★ 肖飛 彭紅 金鑫 張婷（江西中醫(yī)藥大學藥學院 南昌 330004）

c-Met或稱HGFR，是一種由c-Met原癌基因（主要存在于干細胞、祖細胞）編碼的蛋白產(chǎn)物，它是一類具有高度親和性的受體酪氨酸激酶，是肝細胞生長因子跨膜受體，具有酪氨酸激酶活性屬于RON亞族［1］。c-Met是由α鏈和β鏈相連而形成的異二聚體［2］，主要表達于上皮細胞，也可見于內(nèi)皮細胞、肝細胞、神經(jīng)細胞及造血細胞，在胚胎發(fā)育和創(chuàng)傷愈合中發(fā)揮著重要作用。肝細胞生長因子（HGF）是由間質(zhì)細胞分泌的c-Met受體唯一配體。c-Met受體在細胞的代謝、分化以及調(diào)亡的信號轉(zhuǎn)導過程中起著重要作用，其與配體結(jié)合，可激活下游5條信號轉(zhuǎn)導通路［3］，如RAS/RAF、磷脂酰肌醇3激酶（PI3K）、信號轉(zhuǎn)導與轉(zhuǎn)錄激活子（STAT）、Notch以及Beta-catenin，促進細胞有絲分裂、形態(tài)發(fā)生等生物學反應(yīng)，從而參與胚胎發(fā)育、組織損傷修復(fù)、肝再生以及腫瘤的侵襲和轉(zhuǎn)移。c-Met信號通道和癌細胞耐藥性相關(guān)［4］，使得多靶點激酶抑制劑的開發(fā)獲得理論支撐。

c-Met表達激活是通過增加factor-1α（HIF-1α）缺氧誘導所致缺氧和導致缺氧腫瘤的侵襲。HIF-1α減少c-Met的表達可以由VEGF抑制劑造成血管修剪而觸發(fā)，對遷徙、侵入性腫瘤細胞和通過轉(zhuǎn)移傾向性擴散具有選擇性［5］。c-Met激酶能夠促進腫瘤細胞的增殖，調(diào)節(jié)腫瘤細胞的遷移，增強腫瘤細胞的侵襲能力并引發(fā)腫瘤新生血管的形成，以c-Met為靶標可相對容易地實現(xiàn)對多條通路的同時干擾。因而，c-Met是抗腫瘤轉(zhuǎn)移治療的一個極有希望的靶點，正成為抗腫瘤藥物研究的熱點之一。

1 小分子c-Met抑制劑類藥物抗腫瘤作用機制：c-Met信號通路

c-Met與肝細胞生長因子細胞外域特異性結(jié)合誘導c-Met發(fā)生聚合從而進一步誘導結(jié)合域的Tyr1234/1235位點發(fā)生磷酸化反應(yīng)，刺激末端結(jié)合域Tyr1349/1356磷酸化以收集細胞間質(zhì)因子。募集到的細胞因子如PLC、GAB1等吸引SHP2/CRKL等對接分子，最終達到激活JAK/STAT等調(diào)控細胞生長、增殖、遷移、存活和凋亡等信號通路［6］，調(diào)節(jié)過程見下圖1［7］。在人體正常生理條件下，人體細胞表面會通過泛素介導、胞內(nèi)清除等機制調(diào)節(jié)，使得人體發(fā)揮正常生理功能達到避免過度表達的目的［8］?，F(xiàn)代臨床表明，c-Met激酶的異?；罨０殡S著惡性腫瘤的發(fā)生，引起的后果不僅是腫瘤的發(fā)生、轉(zhuǎn)移及惡化，還與抗腫瘤藥物治療的耐藥性息息相關(guān)。

圖1 c-Met信號通路的作用機制

2 各種小分子c-Met抑制劑類抗腫瘤藥物

小分子c-Met抑制劑類藥物通過作用于c-Met受體達到抑制c-Met結(jié)合域磷酸化，從而阻止酪氨酸激酶活化達到抑制下游信號傳導產(chǎn)生抗腫瘤作用。伴隨著小分子c-Met抑制劑作用機制的不斷探究，隨之產(chǎn)生的抑制劑類藥物較傳統(tǒng)抗腫瘤藥物具有的毒副作用性低，療效功能更加確切等優(yōu)點，支撐著小分子c-Met抑制劑類抗腫瘤藥物的不斷發(fā)展。

