，

(1.信陽(yáng)市羊山新區(qū)農(nóng)業(yè)綜合發(fā)展服務(wù)中心，河南 信陽(yáng) 464000;2.信陽(yáng)農(nóng)林學(xué)院牧醫(yī)工程學(xué)院，河南 信陽(yáng) 464000)

0 引言

仔豬滲出性皮炎又稱(chēng)為“豬油皮病”或“仔豬油性皮脂溢”，多發(fā)生于5～6日齡哺乳仔豬及剛斷奶的仔豬[1]。豬源葡萄球菌是引起該病的主要病原之一， 近年來(lái)，豬滲出性皮炎的危害雖然未達(dá)到嚴(yán)重暴發(fā)的程度，但由于各地區(qū)流行菌株對(duì)藥物敏感性的差異，造成部分豬場(chǎng)防治效果不理想。本研究通過(guò)對(duì)河南南部地區(qū)某疑似發(fā)生仔豬滲出性皮炎豬場(chǎng)的病原菌進(jìn)行分離鑒定、藥物敏感性試驗(yàn)，為該場(chǎng)防治本病提供依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 材料

1.1.1 病料采集

用10%甘油生理鹽水浸潤(rùn)無(wú)菌棉簽采集病豬皮膚流膿結(jié)痂處。

1.1.2 試劑

革蘭氏染色液、Baird-parker 瓊脂培養(yǎng)基、胰酪胨大豆肉湯、葡萄球菌屬微量生化反應(yīng)管TH-16S、革蘭氏陽(yáng)性菌藥敏試紙盒(杭州濱和微生物試劑有限公司)、鹽酸頭孢噻呋注射液(湖南加農(nóng)正和生物技術(shù)有限公司)、維爾康圣力斗包(阿莫西林可溶性粉)、 阿莫西林硫酸黏菌素注射液 (北京中農(nóng)大動(dòng)物保健品集團(tuán)湘潭獸藥廠)、注射用青霉素鈉(上海公誼獸藥廠)、注射用硫酸鏈霉素(華北制藥集團(tuán)動(dòng)物保健品有限公司)、鹽酸林可霉素注射液(江西雙實(shí)藥業(yè)有限公司)、鹽酸卡那霉素注射液(浙江匯特動(dòng)物藥業(yè)有限公司)7種商品獸藥。

1.2 方法

1.2.1 培養(yǎng)基的制備

按照商品培養(yǎng)基的說(shuō)明進(jìn)行制備。

1.2.2 細(xì)菌分離培養(yǎng)

將病料接種于已配制好的胰酪胨大豆肉湯，37℃恒溫培養(yǎng)箱培養(yǎng)18～24 h，待試管肉湯變渾濁，將培養(yǎng)好的肉湯均勻接種于Baird-parker瓊脂培養(yǎng)基，37℃恒溫培養(yǎng)18～24 h。培養(yǎng)基表面菌落多為白色光滑隆起小菌落，約直徑2 mm。用接種環(huán)挑取單菌落進(jìn)行涂片觀察。

1.2.3 形態(tài)學(xué)觀察

挑取純培養(yǎng)后的單菌落革蘭氏染色，顯微鏡鏡檢，觀察其形態(tài)學(xué)特征。

1.2.4 生理生化試驗(yàn)

分離純化過(guò)的細(xì)菌進(jìn)行尿素、蔗糖、精氨酸雙水解酶、木糖、乳糖、甘糖、木醇、麥芽糖、蕈糖、甘醇、N-乙酰葡胺、硝酸鹽、蜜二糖、果糖、葡磷胨水、山梨醇16項(xiàng)生化指標(biāo)測(cè)定，并與TH-16S編碼冊(cè)對(duì)照記錄結(jié)果。

1.2.5 藥敏試驗(yàn)

藥敏試驗(yàn)采用藥敏紙片擴(kuò)散法分別以標(biāo)準(zhǔn)藥敏片苯唑西林、青霉素G、紅霉素、大觀霉素、克拉霉素、萬(wàn)古霉素、克林霉素、氯霉素、四環(huán)素、米諾環(huán)素、諾氟沙星、環(huán)丙沙星、左氟沙星、多粘菌素B、復(fù)方新諾明、呋喃妥因和自制商品獸藥藥敏片進(jìn)行藥敏試驗(yàn)，記錄抑菌圈大小進(jìn)行耐藥性分析。

