李尚穎 陳默 張耀文 隋曉璠 孫苓苓 國(guó)夢(mèng)然

中圖分類號(hào) R917 文獻(xiàn)標(biāo)志碼 A 文章編號(hào) 1001-0408（2018）23-3189-05

DOI 10.6039/j.issn.1001-0408.2018.23.05

摘 要 目的：建立拆分鹽酸西替利嗪、鹽酸異丙嗪、特非那定和馬來酸非尼拉敏4種H1受體拮抗藥對(duì)映體的方法。方法：采用高效液相色譜法（HPLC），選擇Chiralcel OJ-H手性色譜柱，檢測(cè)波長(zhǎng)為230 nm，柱溫為室溫，流速為1.0 mL/min，進(jìn)樣量為20 μL；以保留時(shí)間、選擇因子和分離度為指標(biāo)，考察流動(dòng)相中酸堿添加劑（二乙胺）、有機(jī)改性劑的種類（乙醇、異丙醇）及其占比、甲醇等對(duì)4種藥物對(duì)映體分離的影響。結(jié)果：流動(dòng)相考察結(jié)果為鹽酸西替利嗪和鹽酸異丙嗪的流動(dòng)相為正己烷-乙醇（90 ∶ 10，V/V）；特非那定的流動(dòng)相為正己烷-甲醇-乙醇-二乙胺（89 ∶ 9.9 ∶ 1 ∶ 0.1，V/V/V/V）；馬來酸非尼拉敏對(duì)映體的流動(dòng)相為正己烷-甲醇-乙醇-二乙胺（98 ∶ 2 ∶ 0.5 ∶ 0.1，V/V/V/V）。在此條件下，4種藥物的對(duì)映體均達(dá)到完全分離，分離度分別為4.36、3.76、1.55、1.71。結(jié)論：建立的Chiralcel OJ-H手性色譜柱-HPLC法對(duì)這4種H1受體拮抗藥的選擇性良好，可用于其對(duì)映體的手性分離。

關(guān)鍵詞 Chiralcel OJ-H手性色譜柱；高效液相色譜法；H1受體拮抗藥；鹽酸西替利嗪；鹽酸異丙嗪；特非那定；馬來酸非尼拉敏；對(duì)映體

ABSTRACT OBJECTIVE： To establish a method for separating of 4 kinds of H1-receptor antagonist enantiomers as cetirizine hydrochloride， promethazine hydrochloride， terfenadine and pheniramine maleate. METHODS： HPLC method was adopted. Chiralcel OJ-H chiral column was selected. Detection wavelength was set at 230 nm； column temperature was room temperature； flow rate was 1.0 mL/min； sample size was 20 μL. Using retention time， selective factors and separation rate as indexes， the influence of acid-base additives （diethylamine）， type and ratio of organic modifiers （ethanol， isopropanol）， methanol on the separation of 4 kinds of enantiomers in mobile phase were investigated. RESULTS： The results of mobile phase investigation was the mobile phase of cetirizine hydrochloride and promethazine hydrochloride was n-hexane and ethanol （90 ∶ 10， V/V）. Mobile phase of terfenadine was n-hexane-methanol-ethanol-diethylamine （89 ∶ 9.9 ∶ 1 ∶ 0.1， V/V/V/V）. Mobile phase of pheniramine maleate enantiomers was n-hexane-methanol-ethanol-diethylamine （98 ∶ 2 ∶ 0.5 ∶ 0.1， V/V/V/V）. Under the condition， 4 kinds of drug enantiomers were separated completely， with separate rate of 4.36， 3.76， 1.55， 1.71. CONCLUSIONS： Established Chiralcel OJ-H chiral column-HPLC is selective for these 4 kinds of H1-receptor antagonists， and can be used for the chiral separation of the enationmers.