2.1 Crizotinib Crizotinib（PF-02341066） 是 一種由輝瑞公司研發(fā)作用于c-Met和ALK雙靶點的c-Met抑制劑類抗腫瘤藥物。Christensen J G等［9］進行體外試驗研究發(fā)現(xiàn)Crizotinib作用mIMCD3小鼠以及MDCK犬上皮細胞，其效用對c-Met磷酸化的作用結(jié)果極為相似，IC50分別為5nM和20nM。Zou H Y等［10］進行體內(nèi)實驗發(fā)現(xiàn)Crizotinib對U87MG惡性膠質(zhì)瘤或PC-3前列腺癌移植瘤模型進行50mg/（kg·d）的劑量給藥其結(jié)果為腫瘤組織生長幾乎完全被抑制。目前該藥于2016年3月11日獲得FDA批準應(yīng)用于ROS-1突變型非小細胞肺癌，并成為首個應(yīng)用于該適應(yīng)癥的孤兒藥。

2.2 Altiratinib Altiratinib（DCC-2701）是一新型作用于c-MET、TIE-2及VEGFR多靶點的c-Met抑制劑類抗腫瘤藥物，Kwon Y等［11］進行體內(nèi)外試驗研究發(fā)現(xiàn)Altiratinib完全抑制HGF結(jié)合域磷酸化，結(jié)果顯著抑制惡性膠質(zhì)瘤細胞。在多個異種移植瘤小鼠模型中應(yīng)用Altiratinib，結(jié)果腫瘤體積顯著下降。Altiratinib通過多靶點信號通路作用能顯著抑制腫瘤生長，侵襲性血管再生和膠質(zhì)母細胞瘤。Altiratinib作為新型小分子c-Met抑制劑能夠起到延長膠質(zhì)母細胞瘤患者的生存期從而改善患者生存質(zhì)量，提高患者后續(xù)生存能力。

2.3 AMG-337 AMG-337是一種具有高度選擇性的ATP競爭性c-Met激酶抑制劑類抗腫瘤藥物，其 IC50＜5nM。Hughes P E 等［12］研究發(fā)現(xiàn)，AMG-337在與400多個Met激酶競爭結(jié)合試驗中表現(xiàn)出高度選擇性，在細胞實驗AMG-337對Met激酶結(jié)合域的磷酸化抑制達到IC50＜10nM。展現(xiàn)出其高效的特性。在c-Met介導相關(guān)的腫瘤模型中，AMG-337的抗腫瘤機制在口服給藥方式下進行的放大胃癌異種移植模型其藥效學調(diào)控機制表現(xiàn)為一致，展現(xiàn)出良好的應(yīng)用前景，該小分子化合物值得繼續(xù)研究以期取得良好的臨床治療效果。

2.4 BSM-794833 BMS-794833是作用于Met/VEGFR2激酶的高效ATP競爭性抑制劑類抗腫瘤藥物，IC50值為1.7/15nM。Fargnoli J等［13］的研究表明，BMS-794833表達出對各種c-Met介導的磷酸化及細胞遷移的下游通路的抑制作用。而且在多重腫瘤模型的相關(guān)抑制試驗顯示出在有效的劑量水平下，BMS-794833展現(xiàn)出低毒性特征，這為該抑制劑的后續(xù)臨床開發(fā)展現(xiàn)出良好的前景。

2.5 Glesatinib hydrochloride Glesatinib hydrochloride是一類作用于c-Met和Axl激酶受體的小分子抑制劑類抗腫瘤藥物，據(jù)John Nemunaitis等［14］的研究可知該化合物口服生物利用率高，在II期試驗中NSCLC患者服用Glesatinib可以明顯影響腫瘤細胞生長，包括胃食管癌癥以及其他實體瘤，并且與c-Met受體結(jié)合后能有機的抑制抗藥性的產(chǎn)生，針對這一特性Mirati公司相信Glesatinib與表皮生長因子受體抑制劑結(jié)合能夠治療產(chǎn)生抗藥性的病人。