2 結(jié)果與分析

2.1 形態(tài)學(xué)結(jié)果

在1 000倍顯微鏡下觀察分離菌形態(tài)呈圓形或卵圓形，葡萄串狀排列，革蘭氏染色為陽(yáng)性菌， 初步診斷為表皮葡萄球菌，如圖1。

圖1 革蘭氏染色后的葡萄球菌(1000x)

2.2 生理生化試驗(yàn)

將疑似菌株進(jìn)行生化試驗(yàn)，具體如表1。

表1 葡萄球菌生理生化試驗(yàn)鑒定結(jié)果

鑒定值331320,檢索葡萄球菌屬細(xì)菌生化鑒定編碼冊(cè)確定鑒定結(jié)果為表皮葡萄球菌

2.3 藥敏試驗(yàn)

2.3.1 標(biāo)準(zhǔn)藥敏片藥敏試驗(yàn)結(jié)果

表2 標(biāo)準(zhǔn)藥敏片藥敏試驗(yàn)結(jié)果

注：S表示敏感;I表示中敏;R表示耐藥

16種抗生素藥敏試驗(yàn)結(jié)果表明豬源葡萄球菌對(duì)苯唑西林、大觀霉素、萬(wàn)古霉素、左氟沙星、呋喃妥因敏感，對(duì)諾氟沙星、環(huán)丙沙星中敏，對(duì)其他抗生素都產(chǎn)生了不同程度的耐藥性。

2.3.2 自制商品獸藥藥敏片藥敏試驗(yàn)結(jié)果

表3 自制商品獸藥藥敏片藥敏試驗(yàn)結(jié)果

注：抑菌圈直徑≧17mm為高敏S，在12～16mm內(nèi)為中敏I，≦11mm為耐藥R[2]

試驗(yàn)結(jié)果表明，分離菌對(duì)市場(chǎng)上常用獸藥品種也部分產(chǎn)生了一定的耐藥性。

3 討論與結(jié)論

(1)從臨床癥狀，剖檢病理變化及實(shí)驗(yàn)室診斷結(jié)果，確定引起該場(chǎng)發(fā)生仔豬滲出性皮炎病的病原體為豬源表皮葡萄球菌。

(2)從藥敏試驗(yàn)結(jié)果分析，分離菌對(duì)標(biāo)準(zhǔn)藥敏片苯唑西林、大觀霉素、萬(wàn)古霉素、左氟沙星、呋喃妥因敏感，對(duì)諾氟沙星、環(huán)丙沙星中敏，對(duì)其他抗生素都產(chǎn)生了不同程度的耐藥性，同時(shí)對(duì)市場(chǎng)上在售的部分商品獸藥品種也產(chǎn)生了一定的耐藥性，這反應(yīng)出臨床上由于細(xì)菌的耐藥性問(wèn)題的存在，是造成豬場(chǎng)防治該病比較困難的原因之一。

(3)由于葡萄球菌是一種常在菌，廣泛存在于自然界和豬體的表面，要徹底根除本病幾乎不可能。為了控制本病的發(fā)生，首先要切斷主要的傳染源，對(duì)病豬不但要早發(fā)現(xiàn)、早隔離和及時(shí)治療，而且對(duì)病豬污染的環(huán)境和用具進(jìn)行徹底消毒，同時(shí)對(duì)與病豬有接觸的豬要進(jìn)行預(yù)防性治療。當(dāng)發(fā)現(xiàn)皮膚有損傷時(shí)，應(yīng)及時(shí)用碘酊或酒精等消毒液進(jìn)行處置，防止感染的發(fā)生。對(duì)圈舍及運(yùn)動(dòng)場(chǎng)地等也應(yīng)經(jīng)常清掃，保持清潔，定期消毒，盡量減少環(huán)境中殘存的致病菌。為保證臨床治療效果，建議豬場(chǎng)按照藥敏結(jié)果針對(duì)性用藥，減少日常容易產(chǎn)生耐藥性的不合理用藥習(xí)慣，例如長(zhǎng)期依賴(lài)某幾種抗生素、不注意藥物的配伍。