KEYWORDS Chiralcel OJ-H chiral column； HPLC； H1-receptor antagonists； Cetirizine hydrochloride； Promethazine hydrochloride； Terfenazine； Pheniramine maleate； Enantiomer

組胺是一種內(nèi)源性的生物活性物質(zhì)，可參與多種復(fù)雜的生理過程。外源性抗原能引起人體的過敏性反應(yīng)，導(dǎo)致血漿滲出，出現(xiàn)局部組織紅腫，支氣管、胃腸道平滑肌收縮等過敏性癥狀[1]。H1受體拮抗藥可拮抗組胺與H1受體結(jié)合，產(chǎn)生抗過敏作用。目前，H1受體拮抗藥在臨床上主要用于治療胃潰瘍和過敏性疾病，常見的H1受體拮抗藥類藥物有鹽酸西替利嗪、鹽酸異丙嗪、馬來酸非尼拉敏和特非那定等。以鹽酸西替利嗪為例，其分子中存在一對(duì)對(duì)映異構(gòu)體，有關(guān)研究表明[2]，鹽酸西替利嗪異構(gòu)體的藥效存在顯著差異，（+）-異構(gòu)體主要用于治療風(fēng)疹，（-）-異構(gòu)體主要用于抗過敏治療，其單旋體用藥可以避免外消旋體用藥產(chǎn)生的副作用。為了減少對(duì)映體藥物的毒副作用，提高藥物利用度，以及控制藥物的質(zhì)量，應(yīng)對(duì)手性對(duì)映體藥物進(jìn)行分析和研究。

目前，常用于拆分H1受體拮抗藥的方法為毛細(xì)管電泳法與高效液相色譜法[3-5]。其中利用β-環(huán)糊精作為毛細(xì)管電泳法和高效液相色譜法的流動(dòng)相添加劑或者將β-環(huán)糊精鍵合到硅膠上作為手性固定相拆分不同的H1受體拮抗藥對(duì)映體已有報(bào)道[6-8]。而纖維素類手性固定相是近幾年開始應(yīng)用的固定相，因其制備簡(jiǎn)單，手性識(shí)別能力強(qiáng)等優(yōu)點(diǎn)而被廣泛應(yīng)用[9]。筆者在本研究中首次使用Chiralcel OJ-H色譜柱，其固定相是由表面涂敷有纖維素-3（4-甲基苯甲酸酯）的硅膠組成，并考察了流動(dòng)相中酸堿添加劑（二乙胺）、有機(jī)改性劑的種類（乙醇、異丙醇）及其占比、甲醇等對(duì)鹽酸西替利嗪、鹽酸異丙嗪、特非那定和馬來酸非尼拉敏4種H1受體拮抗藥類藥物對(duì)映體分離的影響，優(yōu)化分離條件，建立這4種藥物對(duì)映體分離的方法，為后續(xù)相關(guān)藥物的對(duì)映體研究提供參考。

1 材料

1.1 儀器

1580高效液相色譜儀（日本Jasco公司）；Chiralcel OJ-H色譜柱（日本Daicel公司）；SPD-15C紫外檢測(cè)器（日本Shimadzu公司）；N2000色譜工作站（浙江大學(xué)智達(dá)信息有限公司）；BS1102電子天平（德國(guó)Sartorius公司）。

1.2 藥品與試劑

鹽酸西替利嗪對(duì)照品（消旋體，批號(hào)：100660-201102，純度：99.8%）、左旋鹽酸西替利嗪對(duì)照品（批號(hào)：100659- 201102，純度：98.8%）、鹽酸異丙嗪對(duì)照品（消旋體，批號(hào)：100422-201603，純度：99.5%）、特非那定對(duì)照品（消旋體，批號(hào)：100292-201302，純度：99.4%）均購(gòu)至中國(guó)食品藥品檢定研究院；馬來酸非尼拉敏對(duì)照品（消旋體，歐洲藥品質(zhì)量管理局，批號(hào)：P0850000，純度：100%）；鹽酸西替利嗪原料藥（丹東醫(yī)創(chuàng)藥品有限責(zé)任公司，批號(hào)：160310，純度：99.4%）；鹽酸異丙嗪原料藥（蘇州甫路生物科技有限公司，批號(hào)：170407，純度：99.1%）；特非那定原料藥（沈陽新馬藥業(yè)有限公司，批號(hào)：361503017，純度：99.0%）；馬來酸非尼拉敏原料藥（珠海物美科技有限公司，批號(hào)：150204，純度：99.0%）；正己烷、乙醇、異丙醇、甲醇為色譜純，其余試劑為分析純。

2 方法與結(jié)果

2.1 色譜條件

色譜柱為Chiralcel OJ-H手性色譜柱（150 mm×4.6 mm，5 μm），檢測(cè)波長(zhǎng)為230 nm，柱溫為室溫，流速為1.0 mL/min，進(jìn)樣量為20 μL，流動(dòng)相根據(jù)優(yōu)化條件確定。

