劉影哲,溫宇婷,張獻(xiàn),王漢良,周亞濱,潘祥賓

(1.黑龍江中醫(yī)藥大學(xué)附屬第一醫(yī)院，黑龍江 哈爾濱 150040;2.黑龍江中醫(yī)藥大學(xué)，黑龍江 哈爾濱 150040;3.黑龍江中醫(yī)藥大學(xué)附屬第二醫(yī)院，黑龍江 哈爾濱 150001)

動(dòng)脈粥樣硬化是心腦血管疾病的主要病理改變,它的形成與脂質(zhì)、血栓、結(jié)締組織等沉積于血管密切相關(guān)[1-2]，而脂質(zhì)代謝的異常是動(dòng)脈粥樣硬化發(fā)生的重要因素[3-5]，內(nèi)皮細(xì)胞因受損引發(fā)的炎癥反應(yīng)也同樣與之有著密切關(guān)系[6]。前期研究表明[7-8]，養(yǎng)心顆?？纱龠M(jìn)血液循環(huán)、降低血液粘稠度、降低炎癥反應(yīng)等，進(jìn)而起到調(diào)脂、抗炎的作用。本實(shí)驗(yàn)系從Rho/Rho激酶信號(hào)通路入手，研究養(yǎng)心顆粒對(duì)信號(hào)通路中LDL-C、TC、ET-1、TNF-α含量的影響。

1 材料與方法

1.1 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物

健康家兔32只，雄性，平均體質(zhì)量2.35 kg，來源于黑龍江中醫(yī)藥大學(xué)動(dòng)物實(shí)驗(yàn)評(píng)價(jià)中心，在通風(fēng)、溫度(20～23℃)、濕度適宜的實(shí)驗(yàn)室環(huán)境里分籠喂養(yǎng)。動(dòng)物合格證號(hào)SYXK：(黑)2013-012。

1.2 實(shí)驗(yàn)藥物

養(yǎng)心顆粒(茯苓、炙黃芪、茯神、當(dāng)歸等)由黑龍江中醫(yī)藥大學(xué)附屬一院制劑室制備；法舒地爾(浙江京新藥業(yè)股份有限公司，批號(hào):0908221)。

1.3 儀器與試劑

2.5 mm×15 mm PTCA球囊(日本TERUMO公司)；LDL-C、TC 、ET-1、TNF-α試劑盒(美國(guó)R&D生物技術(shù)公司)；中國(guó)斑點(diǎn)蝰蛇毒(Chinese Russell’s viper Venom,CRVV,廣州蛇毒研究所)；組胺及Ad5-p53重組載體。

2 實(shí)驗(yàn)方法

2.1 建立模型

將32只家兔隨機(jī)分為空白對(duì)照組、模型對(duì)照組、養(yǎng)心顆粒組、法舒地爾組?？瞻讓?duì)照組用普通飼料喂養(yǎng)，喂養(yǎng)8周，其余組采用高脂飼料喂養(yǎng)后給予球囊損傷頸總動(dòng)脈并予P53基因轉(zhuǎn)染建立易損斑塊模型。

2.2 給藥方法

養(yǎng)心顆粒組及法舒地爾組分別給予0.643 g/kg、5 mg/kg灌服，連續(xù)灌服2周，等體積的蒸餾水灌服空白對(duì)照組及模型對(duì)照組。

2.3 標(biāo)本采集與檢測(cè)

家兔耳緣靜脈取血，4 000 r/min進(jìn)行離心5 min，取上層離心血清，根據(jù)試劑盒檢測(cè)方法檢測(cè)血清LDL-C、TC、ET-1、TNF-α含量。

2.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)處理

3 結(jié)果

3.1 對(duì)血脂LDL-C 、TC指標(biāo)的影響

由表1可見，與模型組比較，養(yǎng)心顆粒組與法舒地爾組血清LDL-C、TC含量下降，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)；養(yǎng)心顆粒組與法舒地爾組比較，血清中LDL-C、TC含量差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)。

表1 各組LDL-C、TC比較

注：與空白組比較，△P<0.05；與模型組比較，*P<0.05

3.2 對(duì)血清ET-1、TNF-α指標(biāo)的影響

由表2可見，與模型組比較，養(yǎng)心顆粒組和法舒地爾組血清中ET-1、TNF-α含量下降，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)；養(yǎng)心顆粒組與法舒地爾組比較，血清中ET-1、TNF-α含量差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)。

