楊彩霞，馬成龍，郜曉玲，楊軍輝，高 非

(1.西北師范大學(xué)化學(xué)化工學(xué)院,甘肅省高分子材料重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室, 生態(tài)環(huán)境相關(guān)高分子材料教育部重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室，甘肅蘭州 730070； 2.中國熱帶農(nóng)業(yè)科學(xué)院熱帶作物品種資源研究所,農(nóng)業(yè)部華南作物基因資源與種質(zhì)創(chuàng)制重點(diǎn)開放實(shí)驗(yàn)室， 海南儋州 571737)

牛角瓜(Calotropisgigantea)系蘿藦科(Asclepiadaceae)牛角瓜屬(CalotropisR.Brown)植物，別名羊浸樹、狗仔花、斷腸草、五狗臥花心等,生長于低海拔向陽山坡、曠野地及海邊等區(qū)域[1].牛角瓜為傳統(tǒng)民間草藥，常用其治療哮喘、麻瘋病、梅毒、跌打損傷、風(fēng)濕、淋巴結(jié)核、癰腫療毒、腫瘤、小兒驚風(fēng)、狂犬病等疾病[2].

國內(nèi)外研究表明牛角瓜主要含強(qiáng)心苷類化合物[3]，此外還有三萜類[4-5]、C21甾類[6-7]、黃酮類[4]等成分，具有廣泛的藥理活性和藥用價(jià)值.文中對采自海南儋州的牛角瓜的根進(jìn)行了化學(xué)成分研究，從其乙醇提取物中分離得到了9個(gè)化合物.經(jīng)過核磁共振譜(NMR)、質(zhì)譜(MS)分析及與標(biāo)準(zhǔn)品對照，鑒定了它們的結(jié)構(gòu)，分別是洋地黃毒甙元-3-O-β-D-葡萄糖甙(1)、洋地黃毒甙元-3-O-α-L-鼠李糖甙(2)、坎諾甙元-3-O-β-D-葡萄糖甙(3)、坎諾甙元-3-O-α-L-鼠李糖甙(4)、齊墩果烷-12-烯(5)，羽扇豆醇(6)、奈皮菌素(7)、3α,11α-羥基-20(29)-羽扇豆烷-28-酸甲酯(8)和熊果酸(9).其中化合物1～4為強(qiáng)心苷類化合物，化合物5～9為三萜或甾體類化合物.此外，化合物1～3和5為首次從該植物中分離得到.

2 提取與分離

將采集的2.1 kg新鮮牛角瓜的根曬干后粉碎，用重蒸工業(yè)乙醇(95%)在室溫下浸泡3次，每次浸泡10 d左右，合并回收溶劑，經(jīng)旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)濃縮至無醇味，得總浸膏152 g.然后將總浸膏分散于300 mL水中成懸浮液，用等體積的石油醚萃取3次，合并萃取液過濾減壓濃縮得石油醚部位；水層過濾、減壓濃縮得水相提取浸膏.石油醚部位依次用100～200，200～300目硅膠進(jìn)行反復(fù)柱層析，以石油醚-乙酸乙酯(100∶1～0∶1)進(jìn)行梯度洗脫，TLC薄層檢測，結(jié)合重結(jié)晶等純化方法，得到化合物6(23 mg)，7(18 mg)，8(27 mg)，9(20 mg).水相提取浸膏用100～200，200～300目硅膠反復(fù)柱層析，用石油醚-乙酸乙酯(1∶1～0∶1)梯度洗脫，TCL檢查合并相同部分得餾分E1(1∶4)，E2(1∶6)，E3(1∶8)，E4(1∶1)，E5(0∶1). E2(3.5 g)以石油醚-乙酸乙酯(1∶1～0∶1)梯度洗脫，TLC薄層檢測，結(jié)合重結(jié)晶等純化方法，得到化合物1(36 mg)，2(24 mg)，3(22 mg).E3(2.7 g)以石油醚-乙酸乙酯(1∶1～0∶1)梯度洗脫，結(jié)合TLC薄層檢測、重結(jié)晶等純化方法，得到化合物4(17 mg). E4(0.78 g)以石油醚-乙酸乙酯(1∶1～0∶1)梯度洗脫，結(jié)合TLC薄層檢測、重結(jié)晶等純化方法，得到化合物5(11 mg).化合物1～9的結(jié)構(gòu)見圖1.