2.2 溶液的制備

2.2.1 對(duì)照品溶液的制備 分別稱取鹽酸西替利嗪、鹽酸異丙嗪、特非那定和馬來酸非尼拉敏對(duì)照品適量，分別用乙醇稀釋成質(zhì)量濃度為0.1 mg/mL的對(duì)照品溶液，經(jīng)0.45 μm微孔濾膜過濾，即得4種藥物的對(duì)照品溶液，并于4 ℃下保存，備用。

2.2.2 供試品溶液的制備 分別稱取鹽酸西替利嗪、鹽酸異丙嗪、特非那定和馬來酸非尼拉敏原料藥適量，分別用乙醇稀釋成質(zhì)量濃度為0.1 mg/mL的供試品溶液，經(jīng)0.45 μm微孔濾膜過濾，即得4種藥物的供試品溶液，并于4 ℃下保存，備用。

2.2.3 左旋鹽酸西替利嗪對(duì)照品溶液的制備 稱取左旋鹽酸西替利嗪對(duì)照品適量，用乙醇稀釋成質(zhì)量濃度為0.05 mg/mL的溶液，經(jīng)0.45 μm微孔濾膜過濾，即得，并于4 ℃下保存，備用。

2.3 分離條件的選擇

在前期試驗(yàn)中發(fā)現(xiàn)，鹽酸西替利嗪和鹽酸異丙嗪的流動(dòng)相（正己烷-乙醇）在不添加堿性添加劑時(shí)，其對(duì)映體色譜峰已經(jīng)能達(dá)到完全分離，為了保護(hù)色譜柱，故不繼續(xù)考察酸堿添加劑對(duì)這2種藥物的影響。相同條件下，特非那定和馬來酸非尼拉敏對(duì)映體色譜峰峰形嚴(yán)重拖尾且未實(shí)現(xiàn)分離，改變有機(jī)改性劑的種類和占比均不能使其分離，故先考察加入酸堿添加劑（二乙胺），使其色譜峰部分分離后，繼續(xù)考察有機(jī)改性劑的種類及其占比對(duì)這4種藥物分離的影響。

2.3.1 酸堿添加劑的影響 按“2.1”項(xiàng)下色譜條件，以保留時(shí)間t、選擇因子α（α應(yīng)>1，且α越大，選擇性越好，分離效果越好）和分離度R（R應(yīng)≥1.5，且R越大，對(duì)映體的分離效果越好）為指標(biāo)，考察流動(dòng)相中加入0.1%二乙胺對(duì)特非那定和馬來酸非尼拉敏對(duì)映體分離的影響，二乙胺對(duì)特非那定和馬來酸非尼拉敏對(duì)映體分離的影響結(jié)果見表1（表中t1為第1個(gè)對(duì)映體峰的保留時(shí)間；t2為第2個(gè)對(duì)映體峰的保留時(shí)間，下同）。

特非那定和馬來酸非尼拉敏對(duì)映體在未加入二乙胺時(shí)其色譜峰峰形嚴(yán)重拖尾且未實(shí)現(xiàn)分離（α=1，R=0），當(dāng)在流動(dòng)相中加入0.1%二乙胺后，特非那定對(duì)映體的α為1.30、R為1.03，馬來酸非尼拉敏對(duì)映體的α為1.12、R為0.79，均實(shí)現(xiàn)了部分分離。因此，在特非那定和馬來酸非尼拉敏對(duì)映體分離流動(dòng)相中加入0.1%二乙胺可改善其對(duì)映體的分離。

2.3.2 有機(jī)改性劑的種類對(duì)分離的影響 以正己烷為基礎(chǔ)溶劑，按“2.1”項(xiàng)下色譜條件，考察流動(dòng)相中有機(jī)改性劑種類（乙醇和異丙醇）對(duì)鹽酸西替利嗪、鹽酸異丙嗪、特非那定和馬來酸非尼拉敏對(duì)映體分離的影響，有機(jī)改性劑種類對(duì)4種藥物對(duì)映體的分離影響結(jié)果見表2。