表2 各組ET-1、TNF-α比較

注：與空白組比較，△P<0.05；與模型組比較，*P<0.05

4 討論

Rho/Rho激酶信號(hào)通路是體內(nèi)普遍存在的一條信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)通路[9-11],它參與細(xì)胞黏附、遷移、平滑肌細(xì)胞收縮及胞質(zhì)分裂等的調(diào)節(jié),而動(dòng)脈粥樣硬化的形成過程也伴有這一系列細(xì)胞功能的參與。有研究表明，抑制Rho/Rho激酶信號(hào)通路可保護(hù)血管內(nèi)皮[12-13]，其對(duì)內(nèi)皮細(xì)胞(EC)骨架結(jié)構(gòu)產(chǎn)生影響,導(dǎo)致EC收縮,單層通透性增加,EC屏障功能受損等[14-16]，而炎癥介質(zhì)如內(nèi)皮素-1、腫瘤壞死因子均能激活Rho/Rho激酶。所以我們認(rèn)為動(dòng)脈硬化斑塊的形成與Rho/Rho激酶信號(hào)通路的激活密切相關(guān)。

動(dòng)脈粥樣硬化是動(dòng)脈壁受損引發(fā)的一種慢性炎癥性疾病，它的發(fā)生始終伴有炎癥反應(yīng)的參與[17-19]，并與脂質(zhì)的異常沉積密切相關(guān)，研究表明[20]，主動(dòng)脈TC含量與全身炎癥反應(yīng)成正相關(guān)。在高血脂刺激下，動(dòng)脈內(nèi)皮細(xì)胞發(fā)生損傷及功能異常，脂質(zhì)在內(nèi)皮下沉積，逐漸出現(xiàn)炎性細(xì)胞浸潤(rùn)，巨噬細(xì)胞介導(dǎo)的炎癥反應(yīng)，可使LDL-C在受損的內(nèi)皮管壁內(nèi)膜下沉積，氧化修飾成ox LDL-C，分泌大量炎性因子，使清道夫受體吞噬ox LDL-C，轉(zhuǎn)變泡沫細(xì)胞，參與動(dòng)脈粥樣硬化的形成和發(fā)展[21-22]。雖然動(dòng)脈粥樣硬化的發(fā)病機(jī)制尚不確切[23-24]，但已明確TNF-α參與炎癥反應(yīng)[25-26]，TNF-α可降解細(xì)胞基質(zhì)，降低纖維帽功能結(jié)構(gòu)，使斑塊的穩(wěn)定性變差[27-28]。當(dāng)TNF-α過度表達(dá)時(shí)，會(huì)對(duì)血管內(nèi)皮細(xì)胞造成損害，增加血管的通透性，促使血管內(nèi)斑塊的形成。又有研究發(fā)現(xiàn)[29], 在不同病因引起的全身炎癥反應(yīng)綜合征病人血漿中ET-1含量會(huì)有不同程度增高，病理狀態(tài)下機(jī)體ET-1異常表達(dá)、釋放，出現(xiàn)紊亂，也參與了動(dòng)脈粥樣硬化病灶形成的全過程[30]。當(dāng)體內(nèi)LDL-C的含量升高和炎癥反應(yīng)發(fā)生時(shí)均能導(dǎo)致動(dòng)脈粥樣硬化斑塊不穩(wěn)定[31]，因此抑制體內(nèi)炎癥反應(yīng)和降低LDL-C含量可以有效控制疾病的發(fā)生。脂質(zhì)代謝異常和炎癥反應(yīng)時(shí)，很可能會(huì)激活Rho/Rho激酶信號(hào)通路，進(jìn)而引發(fā)動(dòng)脈粥樣硬化的發(fā)生。通過實(shí)驗(yàn)研究表明，養(yǎng)心顆?？山档鸵讚p斑塊Rho/Rho激酶信號(hào)通路血清中LDL-C、TC 、ET-1、TNF-α的含量，可能是通過其調(diào)節(jié)脂質(zhì)代謝，抑制炎癥反應(yīng)，從而抑制Rho/Rho激酶信號(hào)通路有關(guān)，為動(dòng)脈粥樣硬化的治療提供了更多的線索。