仇 磊，劉一平，劉 青，曹海佳，鐘玉琪，李治軍，李 濤，廖曉蘭*

(1.湖南農業(yè)大學植物保護學院，湖南長沙410128;2.湖南化工研究院，湖南長沙400014)

粉唑醇，英文名為 flutriafol，化學名稱α－(2－氟苯基)－α－(4－氟苯基)－1H－1，2，4－三唑－1－乙醇，結構式 (圖1)，是一種具有廣譜性的三唑類殺菌劑，在植物體內可自下而上進行傳導［1］，粉唑醇通過抑制麥角甾醇的生物合成引起真菌細胞壁破裂和菌絲的生長，具有鏟除、保護、觸殺和內吸活性，對真菌和卵菌引起的植物病害具有良好的保護和治療效果［2］，在防治小麥、大麥、玉米、水稻等禾谷類作物的莖葉及穗部病害和水果的葉部病害上具有卓越的表現(xiàn)，如小麥條銹?。?］、白粉病［4］、赤霉病［5］; 水稻稻瘟?。?］; 草莓白粉病［7］等。

目前已有相關國家和地區(qū)制定了粉唑醇在小麥上的最大殘留限量 (MRL)，日本為0.5 mg/kg［8－9］，CAC 和 歐 盟 為 0.15 mg/kg［10－11］，中國為0.5 mg/kg［12］。粉唑醇在農作物上的殘留已有相關報道，研究對象包括水稻［13］、草莓［14］、煙草［15］、小麥［16］等，其殘留分析方法主要有氣相色譜法［17］、液相色譜法［18］、液相色譜－串聯(lián)質譜法［19］等。綜合上述方法普遍存在樣品前處理過程繁瑣、儀器設備要求高等不足。本研究于2016～2017年在北京、湖南、江蘇進行2年3地的農藥殘留田間試驗，擬采用優(yōu)化的粉唑醇殘留檢測方法，通過乙腈提取、分散固相萃取進行前處理，結合氣相色譜－質譜法(GC－MS)法對粉唑醇在小麥田中的殘留量進行測定，并對其殘留降解動態(tài)和最終殘留進行研究，其結果將為制定粉唑醇在小麥上的合理使用準則以及安全性評價提供了重要的科學依據(jù)。

圖1 粉唑醇化學結構式

1 材料與方法

1.1 試劑與儀器

1.1.1 藥劑及試劑 粉唑醇標準品:95.0%，農業(yè)部天津環(huán)?？蒲斜O(jiān)測所;250 g/L粉唑醇懸浮劑。

乙腈、無水硫酸鎂、氯化鈉 (均為分析純，上海國藥集團化學試劑有限公司);PSA(天津博納艾杰爾科技有限公司);去離子水 (Milli－Q過濾)。

1.1.2 儀器設備 氣相色譜－質譜聯(lián)用儀 (安捷倫科技有限公司)，色譜柱:熔融石英毛細管柱 HP－5MS(30m ×0.25mm i.d.×0.25μm)(安捷倫科技有限公司)，微型植物粉碎機 (天津泰斯特儀器有限公司)，H2050R－1型高速冷凍離心機 (長沙湘儀離心機儀器有限公司)，Milli－Q水純化系統(tǒng) (北京博雅創(chuàng)新科技發(fā)展有限公司)，HZQ－C型空氣浴振蕩器 (哈爾濱東聯(lián)電子技術開發(fā)有限公司)，CPA225D型電子天平 (德國賽多利斯股份公司)，XW－80A型旋渦混合器 (上海精科實業(yè)有限公司)。

1.2 田間試驗設計 于2016年和2017年分別在北京、湖南、江蘇開展2年3地的田間試驗。試驗小區(qū)根據(jù)《農藥殘留試驗準則》［20］的具體要求進行設置，每小區(qū)30m2，各小區(qū)隨機排列，小區(qū)間設置保護帶，每個處理重復3次，另設空白對照處理。于小麥齊穗期 (參照 BBCH Monograph［21］對應的圖譜) 進行噴霧施藥。

1.2.1 消解動態(tài)試驗 施藥劑量為720 g.a.i/ha(推薦最高使用劑量的2倍)，處理重復3次，處理間設保護隔離區(qū)，另設清水空白對照，于施藥后2 h、1、2、3、5、7、14、21 d分別采集植株和土壤。植株取樣在小區(qū)內用隨機方式多點采集生長正常、無病害的小麥植株≥2 kg，土壤取樣時取土深度為0～10 cm，采樣點≥8個，采樣量≥2 kg。

