jì)算得單成分的藥代動(dòng)力學(xué)參數(shù),再采用總量統(tǒng)計(jì)矩(相似度)法整合成整體藥代動(dòng)力學(xué)參數(shù)并進(jìn)行比較。結(jié)果:3種成分在體內(nèi)的總量統(tǒng)計(jì)參數(shù)相差甚遠(yuǎn),而3種成分總和的統(tǒng)計(jì)矩參數(shù)卻比較接近,補(bǔ)陽還五湯和腦健片在大鼠體內(nèi)AUC分別為240.6和133.0,MRT分別為3.192 min和3.259 min,VRT分別為21.59 min2和19.75 min2;補(bǔ)陽還五湯和腦健片中3種成分總量的相似度達(dá)到0.977 8。結(jié)論:補(bǔ)陽還五湯和腦健片在體內(nèi)代謝過程具有相似性,中藥復(fù)方發(fā)揮功效依賴于多成分的整體貢獻(xiàn)。
【關(guān)鍵詞】藥代動(dòng)力學(xué);補(bǔ)陽還五湯;腦健片;阿魏酸;洋川芎內(nèi)酯A;藁本內(nèi)酯
【中圖分類號(hào)】R749.053 【文獻(xiàn)標(biāo)志碼】B 【文章編號(hào)】1005-0019(2018)10-094-01
補(bǔ)陽還五湯類方包括補(bǔ)陽還五湯及其精簡(jiǎn)方(腦健片)。補(bǔ)陽還五湯出自《醫(yī)林改錯(cuò)·癱痿論》,由黃芪、川芎、當(dāng)歸等7味中藥組成,系清代醫(yī)家王清任創(chuàng)立的治療半身不遂辨證屬氣虛血瘀證的經(jīng)典名方。腦健片處方是遵循補(bǔ)陽還五湯之方義,秉承“益氣祛瘀生新法”,將補(bǔ)陽還五湯精簡(jiǎn)為黃芪、川芎和地龍,經(jīng)過二次開發(fā)而成的新型制劑。本課題組前期研究表明,腦健片治療腦缺血療效顯著[1-2],現(xiàn)進(jìn)一步對(duì)其代謝動(dòng)力學(xué)進(jìn)行研究,選擇補(bǔ)陽還五湯類方均含有的阿魏酸、洋川芎內(nèi)酯A、藁本內(nèi)酯3種入血成分為檢測(cè)指標(biāo),研究大鼠灌胃后體內(nèi)藥代動(dòng)力學(xué)參數(shù)變化,旨在探討精簡(jiǎn)方配伍變化后其同類成分的藥物動(dòng)力學(xué)變化行為。
1 材料與方法
1.1 藥物與試劑 補(bǔ)陽還五湯干浸膏(黃芪120 g,當(dāng)歸6 g,赤芍4.5 g,川芎3 g,紅花3 g,桃仁3 g,地龍3 g)和腦健片干浸膏(黃芪30 g,川芎9 g,地龍6 g)均由湖南省中醫(yī)藥研究院中藥所張水寒教授提供,所有藥材質(zhì)量均符合2010年版《中華人民共和國藥典》標(biāo)準(zhǔn)。補(bǔ)陽還五湯按傳統(tǒng)水煎法濃縮干燥后制備成干浸膏,相當(dāng)于原藥材4.5 g/g。腦健片按新工藝制備,其中川芎以揮發(fā)油量為考察指標(biāo),對(duì)川芎粗粉進(jìn)行SFE-CO2萃取,不加夾帶劑,提取1.5 h;地龍以醇浸膏得率及氮含量為指標(biāo),溫浸2次,第1次加5倍量50%乙醇溫浸48 h,第2次加4倍量50%乙醇溫浸48 h;再合并藥渣,與黃芪藥粉一同水煎,所有藥液濃縮干燥后即得干浸膏,相當(dāng)于原藥材4.7 g/g。
阿魏酸對(duì)照品(批號(hào)MUST-12112204)、洋川芎內(nèi)酯A對(duì)照品(批號(hào)MUST-12121202)、藁本內(nèi)酯對(duì)照品(批號(hào)MUST- 12082702),北京盈澤納新化工技術(shù)研究院;乙腈,美國Tedia公司,色譜純;甲醇,美國Tedia公司,色譜純;怡寶純凈水(華潤(rùn)怡寶飲料有限公司),其他試劑均為分析純。
1.2 儀器 Instech自動(dòng)采血系統(tǒng)(Instech Solomon公司),離心濃縮儀(Centri Vap,LABCONCO),Agilent-1260型高效液相色譜儀,配有自動(dòng)進(jìn)樣器,四元梯度泵,在線真空脫氣機(jī),柱溫箱和二極管陣列檢測(cè)器(DAD);超聲波清洗儀(SB-3200D,寧波新其生物科技股份有限公司),分析天平(JA-3003,上海恒平科學(xué)儀器有限公司),Elipse XDB-C18色譜柱(250 mm×4.6 mm,安捷倫公司)。
1.3 動(dòng)物 SPF級(jí)雄性SD大鼠20只,9~10周齡,體質(zhì)量260~300 g,湖南斯萊克景達(dá)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物有限公司,許可證號(hào)SCXK(湘)2011-0003。室溫?zé)o菌喂養(yǎng),自由飲食飲水。