3 結(jié)構(gòu)鑒定

化合物1.白色針狀晶體，HR-ESI-MS：m/z537.6652[M+H]+(理論值537.6648)，分子式C29H44O9.該化合物在碘蒸氣下顯黃色，用5%硫酸-乙醇溶液顯色后加熱呈紫色.1HNMR(400 MHz，CD3OD)中有典型的強(qiáng)心苷質(zhì)子信號δ：1.11(1H，m，H-1α)，1.87(1H，m，H-1β)，1.95(1H，td，J=3.2，13.6 Hz，H-1α)，1.65(1H，td，J=3.2，13.6 Hz，H-1β)，3.82(1H，m，H-3α)，2.85(1H，m，H-17)，0.97(3H，s，H-18)，0.93(3H，s，H-19)，4.96(1H，overlap，H-21α)，5.04(1H，dd，J=1.2，9.2 Hz，H-21β)，5.92(1H，brs，H-22)，4.74(1H，d，J=3.2 Hz，H-1′)，3.73(1H，m，H-5′)，3.34(1H，brs，H-3′)，3.27(1H，dd，J=2.8，9.6 Hz，H-2′)，3.19(1H，dd，J=5.4，3.6 Hz，H-4′)；結(jié)合13CNMR (表1)，確定為強(qiáng)心苷類化合物，其波譜數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)[8]對照，確定為洋地黃毒甙元-3-O-β-D-葡萄糖甙.

化合物2.白色針狀晶體，HR-ESI-MS：m/z521.6696[M+H]+(理論值521.6648)，分子式C29H44O8.該化合物在碘蒸氣下顯黃色，用5%硫酸-乙醇溶液顯色后加熱呈紫色.其1HNMR(400 MHz，CD3OD)中有類似化合物1的質(zhì)子信號δ：0.96(1H，m，H-1α)，2.31(1H，td，J=9.2，1.2 Hz，H-1β)，4.04(1H，m，H-3)，2.83(1H，m，H-17)，0.96(3H，s，H-18)，0.95(3H，s，H-19)，4.97(1H，overlap，H-21α)，5.02(1H，dd，J=10.8，5.2 Hz，H-21β)，5.92(1H，brs，H-22).與化合物1不同的是糖質(zhì)子信號為鼠李糖質(zhì)子信號δ：4.76(1H，d，J=1.6 Hz，H-1′)，3.75(1H，m，H-5′)，3.33(1H，brs，H-3′)，3.27(1H，dd，J=1.2，6.8 Hz，H-2′)，3.18(1H，dd，J=7.6，4.0 Hz，H-4′)，1.26(3H，d，J=6.8 Hz，H-6′),其波譜數(shù)據(jù)(13CNMR 見表1)與文獻(xiàn)[9]對照,與洋地黃毒甙元-3-O-α-L-鼠李糖甙相一致.

化合物3.白色針狀晶體，HR-ESI-MS：m/z549.6307[M-H]+(理論值549.6325)，分子式C29H42O10.該化合物在碘蒸氣下顯黃色，用5%硫酸-乙醇溶液顯色后加熱呈紫色.其1HNMR(400 MHz，CD3OD)給出了強(qiáng)心苷典型質(zhì)子的信號δ：0.72(1H，m，H-1α)，1.52(1H，td，J=12.4，1.6 Hz，H-1β)，1.23(3H，s，H-18)，2.75(1H，m，H-17)，3.91(1H，m，H-3)，10.2(1H，s，H-19)， 4.83(1H，overlap，H-21α)，4.90(1H，dd，J=18.8，1.6 Hz，H-21β)，5.88(1H，brs，H-22)，4.78(1H，d，J=1.6 Hz，H-1′)，3.59(1H，m，H-5′)，3.21(1H，brs，H-3′)，3.14(1H，dd，J=2.8，7.6 Hz，H-2′)，3.12(1H，dd，J=1.6，9.2 Hz，H-4′)；結(jié)合13CNMR(表1)，確定為強(qiáng)心苷類化合物,其波譜數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)[10]相對照，鑒定為坎諾甙元-3-O-β-D-葡萄糖甙.

化合物4.白色針狀晶體，HR-ESI-MS：m/z535.6451[M-H]+(理論值535.6490)，得分子式C29H42O9.該化合物在碘蒸氣下顯黃色，用5%硫酸-乙醇溶液顯色后加熱呈紫色.其1HNMR(400 MHz，CD3OD)和化合物3很相似,δ：0.85( 1H，m，H-1α)，1.24(3H，s，H-18)，1.51(1H，td，J=18.8，3.6 Hz，H-1β)，2.8(1H，m，H-17)，4.02(1H，m，H-3)，10.3(1H，s,H-19)，4.97(1H，overlap，H-21α)，5.02(1H，dd，J=18.5，1.4 Hz，H-21β)，5.92(1H，brs，H-22).不同的是糖質(zhì)子信號為4.73(1H，d，J=7.6 Hz，H-1′)，3.74(1H，m，H-5′)，3.33(1H，brs，H-3′)，3.27(1H，dd，J=2.8，7.6 Hz，H-2′)，3.17(1H，dd，J=1.6，9.6 Hz，H-4′)，1.28(3H，d，J=6.8 Hz，H-6′).結(jié)合13CNMR (表1)及HR-ESI-MS譜，并與文獻(xiàn)[11]對照分析，確定為坎諾甙元-3-O-α-L-鼠李糖甙.