1.2.2 最終殘留試驗 設高、低2個施藥劑量，高劑量按720 g.a.i/ha施藥，低劑量按360 g.a.i/ha施藥，每個劑量均設2次和3次施藥2個處理，每個處理3次重復，施藥間隔期為10 d，距最后1次施藥30、45 d時分別采集植株、麥穗和土壤樣本。植株及麥穗取樣在小區(qū)內用隨機方式多點采集生長正常、無病害的植株和麥穗≥2 kg，土壤取樣時取土深度為0～10 cm，采樣點≥8個，采樣量≥2 kg。

1.3 樣品制備 植株:植株剪成1 cm以下的小段，充分混勻后，用四分法縮分，取150g 2份，分別裝于封口袋中編號;麥粒、麥殼:麥穗脫粒處理后去殼，麥粒和麥殼分別用磨碎機磨碎，分別混勻，用四分法縮分，取磨碎后的麥粒和麥殼各2份，每份150 g，分別裝于封口袋中編號;土壤:去除土壤中的雜草、雜物和碎石后，將土壤充分混勻取2份，每份200 g，分別裝于封口袋中，標記后貼好標簽;將上述制備的實驗室樣品分類包裝并標記后，貼好標簽，－18℃保存。

1.4 分析方法

1.4.1 提取

1.4.1.1 土壤 準確稱取10 g土壤樣品，于50 mL具塞離心管中，加入3 mL水搖勻靜置，加入乙腈10 mL，振搖30 s后渦旋提取1 min，然后分別加入4 g無水硫酸鎂 (MgSO4)和1 g氯化鈉(NaCl)，稱量均應精確至0.1 g，完成上述步驟后立即進行劇烈振搖，10 s后置于冰水浴中冷卻處理1～2 min，渦旋1 min后以3 800 r/min離心5 min。

1.4.1.2 植株 準確稱取5 g植株樣品，于50 mL具塞離心管中，加入3 mL水搖勻靜置，加乙腈5 mL，振搖30 s后于振蕩器中振蕩1 h，然后分別加入4 g無水硫酸鎂 (MgSO4)和1 g氯化鈉(NaCl)，稱量均應精確至0.1 g，完成上述步驟后立即進行劇烈振搖，10 s后置于冰水浴中冷卻處理1～2 min，渦旋1 min后以3 800 r/min離心5 min。

1.4.1.3 麥粒和麥殼 準確稱取4 g麥?；蛐←湚悠?，于50 mL具塞離心管中，加入3 mL水搖勻靜置，加乙腈5 mL(小麥殼中加乙腈10 mL)，振搖30 s后渦旋提取1 min，然后分別加入4 g無水硫酸鎂 (MgSO4)和1 g氯化鈉(NaCl)，稱量均應精確至0.1 g，完成上述步驟后立即進行劇烈振搖，10 s后置于冰水浴中冷卻處理1～2 min，渦旋1 min后以3 800 r/min離心5 min。

1.4.2 凈化 取1 mL上述離心后的上清液轉入裝有20 mg PSA，150 mg無水MgSO4的2 mL微量離心管中，振蕩20 s后渦旋1 min，以6 000 r/min離心2 min，上清液過0.22 μm有機系濾膜于自動進樣瓶中，待測。

1.4.3 儀器檢測條件

1.4.3.1 氣相色譜條件 載氣為純度≥99.999%的氦氣;恒流模式，流速為1.2 mL/min;采用不分流進樣，0.8 min之后打開分流閥，進樣量1 μL，進樣口溫度為250℃;柱溫箱升溫程序:初始溫度80℃，保持1 min，以25℃/min速率升溫至290℃，保持10 min。

1.4.3.2 質譜條件 色譜－質譜接口溫度為280℃;離子源溫度為230℃;四級桿溫度為150℃;采用電子轟擊電離源 (EI)，電子能量為70 eV;全掃描模式 (SCAN)，掃描質量范圍50～300，選擇離子監(jiān)測模式 (SIM)，粉唑醇的定性離子對 (m/z)為:219/164和219/123，定量離子對為:219/123。