1.4 分組、給藥及處理 建立大鼠實(shí)時(shí)活體采血方法。將SD大鼠麻醉后固定于手術(shù)臺(tái)上,切開頸下靜脈,分離頸靜脈,埋線,待血液充盈時(shí)用眼科剪將頸靜脈剪開一小口,插入特制PU軟管約20 mm深并固定,縫合傷口。灌胃后將插管大鼠與Instech自動(dòng)采血系統(tǒng)連接。將頸靜脈插管的健康SD大鼠分為補(bǔ)陽還五湯組和腦健片組,每組5只。二方均以4倍于人體劑量的原藥材給藥[3],折算成干浸膏量分別為12.04 g/kg體質(zhì)量和9.64 g/kg體質(zhì)量。灌胃前采血作為空白血漿,再分別于5、15、30、45、60、90、120、180、240、300、360、480 min采血0.5 mL,并取上層血漿,-80 ℃冰箱保存?zhèn)溆谩?/p>
1.5 供試品溶液的制備 取藥物血漿100 μL,加0.1 mol/L鹽酸50 μL,混勻后加800 μL乙酸乙酯,渦旋震蕩5 min,8000 r/min離心10 min,取上清液;重復(fù)上述操作,合并上清液,離心濃縮儀揮干溶劑后殘?jiān)?0 μL甲醇復(fù)溶。
1.6 對(duì)照品溶液的制備 分別精密稱量阿魏酸、洋川芎內(nèi)酯A、藁本內(nèi)酯對(duì)照品,用甲醇溶液制成濃度分別為0.125、0.1、2.5 g/L的標(biāo)準(zhǔn)溶液。其中阿魏酸對(duì)照品溶液中含5%乙酸,4 ℃冰箱避光保存?zhèn)溆?,藁本?nèi)酯-20 ℃冰箱避光保存?zhèn)溆谩?/p>
1.7 色譜條件 本研究采用HPLC-DAD法與腦健片體外成分測(cè)定建立的方法[4]一致。色譜條件:Elipse XDB-C18色譜柱(250 mm×4.6 mm,5 ?m),柱溫30 ℃;以0.3%乙酸水(A)和乙腈(C)為流動(dòng)相進(jìn)行梯度洗脫(0~5 min,15% C;5~30 min,15%~31% C;30~32 min,31%~36% C;32~82 min,36%~72% C;82~90 min,72%~95% C),流速1.0 mL/min;檢測(cè)波長(zhǎng)為阿魏酸325 nm、洋川芎內(nèi)酯A 280 nm、藁本內(nèi)酯328 nm。
1.8 數(shù)據(jù)分析 采用DAS2.0軟件,分別獲得阿魏酸、洋川芎內(nèi)酯A和藁本內(nèi)酯3種成分的經(jīng)典藥代動(dòng)力學(xué)參數(shù),參照文獻(xiàn)[5-6]按總量統(tǒng)計(jì)矩(相似度)法計(jì)算藥代動(dòng)力學(xué)總量統(tǒng)計(jì)矩參數(shù),并進(jìn)行比較分析。
2 結(jié)果
系統(tǒng)適用性與專屬性考察
分別取空白血漿,加入阿魏酸、洋川芎內(nèi)酯A、藁本內(nèi)酯標(biāo)準(zhǔn)品溶液的空白血漿,補(bǔ)陽還五湯和腦健片給藥后30 min的藥物血漿樣本,處理后上樣分析。結(jié)果顯示血漿中內(nèi)源性物質(zhì)不干擾測(cè)定,該方法專屬性良好。根據(jù)前期研究結(jié)果,由保留時(shí)間和紫外光譜圖確定1號(hào)峰為阿魏酸,2號(hào)峰為洋川芎內(nèi)酯A,3號(hào)峰為藁本內(nèi)酯[4]。
3 討論
中藥發(fā)揮藥效往往取決于多種藥效成分的協(xié)同作用,講究君臣佐使配伍原則。采用傳統(tǒng)西藥藥代動(dòng)力學(xué)模型對(duì)中藥復(fù)方藥代參數(shù)進(jìn)行分析,發(fā)現(xiàn)同一藥效成分在不同藥效部位、不同藥材及不同配伍復(fù)方中的藥代動(dòng)力學(xué)特征均不盡相同。采用傳統(tǒng)西藥單一成分藥代動(dòng)力學(xué)模型對(duì)中藥多成分在體內(nèi)藥代動(dòng)力學(xué)行為進(jìn)行評(píng)價(jià)存在一定的局限性,不能充分體現(xiàn)補(bǔ)陽還五湯類方整體成分在體內(nèi)的真實(shí)代謝過程。本研究采用總量統(tǒng)計(jì)矩參數(shù)對(duì)經(jīng)典房室模型的藥動(dòng)參數(shù)繼續(xù)深入分析,既能反映總量藥物濃度的動(dòng)力學(xué)行為,又能與單個(gè)成分的統(tǒng)計(jì)矩參數(shù)關(guān)聯(lián),是整合多成分藥物動(dòng)力學(xué)較宜的數(shù)學(xué)處理方法,同時(shí)更能體現(xiàn)出中藥多種化學(xué)成分多靶點(diǎn)、多途徑、多環(huán)節(jié)進(jìn)行整合調(diào)節(jié)的優(yōu)越性。
參考文獻(xiàn)
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