2.6 INCB28060 INCB28060是一種口服新型的ATP競爭性抑制劑類抗腫瘤藥物。INCB28060具有高效價，耐受性好等優(yōu)點［15］，對c-Met激酶受體的選擇性比其它大部分人源激酶高出10000多倍，INCB28060通過抑制c-Met磷酸化達到抑制c-Met介導的信號通路的信號傳導。從而抑制c-Met介導相關(guān)的腫瘤細胞增殖和存活?？诜┝肯翴NCB28060在小鼠腫瘤模型的效果顯著，通過激活c-Met調(diào)節(jié)的表皮生長因子EGFR受體實現(xiàn)完整腫瘤抑制作用，并且耐受良好。

2.7 LY2801653 LY2801653是一種II型口服相容性ATP競爭性慢抑制劑類抗腫瘤藥物，Ki=2nM，IC50為35.2±6.9nM。藥效的停留時間為0.00132min，t1/2=525min。LY2801653體外試驗顯示該抑制劑對Met信號介導的通路作用體現(xiàn)在相傳導的細胞散射和細胞增殖［16］。對比未表達過c-Met信號的細胞系來說，Met基因擴增導致MKN45，Hs746T和H1993等信號過表達的細胞系，LY2801653具有更加有效的抗腫瘤細胞增殖作用。LY2801653能夠?qū)?3種突變型Met具有活性作用［17］。MKNK1/2，MST1R，F(xiàn)LT3，AXL，MERTK， TEK，ROS1，DDR1/2 等 酪氨酸激酶受體仍然會受到LY2801653的作用。在肝細胞生長因子刺激下的H460細胞中，LY2801653通過抑制Met自動磷酸化，從而實現(xiàn)對細胞生長、增殖、遷移、存活和凋亡等信號通路的調(diào)控最終實現(xiàn)抗腫瘤細胞增殖的目的。

2.8 MK-2461 MK-2461是一種作用于c-Met（M1250T/Y1230C/Y1230H/N1100/Y1230C），F(xiàn)LT1，F(xiàn)LT3，F(xiàn)GFR等靶點的多靶點競爭性抑制劑類抗腫瘤藥物［18］。IC50為 0.4～2.5nM，對 Ron及Flt1作用效果稍弱；相比較于FGFR1，F(xiàn)GFR2，F(xiàn)GFR3，PDGFRβ，KDR，F(xiàn)lt3，F(xiàn)lt4，TrkA 和TrkB等受體，作用于c-Met系列靶點的選擇性能高，且高 8～30倍［19］。MK-2461能有效抑制 FGFR1，F(xiàn)GFR2，F(xiàn)GFR3，KDR，TrkA，TrkB和 Flt4，IC50分別為65nM，39nM，50nM，44nM，46nM，61nM和78nM。與野生型c-Met，比較，MK-2461對原癌基因有更強的抑制作用。MK-2461與磷酸化c-Met結(jié)合更強。MK-2461能夠有效的抑制由ATP誘導的c-Met自磷酸化而產(chǎn)生在羧基端結(jié)合域。與此相反［20］MK-2461在 Kato III細胞和H1703細胞中抑制FGFR2（Y653/Y654）以及對PDGFR-α（Y849）的激活環(huán)磷酸活化，IC50均＜0.3μM。MK-2461在4MBr-5細胞中抑制肝細胞生長因子誘導的絲裂原和在HPAF II細胞中肝細胞生長因子誘導的遷移，IC50=404nM，以及由肝細胞生長因子誘導的MDCK細胞分支管型的形成。此外，MK-2461還能有效抑制由Tpr-Met或Tpr-Met（y362c）突變的32D細胞中IL-3非依賴性增殖，IC50=100nM。MK-2461能明顯對廣譜腫瘤細胞系增殖產(chǎn)生抑制，特別是針對高表達的MET和FGFR2的癌細胞，口服MK-2461劑量為10mg/kg、50mg/kg、100mg/kg，每日兩次或200mg/kg/d?？诜幚砜捎行б种艷TL-16移植小鼠模型中腫瘤生長，抑制率分別為62%，77%，75%，和90%。區(qū)別于其他ATP競爭性抑制劑，被激活的c-Met激酶受體能夠與MK-2461優(yōu)先結(jié)合，這一優(yōu)勢是目前已知的小分子酪氨酸激酶抑制劑所沒有的。