由表2可知，對(duì)于鹽酸西替利嗪和鹽酸異丙嗪對(duì)映體，使用乙醇作為有機(jī)改性劑時(shí)α和R更大，因此，選擇正己烷-乙醇作為分離鹽酸西替利嗪和鹽酸異丙嗪對(duì)映體的流動(dòng)相；對(duì)于特非那定和馬來酸非尼拉敏對(duì)映體，當(dāng)以異丙醇為有機(jī)改性劑時(shí)，手性固定相對(duì)這兩種藥物均沒有選擇性，兩種藥物不能被分離。當(dāng)使用乙醇為有機(jī)改性劑，特非那定對(duì)映體的R由0增加為1.03，馬來酸非尼拉敏對(duì)映體的R由0增加為0.79，兩種藥物的分離均得到明顯改善，因此，選擇正己烷-乙醇-0.1%二乙胺作為分離特非那定和馬來酸非尼拉敏對(duì)映體的流動(dòng)相。

2.3.3 有機(jī)改性劑的占比對(duì)分離的影響 根據(jù)上述試驗(yàn)結(jié)果，按“2.1”項(xiàng)下色譜條件，考察流動(dòng)相中乙醇占比對(duì)鹽酸西替利嗪、鹽酸異丙嗪（5%、10%、15%、20%），特非那定和馬來酸非尼拉敏（2%、5%、8%、10%）對(duì)映體分離的影響，結(jié)果見表3。

從表3中可知，隨著乙醇占比的降低，4種藥物的出峰時(shí)間均延長(zhǎng)。當(dāng)分離鹽酸西替利嗪對(duì)映體的乙醇占比從20%降低到5%時(shí)，其α和R均逐漸增加；但乙醇占比為5%時(shí)，出峰時(shí)間長(zhǎng)且峰寬明顯增加；因此，選擇10%乙醇占比來分離鹽酸西替利嗪對(duì)映體。鹽酸異丙嗪對(duì)映體在乙醇占比為10%時(shí)，α和R達(dá)到最大；因此，選擇10%乙醇占比來分離鹽酸異丙嗪對(duì)映體。特非那定和馬來酸非尼拉敏對(duì)映體分離的情況略有不同。隨著乙醇占比的降低，這2種藥物的選擇因子呈現(xiàn)先增大后減小的趨勢(shì)。特非那定對(duì)映體在乙醇占比為10%時(shí)，分離度最大（R=1.03）；因此，選擇10%乙醇占比來分離特非那定對(duì)映體。馬來酸非尼拉敏對(duì)映體在乙醇占比為2%時(shí)，分離度最大（R=1.09）。因此，選擇2%乙醇占比來分離馬來酸非尼拉敏對(duì)映體。

2.3.4 甲醇對(duì)分離的影響 在“2.3.3”項(xiàng)試驗(yàn)結(jié)果基礎(chǔ)上，特非那定對(duì)映體的R=1.03，馬來酸非尼拉敏對(duì)映體的R=1.09，均小于1.5，故繼續(xù)優(yōu)化分離條件，以實(shí)現(xiàn)完全分離。據(jù)有關(guān)文獻(xiàn)報(bào)道[10]，甲醇的加入有利于對(duì)映體的拆分。因此，嘗試在特非那定和馬來酸非尼拉敏對(duì)映體分離的流動(dòng)相中加入甲醇。結(jié)果顯示，特非那定對(duì)映體在正己烷-甲醇-乙醇-二乙胺體積比為89 ∶ 9.9 ∶ 1 ∶ 0.1的條件下，獲得了最大分離度（R=1.56）；馬來酸非尼拉敏對(duì)映體在正己烷-乙醇-甲醇-二乙胺體積比為 98 ∶ 2 ∶ 0.5 ∶ 0.1時(shí)，獲得了最大分離度（R=1.61）。兩種藥物均達(dá)到了完全分離。

2.4 系統(tǒng)適用性考察

精密吸取“2.2”項(xiàng)下各藥物的對(duì)照品溶液和供試品溶液，按“2.1”項(xiàng)下的色譜條件和“2.3”項(xiàng)下優(yōu)化后的各藥流動(dòng)相組成，進(jìn)樣分析。結(jié)果顯示，鹽酸西替利嗪、鹽酸異丙嗪、特非那定和馬來酸非尼拉敏對(duì)照品溶液的R分別為4.29、3.67、1.56和1.68，4種藥物對(duì)照品溶液的高效液相色譜圖詳見圖1。鹽酸西替利嗪、鹽酸異丙嗪、特非那定和馬來酸非尼拉敏供試品溶液的分離度分別為4.36、3.76、1.55和1.71，4種藥物供試品溶液的高效液相色譜圖詳見圖2。

