昝春蘭,湯海青,歐昌榮,*,李亞敏,張夢思,蘇文華

(1.寧波大學(xué)食品科學(xué)與工程系,浙江寧波 315211; 2.浙江醫(yī)藥高等專科學(xué)校食品學(xué)院,浙江寧波 315100)

微生物是造成食品腐敗的主要因素,水產(chǎn)品因其較高的水分和蛋白質(zhì)含量更易腐敗。新鮮水產(chǎn)品中棲息的微生物復(fù)雜多樣,主要是一些革蘭氏陰性桿菌,如希瓦氏菌(Shewanellasp.)、弧菌(Vibriosp.)、假單胞菌(Pseudomonassp.)、不動桿菌(Acinetobactersp.)、發(fā)光桿菌(Photobacteriumsp.)、莫拉氏菌(Moraxellasp.)和黃桿菌(Flavobacteriumsp.)[1],但其中只有少數(shù)微生物能夠適應(yīng)后續(xù)貯藏環(huán)境,并快速生長繁殖而逐漸成為優(yōu)勢菌群,占據(jù)主導(dǎo)地位,這些少數(shù)微生物即特定腐敗菌(Specific spoilage organisms)[2]。腐敗希瓦氏菌是大多數(shù)水產(chǎn)品中的優(yōu)勢腐敗菌,特別是在有氧冷凍或冷凍狀態(tài)下[3]。副溶血性弧菌是海產(chǎn)品中的主要致病菌。金黃色葡萄球菌和大腸桿菌是自然界中分布最廣泛的微生物,在水產(chǎn)品加工過程中最易繁殖[3-4]。過去常用化學(xué)防腐劑來消除或減少微生物的影響,但是研究發(fā)現(xiàn),使用化學(xué)防腐劑對食品或環(huán)境均有不利的影響,近年來,隨著“綠色”消費理念深入人心,綠色、天然抑菌劑尤其是植物精油受到廣泛關(guān)注[5]。

植物精油,亦稱植物揮發(fā)油,是從芳香植物中提取的具有揮發(fā)性和濃郁香味的脂溶性天然化合物[6]。近年來,由于植物精油具有高效抗菌作用,被用于水產(chǎn)品中致病菌和腐敗菌的控制,如紅鼓魚(Sciaenopsocellatus)、金頭鯛(Sparusaurata)、扁鲹(Pomatomussaltatrix)和劍魚(Xiphiasgladius)等[7]。桉葉精油是從桃金娘科植物藍桉或其同屬其他植物的葉和嫩枝中提取而來的揮發(fā)油,其主要化學(xué)成分為小分子的萜類物質(zhì),且多為極性較弱或無極性的小分子物質(zhì)[8]。大量的研究表明,桉葉精油對細菌、真菌等均有不同程度的抑制作用,且被廣泛應(yīng)用于食品、醫(yī)藥、化工等各個行業(yè),具有很大的開發(fā)前景和應(yīng)用價值[9]。Hao Lu等[10]研究發(fā)現(xiàn),桉葉精油對假單胞菌屬具有較強的抑制作用。岳淑麗等[11]發(fā)現(xiàn),桉葉精油對真菌和霉菌均有一定的抑制效果。但是有關(guān)桉葉精油對水產(chǎn)品常見微生物的抑菌效果及抑菌機理等方面的研究鮮有報道。

本實驗通過濾紙片法和倍比稀釋法,研究桉葉精油對水產(chǎn)品中4種微生物(大腸桿菌、金黃色葡萄球菌、腐敗希瓦氏菌和副溶血性弧菌)的抑菌活性,進一步以腐敗希瓦氏菌和金黃色葡萄球菌為實驗對象,通過掃描電鏡、透射電鏡、電導(dǎo)率、核酸含量、細胞內(nèi)ATP含量分析植物精油的抑菌機理,旨在為桉葉精油更好地運用于水產(chǎn)品行業(yè)提供新的理論依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 材料與儀器

