張洪軍，王會(huì)敏，張秀麗，李秀慧，趙曉光，劉國(guó)臣，王佩琪，路廣計(jì)

（1.河北省承德市圍場(chǎng)滿族蒙古族自治縣動(dòng)物疫病預(yù)防控制中心，承德 068450；2.河北省動(dòng)物疫病預(yù)防控制中心，石家莊 068450）

0 引言

布魯氏菌病是一種世界性的人畜共患病，對(duì)經(jīng)濟(jì)和公共健康都有重大影響。牛、羊感染流產(chǎn)布魯氏菌和羊種布魯氏菌，是人類疾病的共同來(lái)源，該病主要危害人畜生殖系統(tǒng)，人與人之間幾乎不傳播，患病動(dòng)物是主要的傳染源，其中病羊感染人的比例較高。目前疫苗免疫是布魯氏菌病防控的重要手段之一，尤其布魯氏菌病高發(fā)地區(qū)。我國(guó)在《國(guó)家布魯氏菌病防治計(jì)劃 （2016—2020年）》中明確提出一類地區(qū)對(duì)羊采取全面免疫措施。

我國(guó)羊使用的布魯氏菌病疫苗主要有Rev.1羊種和S2豬種。羊種Rev.1是應(yīng)用最廣泛的羊種布病活疫苗，可對(duì)羊?qū)嵤┯行У拿庖遊1]。豬種的S2株弱毒疫苗具有良好的免疫效果，但目前仍無(wú)法判斷區(qū)分野毒及接種疫苗產(chǎn)生的抗體，主要從抗體在體內(nèi)存續(xù)時(shí)間的長(zhǎng)短判斷，存續(xù)時(shí)間短的是疫苗免疫，時(shí)間長(zhǎng)的為野毒感染[2]。M5菌株是一株由我國(guó)從羊種布魯氏菌中分離并自行培育致弱的菌株，對(duì)牛、羊均可產(chǎn)生較好的免疫力[3]。由于該菌株毒力較強(qiáng)且存在毒力返強(qiáng)的風(fēng)險(xiǎn)，同時(shí)因其對(duì)妊娠動(dòng)物有毒力增強(qiáng)的現(xiàn)象，更不能用于懷孕羊，目前市場(chǎng)已經(jīng)不進(jìn)行生產(chǎn)銷售[4]。

1 試驗(yàn)材料

1.1 樣品

琥紅平板凝集試驗(yàn)和試管凝集試驗(yàn)結(jié)果均為：陰性的健康羊血清樣品212份，采自河北省境內(nèi)某地區(qū)規(guī)?；B(yǎng)殖場(chǎng)，均免疫過布病疫苗S2株，但已超過18個(gè)月。

1.2 試劑

布病陰性羊40只（20只/組），豬種布魯氏菌S2弱毒疫苗（中牧）、Rev.1疫苗（國(guó)外小量購(gòu)進(jìn)）。

2 試驗(yàn)方法

使用布魯氏菌S2疫苗以口服方式對(duì)羊進(jìn)行免疫，使用Rev.1疫苗以滴眼方式對(duì)羊進(jìn)行免疫，免疫后分別在特定時(shí)間點(diǎn)使用虎紅平板凝集試驗(yàn)（RBT）和試管凝集試驗(yàn)（SAT）對(duì)羊群抗體陽(yáng)性率進(jìn)行監(jiān)測(cè)[5]。

3 結(jié)果與分析

應(yīng)用RBT及SAT試驗(yàn)方法檢測(cè)羊免疫后在第14、21、28、58、90、122天的血清40份，免疫后不同天數(shù)布病特異性抗體檢出率見圖1、圖2。

3.1 S2口服免疫羊群后抗體消長(zhǎng)規(guī)律

S2口服免疫羊群后，抗體陽(yáng)性率在免疫后21 d內(nèi)持續(xù)升高，隨后下降，并在122 d后降到10%以下（圖1）。

圖1 S2疫苗口服免疫羊群抗體消長(zhǎng)規(guī)律

3.2 Rev.1滴眼免疫羊群抗體消長(zhǎng)規(guī)律

Rev.1疫苗滴眼免疫羊群后，抗體陽(yáng)性率在免疫后14 d內(nèi)持續(xù)升至100%，免疫后28 d開始下降，免疫后122 d抗體陽(yáng)性率降至10%以下（圖2）。

圖2 Rev.1疫苗滴眼免疫羊群抗體消長(zhǎng)規(guī)律

4 討論

從檢測(cè)方法上分析，RBT同時(shí)期檢測(cè)S2免疫羊與Rev.1免疫羊，14 d時(shí)Rev.1抗體陽(yáng)性率達(dá)到最高（Rev.1為100%，S2為65%）。S2免疫抗體陽(yáng)性率繼續(xù)小幅上升，直到21 d時(shí)達(dá)到最高值70%，此時(shí)Rev.1免疫抗體陽(yáng)性率依然保持100%。隨著時(shí)間的推移，S2免疫抗體陽(yáng)性率開始急速下降，約58 d時(shí)免疫抗體陽(yáng)性率減半（35%），而Rev.1免疫抗體陽(yáng)性率一直到28 d時(shí)才出現(xiàn)下降趨勢(shì)，并在90 d時(shí)減半（50%），此時(shí)Rev.1免疫抗體陽(yáng)性率仍然大于S2的免疫抗體陽(yáng)性率。而兩者均在122 d時(shí)免疫抗體陽(yáng)性率達(dá)到20%。

SAT同時(shí)檢測(cè)S2免疫羊與Rev.1免疫羊，S2與Rev.1同在14 d檢測(cè)到最高的抗體陽(yáng)性率（Rev.1為100%，S2為70%）。S2最高的抗體陽(yáng)性率一直持續(xù)到21 d，而Rev.1最高的抗體陽(yáng)性率一直持續(xù)到28 d。S2仍在58 d免疫抗體陽(yáng)性率減半（35%），Rev.1在90 d時(shí)減半（50%）。122 d時(shí)免疫抗體陽(yáng)性率降至10%以下。

通過對(duì)兩種檢測(cè)方法比較發(fā)現(xiàn)，SAT檢測(cè)S2與Rev.1時(shí)，14 d均能檢測(cè)到最高陽(yáng)性率，之后抗體陽(yáng)性率均下降，RBT檢測(cè)和SAT檢測(cè)比較無(wú)太大差別，結(jié)合操作方法分析，RBT檢測(cè)方法更簡(jiǎn)單、快速。

通過對(duì)S2株免疫與Rev.1免疫后的免疫效果比較發(fā)現(xiàn)，Rev.1的免疫效果高于S2，14 d時(shí)抗體陽(yáng)性率100%，S2僅為70%。Rev.1抗體陽(yáng)性率100%持續(xù)到28 d，而S2僅持續(xù)到21 d。122 d時(shí)，兩者抗體陽(yáng)性率均降至10%以下。因此Rev.1可作為綿羊布病免疫的首選疫苗。

5 結(jié)論

大規(guī)模進(jìn)行羊布魯氏菌病的免疫宜采用Rev.1滴眼方式進(jìn)行，而篩選宜采用RBT檢測(cè)的方式。