2.5 對(duì)映體洗脫順序的考察

準(zhǔn)確預(yù)測(cè)對(duì)映異構(gòu)體在高效液相色譜中的洗脫順序?qū)τ谑中运幬锏亩ㄐ院投糠治鼍哂兄匾饬x。因此，筆者以鹽酸西替利嗪為例，考察鹽酸西替利嗪對(duì)映體的洗脫順序。精密吸取“2.2.1”項(xiàng)下鹽酸西替利嗪對(duì)照品溶液和“2.2.3” 左旋鹽酸西替利嗪溶液，按“2.1”項(xiàng)色譜條件和“2.3”項(xiàng)下優(yōu)化后的各流動(dòng)相組成，進(jìn)樣分析。結(jié)果顯示，右旋鹽酸西替利嗪先被洗脫下來，左旋鹽酸西替利嗪后被洗脫下來，兩對(duì)映體分離情況詳見圖3。

3 討論

本文使用的Chiralcel OJ-H手性色譜柱固定相是由硅膠載體涂覆纖維素-3（4-甲基苯甲酸酯）制備而成，根據(jù)“三點(diǎn)相互作用”原理[11]，固定相上的羰基可以與對(duì)映體中的羥基、氨基形成氫鍵，與具有羰基的對(duì)映體發(fā)生偶極-偶極相互作用，與帶有羥基或氨基的對(duì)映體則可通過氫鍵發(fā)生作用；固定相上的甲基是供電子基團(tuán)，引入甲基可使苯環(huán)上的電子云密度增強(qiáng)，使得C=O基團(tuán)上的電子云密度加大，從而加強(qiáng)了固定相與對(duì)映體之間的相互作用。鹽酸西替利嗪、鹽酸異丙嗪、特非那定和馬來酸非尼拉敏的化學(xué)結(jié)構(gòu)中均含有苯環(huán)、氨基或羥基等基團(tuán)，可與固定相的苯基之間還能形成π-π相互作用，從而實(shí)現(xiàn)了4種H1受體拮抗藥的對(duì)映體分離。

根據(jù)本研究結(jié)果可知，鹽酸西替利嗪和鹽酸異丙嗪對(duì)映體分離效果較好。這是由于在鹽酸西替利嗪的分子結(jié)構(gòu)中，手性碳分別與2個(gè)苯環(huán)和1個(gè)哌嗪基相連，與固定相的苯基之間能產(chǎn)生較強(qiáng)的π-π作用；在鹽酸異丙嗪的分子中，手性碳原子不僅與氨基相連，還能與固定相產(chǎn)生氫鍵作用；同時(shí)，手性碳原子上還連有吩噻嗪基，能與固定相的苯環(huán)產(chǎn)生π-π作用，故使得該手性固定相對(duì)鹽酸異丙嗪具有較強(qiáng)的對(duì)映體選擇性。由特非那丁和馬來酸非尼拉敏的結(jié)構(gòu)式可知，特非那定手性碳原子的α位僅連有1個(gè)苯環(huán)，與鹽酸異丙嗪和鹽酸西替利嗪相比，其與固定相的苯環(huán)產(chǎn)生的π-π作用較??；且由于其結(jié)構(gòu)式中有較大的空間位阻，減小了分子與固定相之間空間適應(yīng)性，而在馬來酸非尼拉敏的手性碳原子的β位連有叔胺基團(tuán)，形成空間位阻，使得該固定相對(duì)特非那定和馬來酸非尼拉敏的手性選擇性較小。

綜上所述，本試驗(yàn)建立的方法簡(jiǎn)單、快速，且分離效果好，不僅能夠拓展纖維素涂覆型手性固定相的應(yīng)用范圍，還可作為鹽酸西替利嗪、鹽酸異丙嗪、特非那定和馬來酸非尼拉敏對(duì)映體分離的新方法，并在立體選擇性代謝研究、手性藥物質(zhì)量控制等方面具有一定的參考價(jià)值。

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（收稿日期：2018-08-14 修回日期：2018-10-10）

（編輯：唐曉蓮）