化合物5.白色粉末，EI-MS：m/z410[M]+，分子式C30H50.該化合物用5%濃硫酸-乙醇溶液顯色為紫紅色.其1HNMR(400 MHz，CDCl3)有明顯的五環(huán)三萜角甲基信號δ：0.87(3H，s，H-23)，0.84(3H，s，H-24)，0.94(3H，s，H-25)，0.98(3H，s，H-26)，1.15(3H，s，H-27)，0.85(3H，s，H-28)，0,88(3H，s，H-29)，0.89(3H，s，H-30)，以及烯質(zhì)子δ：5.40(1H，t，J=10.4 Hz，H-12),為典型的齊墩果烷化合物.其13CNMR見表1，經(jīng)與文獻(xiàn)[12]報(bào)道的波譜數(shù)據(jù)對照,確定該化合物為齊墩果烷-12-烯.

化合物6.白色結(jié)晶粉末，EI-MS：m/z427[M+H]+，分子式為C30H50O.該化合物在碘蒸汽下顯黃色，用5%濃硫酸-乙醇溶液顯色為紫色.其1HNMR(400 MHz，CDCl3)給出典型的三萜類化合物的角甲基信號δ：0.75，0.87，0.95，0.98，1.00，1.11，1.67(各3H，s，7×CH3)，4.91 和4.93(各1H，bs，H-29)，2.43(1H，m，H-19)；13CNMR 見表1，以上波譜數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)[13]報(bào)道的羽扇豆醇的相一致.

化合物7.白色固體，ESI-MS：m/z443[M+H]+，分子式為C30H50O2.該化合物在碘蒸汽下顯黃色，用5%濃硫酸-乙醇溶液顯色為紫色.在其1HNMR(400 MHz，CDCl3)中有7個(gè)角甲基信號δ：0.77，0.86，0.93，0.97，1.01，1.03，1.43(各3H，s，7×CH3)；4.90和4.91(各1H，bs，H-29)，3.20(1H，dd，J=5.2，10.8 Hz，3-H)，4.09(1H，dd，J=5.6，10.4 Hz，12-H)，2.4(1H，ddd，J=1.2，8.0，3.6 Hz，H-19)；13CNMR 見表1.以上波譜數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)[14]報(bào)道的波譜數(shù)據(jù)對照分析，確定該化合物為奈皮菌素.

化合物8：白色固體粉末，ESI-MS：m/z487[M+H]+，分子式為C31H50O4.該化合物在碘蒸汽下顯黃色，用5%濃硫酸-乙醇溶液顯色為紫色.其1HNMR(400 MHz，CDCl3)與化合物7非常相似,δ為：0.79，0.83，0.88，0.94，0.97(各3H，s，6×CH3)，4.60和4.61(2H，d，J=2.0 Hz，H-29)，2.05(1H，dd，J=5.2，10.4 Hz，3-H)，4.09(1H，dd，J=5.6，10.4 Hz，12-H)，2.40(1H，ddd，J=5.2，5.6，16.8Hz，H-19)，3.55(3H，s，OCH3)；結(jié)合其13CNMR(表1),并與文獻(xiàn)[15]對照分析,確定該化合物為3α,11α-羥基-20(29)-羽扇豆烷-28-酸甲酯.

表1 化合物1～9的13CNMR(100 MHz，1～4 in CD3OD,5～9 in CDCl3,TMS,δ)

化合物9.白色結(jié)晶型粉末，ESI-MS：m/z456[M]+，分子式為C30H48O3.該化合物在5%濃硫酸-乙醇溶液中顯紫色.其1HNMR(400 MHz，CDCl3)有典型的三萜角甲基的信號δ：0.80， 0.93，1.03，1.11，1.30，1.44，1.63(各3H，s，7×CH3)，1.13(3H，d，J=6.5 Hz，CH3CH)，5.72(1H，t，J=1.6，6.8 Hz,H-12)，3.45(1H，t，J=3.2 Hz，H-3),11.4(1H，s，-COOH);結(jié)合其13CNMR(表1)，鑒定該化合物為熊果酸[16].

4 結(jié)束語

從蘿藦科植物牛角瓜(Calotropisgigantea)根的乙醇提取物中分離了9個(gè)單體化合物，包括4個(gè)強(qiáng)心苷類化合物，5個(gè)三萜及甾體類化合物,其中4個(gè)化合物為首次從該植物中分離得到.強(qiáng)心苷類具有較好的抗細(xì)胞毒活性，三萜及甾體類化合物則具有較好的抑菌抗炎活性，因此，本研究結(jié)果對進(jìn)一步研究牛角瓜生物活性有一定的參考價(jià)值.