2.9 MK-8033 MK-8033是作用于c-Met/Ron雙靶點的ATP競爭性抑制劑類抗腫瘤藥物，對野生型c-Met激酶受體的IC50=1nM，對c-Met家族系列的N1100Y的IC50=2.0nM。與未磷酸化的對應(yīng)物（Kd=10.4nM）相比，MK-8033比磷酸化的c-Met激酶結(jié)合域（Kd=3.2nM）能更緊密地結(jié)合3倍。值得注意的是［21］，除了其他c-Met激活突變體N1100Y和M1250T外，MK-8033還能有效抑制三種致癌c-Met激活環(huán)突變體：Y1230C，Y1230H和Y1235D的激酶活性（在50μMATP下IC50范圍為0.6nM～1nM）。MK-8033對GTL-16的增殖能產(chǎn)生明顯抑制，IC50為582±30nM。相比之下，不含有基礎(chǔ)c-Met激活的HCT116細胞系不被MK-8033抑 制（IC50＞10000nM）。MK-8033對 高 c-Met表達的EBC-1和H1993細胞放射敏感，但不表達低c-Met表達的細胞系A(chǔ)549和H460。然而將A549和H460細胞在照射30min后增加c-Met蛋白的表達。隨后通過使用MK-8033進行第二次輻射劑量，靶向這種上調(diào)的c-Met降低了A549和H460細胞的克隆生存，MK-8033降低了A549細胞中輻射誘導的磷酸化（活化）c-Met的水平［22］。MK-8033口服給藥于GTL-16腫瘤異種移植小鼠。給藥1h后將小鼠安樂死，并在腫瘤組織測試p-Met（Y1349），并在血漿中測試MK-8033濃度。在100mg/kg時，實現(xiàn)了對p-Met（Y1349）基本上完全的抑制。從血漿MK-8033水平和Met pY1349之間的關(guān)系推導出體內(nèi)IC50=1.3μM。

2.10 AZD-6094 AZD-6094是一種口服生物有效的c-Met受體酪氨酸激酶抑制劑類藥物，其IC50為5nM，具有潛在的抗腫瘤活性［23］。AZD-6094在小鼠中表現(xiàn)出有利的藥代動力學特性，在無胸腺裸鼠的神經(jīng)膠質(zhì)瘤異種移植模型中具有良好的抗腫瘤活性［24］。AZD-6094以ATP競爭性方式選擇性的結(jié)合并抑制c-Met的活化，通過破壞c-Met信號轉(zhuǎn)導途徑來實現(xiàn)c-Met基因過表達介導的腫瘤細胞生長抑制［25-26］。c-Met基因編碼的肝細胞生長因子受體酪氨酸激酶，并在腫瘤細胞增殖，存活，侵襲和轉(zhuǎn)移以及腫瘤血管發(fā)生中起重要作用，這種蛋白質(zhì)在多種癌癥中過表達或突變。

2.11 其他c-Met小分子抑制劑類抗腫瘤藥物 ARQ-197是第一個非ATP競爭性的c-Met抑制劑類藥物，在無細胞試驗中Ki=0.355μM，ARQ-197在體外阻止HGF/c-Met誘導的細胞反應(yīng)［27］。ARQ-197還能抑制A549，DBTRG和NCI-H441細胞的增殖，IC50分別為 0.38μM、0.45μM、0.29μM。ARQ-197阻斷c-Met自磷酸化以及對下游c-Met信號傳導途徑的阻斷ARQ-197并且通過延伸，抑制c-Met活性，從而導致下游c-Met效應(yīng)子的抑制［28］；PHA665752是一種有效的、選擇性的ATP競爭性小分子c-Met抑制劑類抗腫瘤藥物，IC50為9nM，主要用于治療胃癌和肺癌［29］。

3 小結(jié)

c-Met參與介導多種生理與病理過程，c-Met的過表達與腫瘤的發(fā)生、侵襲、轉(zhuǎn)移以及耐藥性密切相關(guān)。c-Met目前作為一個潛在的腫瘤治療靶點，其抑制劑類藥物的研究現(xiàn)已成抗腫瘤藥物研究發(fā)展的熱點領(lǐng)域。而小分子c-Met抑制劑類抗腫瘤藥物以其作用機制清晰，合成簡便易于修飾等優(yōu)點成為是最具潛力的抗腫瘤藥物。隨著HGF/c-Met信號轉(zhuǎn)導路徑及以及腫瘤作用發(fā)生機制研究的不斷深入，相信將會有更多的小分子c-Met抑制劑類藥物被開發(fā)出來，成為對抗腫瘤的有效藥物，為癌癥患者對抗病魔注入強大的信心。