大腸桿菌(Escherichiacoli)、金黃色葡萄球菌(Staphylococcusaureus)、腐敗希瓦氏菌(Shewanellaputrefaciens)、副溶血性弧菌(Vibrioparahaemolyticus) 寧波大學(xué)海洋學(xué)院微生物實驗室提供;桉葉精油(純度為82.3%)、丁香精油(純度為85.3%)、薄荷精油(純度為98.2%) 江西鑫森天然植物油有限公司;茶樹精油(純度為100%) 福州美樂蓮生物科技有限公司;60 g/L氯化鈉蛋白胨水 青島海博生物技術(shù)有限公司;LB肉湯、LB瓊脂、吐溫-80、PBS緩沖液、50%戊二醛、丙酮等試劑 均為分析純,國藥集團化學(xué)試劑有限公司;鋨酸、環(huán)氧丙烷、環(huán)氧樹脂 SPI-Chem公司;ATP含量測定試劑盒 南京建成生物工程研究所。

MDF-U548D-C醫(yī)用低溫箱 大連三洋冷鏈有限公司;LDZX-30KBS型立式壓力蒸汽滅菌鍋 上海申安醫(yī)療器械廠;BCD-201ED冰箱 海爾集團;H1850冷凍離心機 湖南湘儀實驗室儀器開發(fā)有限公司;UV-5200紫外-可見分光光度計 上海元析儀器有限公司;20 nm E-1010真空離子濺射鍍金膜機、S-3400N掃描電子顯微鏡、JEM-1230透射電子顯微鏡 日本日立公司;Infinite 200酶標(biāo)儀 瑞士TECAN公司。

1.2 實驗方法

1.2.1 菌懸液的制備 取甘油保藏的大腸桿菌、金黃色葡萄球菌和腐敗希瓦氏菌,均在LB肉湯中于37 ℃、150 r/min條件下活化24 h,吸取1 mL活化的菌懸液,在100 mL LB肉湯中,于37 ℃、150 r/min條件下擴大培養(yǎng)24 h;取副溶血性弧菌,在60 g/L氯化鈉蛋白胨水中,于30 ℃、150 r/min條件下,活化及擴大培養(yǎng)24 h;用平板計數(shù)法測定最終菌懸液濃度為107cfu/mL,備用。

1.2.2 抑菌圈的測定 參考Bektas Tepe[12]的方法并略作修改,采用濾紙片法測定抑菌圈大小。吸取100 μL菌液,均勻涂布于相應(yīng)菌種的培養(yǎng)基表面。其中大腸桿菌、腐敗希瓦氏菌和金黃色葡萄球菌所需培養(yǎng)基為LB瓊脂,副溶血性弧菌所需的培養(yǎng)基為添加有瓊脂的60 g/L氯化鈉蛋白胨水。無菌鑷子夾取已干燥的濾紙片(直徑約6 mm)置于培養(yǎng)基中央,取5 μL植物精油于濾紙片上,將含有菌液和植物精油的平板置于恒溫培養(yǎng)箱中,大腸桿菌、金黃色葡萄球菌和腐敗希瓦氏菌分別在37 ℃下培養(yǎng)24 h,副溶血性弧菌于30 ℃下培養(yǎng)24 h。用游標(biāo)卡尺來測定抑菌圈直徑大小,每種細菌做三個重復(fù),取平均值。同時每組實驗中,以放置無菌濾紙片的培養(yǎng)皿作為對照。

1.2.3 最低抑菌濃度(MIC)的測定 參考王芳等[13]的方法并略作修改。對于濾紙片法初步篩選到的具有較好抑菌效果的植物精油,采用倍比稀釋法測定其對供試菌的最低抑菌濃度(MIC)。精油溶解在1.0%(v/v)吐溫-80中,倍比稀釋法調(diào)整濃度范圍為0.1%～2.0%,分別加入含有5 mL液體培養(yǎng)基的試管中,其中大腸桿菌、腐敗希瓦氏菌和金黃色葡萄球菌所需培養(yǎng)基為LB肉湯,副溶血性弧菌所需的培養(yǎng)基為60 g/L氯化鈉蛋白胨水,使其最終濃度為0.05%、0.063%、0.075%、0.100%、0.125%、0.150%、0.200%和0.250%。然后加入50 μL已制備好的107cfu/mL的菌懸液,充分搖勻,大腸桿菌、金黃色葡萄球菌和腐敗希瓦氏菌分別于37 ℃下培養(yǎng)24 h,副溶血性弧菌于30 ℃下培養(yǎng)24 h。明顯抑制細菌生長(無濁度表示)的最低桉葉精油濃度為最低抑制濃度值。以不添加精油的菌液作為對照組。

1.2.4 掃描電鏡(SEM)和透射電鏡(TEM)觀察 參考Hao Lu等[10]的方法并略作修改。分別在制備好的濃度為107cfu/mL的腐敗希瓦氏菌和金黃色葡萄球菌菌懸液中,加入濃度為MIC的桉葉精油,充分搖勻后,在37 ℃培養(yǎng)3 h,離心(5000 r/min,15 min,4 ℃),棄去上清液,用PBS緩沖液(0.1 mol/L,pH=7.4)漂洗三次,將菌體于2.5%的戊二醛固定液中,-4 ℃條件下固定,備用。

1.2.4.1 掃描電鏡觀察 用PBS緩沖液(0.1 mol/L,pH=7.4)沖洗3次,每次15 min,然后經(jīng)系列乙醇(30%、50%、70%、80%、90%、100%)逐級洗脫樣品,每次脫水3 min,間隔10 min,其中100%乙醇脫水2次。叔丁醇與無水乙醇逐級(1∶3、1∶1、3∶1)洗脫樣品,每次脫水10 min,最后用純叔丁醇洗脫1次。再經(jīng)過-40 ℃下真空冷凍干燥24 h,粘樣、鍍膜后于S-3400N型SEM下觀察、拍照。取兩個平行進行觀察。

1.2.4.2 透射電鏡觀察 用PBS緩沖液(0.1 mol/L,pH=7.4)沖洗3次,每次15 min。用1%鋨酸固定2 h,PBS沖洗3次,后經(jīng)系列乙醇(體積分?jǐn)?shù)為30%、50%、70%、90%)逐級脫水,再用現(xiàn)配90%丙酮和無水丙酮分別洗脫1次、3次,每次15 min。環(huán)氧丙烷和環(huán)氧樹脂1∶1(v/v)混合后,作為浸透劑浸透樣品1 h,之后用純環(huán)氧樹脂包埋,置于37、45 ℃下分別聚合24 h,最后轉(zhuǎn)入60 ℃溫箱過夜。待樣品塊凝固后,修塊,經(jīng)鈾、鉛雙染后,于JEM-1230型TEM下觀察、拍照。取兩個平行進行觀察。

1.2.5 電導(dǎo)率的測定 參考Suxia Shen等[14]的方法并略作修改。分別將已制備好的濃度為107cfu/mL的腐敗希瓦氏菌和金黃色葡萄球菌菌懸液離心(5000 r/min,10 min,4 ℃),用PBS(0.1 mol/L,pH=7.0)漂洗、重懸后加入濃度為MIC的桉葉精油,混勻后立即取出5 mL,離心(5000 r/min,10 min,4 ℃)取上清液,稀釋10倍,用電導(dǎo)率儀測定電導(dǎo)率。菌懸液續(xù)培養(yǎng)3 h,按上述方法測定上清液的電導(dǎo)率。以不添加精油的菌液為對照組。

1.2.6 核酸含量的測定 參考Evandro Leite de Souza[15]的方法并略作修改。分別將已制備好的濃度為107cfu/mL的腐敗希瓦氏菌和金黃色葡萄球菌菌懸液離心(5000 r/min,10 min,4 ℃),用PBS(0.1 mol/L,pH=7.0)漂洗、重懸后加入濃度為MIC的桉葉精油,混勻后立即取出2 mL,離心(5000 r/min,10 min,4 ℃)取上清液,在260 nm波長下測定吸光值,計算菌液中核酸的含量。以不添加精油的菌液為對照組。

1.2.7 三磷酸腺苷(ATP)含量的測定 參考Bajpai[16]的方法并略作修改。分別將已制備好的濃度為107cfu/mL的腐敗希瓦氏菌和金黃色葡萄球菌菌懸液離心(5000 r/min,10 min,4 ℃),用PBS(0.1 mol/L,pH=7.0)漂洗、重懸后加入濃度為MIC的桉葉精油,混勻后立即取出2 mL,離心(5000 r/min,10 min,4 ℃)取其沉淀,用南京建成生物工程研究所ATP含量測定試劑盒測定。

1.2.8 數(shù)據(jù)統(tǒng)計與分析 試驗結(jié)果用平均值±標(biāo)準(zhǔn)差表示。采用SAS 8.0中one-way ANOVA的Duncan’s Multiple Range Test模型進行統(tǒng)計學(xué)分析,p<0.05為顯著性差異水平,使用Origin Pro 8.5作圖。

2 結(jié)果與分析

2.1 4種植物精油的抑菌活性

通過抑菌圈的直徑大小,能夠初步評價植物精油的抑菌效果[17]。一般而言,革蘭氏陰性菌對植物精油的耐受性要優(yōu)于革蘭氏陽性菌,這是因為,革蘭氏陰性菌細胞壁外側(cè)含有一層脂多糖,能夠阻止疏水性的化合物進入到菌體細胞體內(nèi),從而降低了抑菌效果[18]。植物精油(桉葉精油、薄荷精油、茶樹精油、丁香精油)對四株供試菌種(大腸桿菌、金黃色葡萄球菌、腐敗希瓦氏菌、副溶血性弧菌)的抑菌活性測定結(jié)果如表1所示。植物精油作用于革蘭氏陽性菌金黃色葡萄球菌所得的抑菌圈直徑最大,說明4種植物精油對金黃色葡萄球菌均有最強的抑制作用。同時,桉葉精油對四種供試菌的抑菌圈直徑顯著大于其他三種植物精油的抑菌圈直徑(p<0.05),說明桉葉精油對四種供試菌種的抑菌活性最強,其次是丁香精油、茶樹精油、薄荷精油。Gilles等[19]發(fā)現(xiàn)桉葉精油具有較強的抗菌活性,其中最豐富的成分為1,8-桉葉素。Lis-Balchin等[20]發(fā)現(xiàn)富含1,8-桉葉素的植物精油比不含1,8-桉葉素的植物精油具有廣譜的抗菌性。因此,選定桉葉精油作為研究對象進行后續(xù)的實驗。

表1 4種植物精油對供試菌的抑菌圈直徑Table 1 The inhibition zone diameters of four essential oils against bacterial tester strains

2.2 桉葉精油的最低抑菌濃度(MIC)

最低抑菌濃度(MIC)是評價植物精油抑菌效果的常用指標(biāo),植物精油的MIC值越小,說明其抑菌效果越好[21]。表2列出桉葉精油對不同供試菌種的MIC值,由表可知,4種供試菌均對桉葉精油較敏感。研究表明,丁香精油對金黃色葡萄菌的MIC值為1.25 μL/mL[22],茶樹精油對金黃色葡萄球菌的MIC值為0.78 μL/mL[23],薄荷精油對金黃色葡萄球菌的MIC值為2.5 μL/mL[24],均高于本文中桉葉精油對金黃色葡萄球菌的MIC值0.63 μL/mL,說明桉葉精油對金黃色葡萄球菌的抑菌效果均強于其他三種精油,且桉葉精油對革蘭氏陰性菌的MIC值均高于革蘭氏陽性菌,說明革蘭氏陰性菌對桉葉精油的敏感性低于革蘭氏陽性菌,這與本文抑菌圈的研究結(jié)果一致。

此外,抑菌物質(zhì)的抑菌圈大小和MIC值存在相關(guān)性,抑菌圈越大,MIC值越小[21]。結(jié)合表1、表2可知,桉葉精油作用于腐敗希瓦氏菌的抑菌圈直徑最小,而作用于腐敗希瓦氏菌的MIC值最大,這與本文研究的結(jié)果一致。但也有例外,S Pattnaik等[25]研究植物精油對綠膿假單胞菌的抑菌效果時發(fā)現(xiàn),其抑菌圈直徑和MIC值均較大,可能是由于精油發(fā)揮作用時的狀態(tài)不同,也可能是由于植物精油各種成分之間存在協(xié)同作用[26]。

表2 桉葉精油對供試菌種的最低抑菌濃度(MIC)Table 2 Minimal inhibitory concentration(MIC)of eucalyptus oil against bacterial tested strains

2.3 桉葉精油對腐敗希瓦氏菌和金黃色葡萄球菌細胞形態(tài)和超微結(jié)構(gòu)的影響

選定腐敗希瓦氏菌和金黃色葡萄球菌作為水產(chǎn)品中常見微生物的革蘭氏陰性菌和陽性菌的代表,進行抑菌機理的研究。掃描電鏡圖可以從形態(tài)學(xué)方面來說明桉葉精油的抑菌機理[27]。桉葉精油對細菌細胞形態(tài)影響如圖1所示。對照組細菌細胞表面平整、光滑,形態(tài)較完好;經(jīng)桉葉精油處理3 h后,菌體形態(tài)遭到破壞,部分菌體發(fā)生扭曲變形,表面出現(xiàn)明顯的凹陷、褶皺或空洞。由此可知,桉葉精油對革蘭氏陰性菌和革蘭氏陽性菌的細胞形態(tài)均有一定的破壞作用。

圖1 腐敗希瓦氏菌(A1、A2)和金黃色葡萄球菌(B1、B2)的掃描電鏡圖Fig.1 Pictures of the scanning electron microscopy of S. putrefacens(A1,A2)and B. cereus(B1,B2)注:A1(腐敗希瓦氏菌)、B1(金黃色葡萄球菌)分別為對照組;A2(腐敗希瓦氏菌)、B2(金黃色葡萄球菌)分別為處理組。

透射電鏡圖可以從超微結(jié)構(gòu)方面來說明桉葉精油的抑菌機理[27]。桉葉精油對細菌超微結(jié)構(gòu)的影響如圖2所示。對照組細菌細胞飽滿,結(jié)構(gòu)清晰,細胞膜較完整,細胞質(zhì)分布較均勻。經(jīng)桉葉精油處理3 h后,細胞壁出現(xiàn)變形,發(fā)生質(zhì)壁分離現(xiàn)象,細胞膜褶皺,細胞質(zhì)濃縮,細胞內(nèi)物質(zhì)分布不均勻?？梢?桉葉精油對細菌細胞的超微結(jié)構(gòu)也產(chǎn)生了一定的破壞作用,這與掃描電鏡的結(jié)果一致。由于桉葉精油具有疏水性,其首先作用于細菌細胞膜,使其通透性增加,導(dǎo)致細胞內(nèi)小分子物質(zhì)泄露,細胞代謝紊亂以及細胞不可逆損傷,從而造成細胞的裂解和死亡[28]。此外,桉葉精油內(nèi)的活性成分能夠阻止細胞分裂,改變細胞分裂周期,對細菌細胞造成不利的影響[29]。

圖2 腐敗希瓦氏菌(A1、A2)和金黃色葡萄球菌(B1、B2)的透射電鏡圖Fig.2 Pictures of the transmission electron microscopy of S. putrefacens(A1,A2)and B. cereus(B1,B2)注:A1(腐敗希瓦氏菌)、B1(金黃色葡萄球菌)分別為對照組;A2(腐敗希瓦氏菌)、B2(金黃色葡萄球菌)分別為處理組。

2.4 桉葉精油對腐敗希瓦氏菌和金黃色葡萄球菌電導(dǎo)率的影響

電導(dǎo)率的變化可以反映桉葉精油對細菌細胞膜通透性的影響[30]。如圖3所示,桉葉精油作用于細菌3 h后,實驗組菌液上清液中電導(dǎo)率顯著增加(p<0.05),實驗組腐敗希瓦氏菌的初始值為869.00 μs/cm,處理3 h后,增加到878.33 μs/cm,對照組菌液電導(dǎo)率變化幅度較小,金黃色葡萄球菌組也呈現(xiàn)類似的變化結(jié)果,說明桉葉精油作用于細菌后使得細菌細胞膜的通透性增大,這與呂飛[30]的研究結(jié)果一致。菌體細胞膜形成一道屏障,其選擇性透過 K+、Na+、H+等小分子物質(zhì),可維持適合細菌生存的穩(wěn)定內(nèi)環(huán)境,并在維持胞膜功能、酶活性和菌體正常代謝方面起到至關(guān)重要的作用[31]。桉葉精油作用于細胞膜后,使這種離子穩(wěn)態(tài)遭到破壞,電解質(zhì)的大量泄漏瓦解了細胞質(zhì)膜的屏障,影響菌體的代謝,最終導(dǎo)致菌體死亡。同時,胞內(nèi)離子對維持細胞內(nèi)外滲透壓有重要的作用,胞內(nèi)離子的流失會影響胞內(nèi)外滲透壓的調(diào)節(jié),使得細胞吸脹、破裂而死亡[32]。

圖3 桉葉精油對腐敗希瓦氏菌 和金黃色葡萄球菌電導(dǎo)率的影響Fig.3 Effect of eucalyptus oil on the electric conductivity of S. putrefacens and B. cereus注:A:腐敗希瓦氏菌,B:金黃色葡萄球菌;不同小寫字母 代表同種菌間差異顯著(p<0.05);圖4～圖5同。

2.5 桉葉精油對腐敗希瓦氏菌和金黃色葡萄球菌核酸含量的影響

菌體內(nèi)核酸等內(nèi)容物的釋放可反映桉葉精油對菌體細胞膜完整性的影響,通過測定上清液在260 nm處的吸光值的變化來推測細胞膜完整性的變化[16]。由圖4可知,經(jīng)過MIC處理的細菌在260 nm處的吸光度值大于對照組,隨著處理時間的延長,其吸光值有所上升,這與電導(dǎo)率的實驗結(jié)果一致,表明桉葉精油破壞了菌體細胞膜完整性。核酸類大分子物質(zhì)貫穿于整個胞膜和胞質(zhì)當(dāng)中,是重要的單位結(jié)構(gòu)物質(zhì),核酸的釋放則表明細胞膜完整性遭到了破壞[33]。桉葉精油可以作用于菌體細胞膜而對細胞造成不可逆損傷,引起細胞核酸等內(nèi)容物的釋放,導(dǎo)致細胞死亡。

圖4 桉葉精油對腐敗希瓦氏菌 和金黃色葡萄球菌核酸含量影響Fig.4 Effect of eucalyptus oil on the nucleic acid content of S. putrefacens and B. cereus

2.6 桉葉精油對腐敗希瓦氏菌和金黃色葡萄球菌細胞內(nèi)ATP含量的影響

ATP在細胞膜物質(zhì)運輸工作中起著很重要的作用,因此,通過分析細胞內(nèi)ATP含量的變化可以分析其抑菌機理[29]。由圖可知,對照組樣品細胞內(nèi)ATP含量變化很小,而處理組樣品經(jīng)過桉葉精油的處理后細胞內(nèi)ATP含量顯著降低(p<0.05)。這可能是因為桉葉精油作用于細菌后導(dǎo)致細胞膜損傷,從而對細菌的生理活性有不利影響,導(dǎo)致樣品細胞內(nèi)ATP含量的下降[34]。另外,細胞內(nèi)ATP含量的降低也可能是由于電解質(zhì)的損失導(dǎo)致細胞內(nèi)ATP合成速率與水解速率重新轉(zhuǎn)化,從而保持原來的電化學(xué)梯度[35]。因此,桉葉精油的抑菌作用可能也是抑制其質(zhì)子動力機制、電子傳遞鏈以及三羧酸循環(huán)等?？傊?電解質(zhì)的泄露、A260 nm的降低以及細胞內(nèi)ATP含量的降低等綜合現(xiàn)象表征桉葉精油作用于細菌細胞后導(dǎo)致細胞的裂解、死亡。

圖5 桉葉精油對腐敗希瓦氏菌 和金黃色葡萄球菌細胞ATP含量的影響Fig.5 Effect of eucalyptus oil on the ATP content of S. putrefacens and B. cereus

3 結(jié)論

本文研究了四種植物精油(桉葉精油、薄荷精油、茶樹精油和丁香精油)對水產(chǎn)品中4種常見微生物(大腸桿菌、腐敗希瓦氏菌、金黃色葡萄球菌和副溶血性弧菌)的抑菌活性,結(jié)果發(fā)現(xiàn)桉葉精油的抑菌圈最大,說明桉葉精油對這4種微生物均具有最強的抑菌特性,因此桉葉精油可以作為水產(chǎn)品中常見微生物的潛在抑菌物質(zhì)。選擇腐敗希瓦氏菌和金黃色葡萄球菌為代表,進一步闡述了桉葉精油的抑菌機理,掃描電鏡圖和透射電鏡圖顯示,桉葉精油改變了菌體細菌的形態(tài)和超微結(jié)構(gòu),電導(dǎo)率和核酸含量的升高,細胞內(nèi)ATP含量降低,表明桉葉精油造成細胞內(nèi)電解質(zhì)和核酸等物質(zhì)的泄露以及ATP含量的減少,說明桉葉精油改變了細胞膜的通透性和完整性,使其受到不可逆損傷,從而進一步導(dǎo)致其質(zhì)子動力機制等的改變,影響細菌的正常代謝活動,造成細胞的裂解和死亡。本實驗為桉葉精油作為一種天然抑菌物質(zhì)應(yīng)用于水產(chǎn)品行業(yè)提供了理論依據(jù)。