1.4.4 標準曲線與添加回收率

1.4.4.1 標準曲線 用乙腈將粉唑醇標準品配制成100 mg/L的標準儲備液，準確移取適量標準儲備液進行梯度稀釋，配制成0.01、0.05、0.25、0.5、1 mg/L系列的標準溶液。

在上述氣相色譜－質譜條件下測定粉唑醇的標準溶液，以標準溶液的質量濃度與對應的峰面積作標準曲線。1.4.4.2 添加回收率 在空白土壤、植株、麥粒、麥殼樣品中進行粉唑醇的添加回收率實驗，添加濃度依次為0.05、0.5、1 mg/kg，每個濃度5次重復，另設空白對照。按上述方法及儀器條件進行樣品前處理和分析測定，根據(jù)峰面積及添加濃度計算粉唑醇在各基質中的添加回收率及其相對標準偏差。

2 結果與分析

2.1 標準曲線和靈敏度 在上述檢測條件下對粉唑醇標準溶液進行測定，以添加濃度 (mg/L)為橫坐標，測得的相應峰面積為縱坐標，制作粉唑醇的標準曲線圖，得到粉唑醇的標準曲線方程為 y=317 637x－2 088.5，相關系數(shù)(R2)為0.999 2，結果表明粉唑醇在0.01～1.00 mg/kg的質量濃度范圍內其色譜峰面積與質量濃度呈良好的線性關系，該儀器條件下粉唑醇的最小檢出量 (LOD)為1.0×10－11g，通過添加回收試驗測定各基質中粉唑醇的最低檢測濃度 (LOQ)均為0.05 mg/kg。

2.2 回收率和精密度 在空白土壤、植株、麥粒及麥殼基質中分別添加粉唑醇的標準工作溶液，添加水平為0.05～1 mg/kg，添加回收率試驗結果 (表1)，結果表明:植株中的添加回收率為84.3% ～93.7%，RSD為6.9% ～9.3%;籽粒中的添加回收率為77.6%～95.6%，RSD為4.4%～12.2%;粉唑醇在小麥殼中的添加回收率為84.8% ～88.8%，RSD為7.7% ～10.9%;粉唑醇在土壤中的添加回收率和RSD分別為77.7%～95.5%和4.5%～12.2%?；厥章屎途芏确限r藥殘留試驗準則的相關要求，相關色譜圖 (圖2)。

圖2 粉唑醇在土壤、植株、麥粒和麥殼中的色譜圖

2.3 消解動態(tài)試驗 采用250 g/L的粉唑醇懸浮劑在小麥齊穗期進行噴霧施藥，施藥劑量為推薦最高使用劑量的2倍720 g.a.i/ha。結果表明:粉唑醇在土壤和小麥植株中的消解動態(tài)均符合一級動力學方程，消解動態(tài)方程及相關參數(shù) (表2)。粉唑醇在土壤和小麥植株中的原始沉積量分別為0.43～1.53 mg/kg，5.22～9.21 mg/kg，施藥后14 d粉唑醇在土壤中的消解率達85%以上，在植株中的消解率達90%以上，粉唑醇在土壤中消解半衰期為1.8～7.4 d，在植株中消解半衰期為3.2～5.1 d。

表2 粉唑醇在麥田土壤和小麥植株中的消解動力學參數(shù)

(續(xù))

2.4 最終殘留試驗 最終殘留試驗結果表明:以360 g.a.i/ha和720 g.a.i/ha的劑量分別對土壤及小麥施用200 g/L的粉唑醇懸浮劑，每個劑量各施藥2次和3次，施藥間隔期為10 d，距最后1次施藥后30、45 d時采集小麥和土壤樣本進行分析，粉唑醇在植株中最終殘留量在＜LOQ～1.31 mg/kg之間，在麥粒中最終殘留量在＜LOQ～0.28 mg/kg之間，在麥殼中最終殘留量在＜LOQ～1.07 mg/kg之間，在土壤中的殘留量在＜LOQ～1.13 mg/kg之間，上述麥田各基質中粉唑醇的最終殘留量的大小依次為:小麥植株＞麥田土壤＞小麥殼＞麥粒;總體上隨著采收間隔期的延長以及用藥施次數(shù)的減少，粉唑醇在麥田各基質中的殘留量逐漸減小。距最后1次施藥30 d，粉唑醇在麥粒中的最終殘留量最大值為0.28 mg/kg，距最后1次施藥45 d時粉唑醇在麥粒中最終殘留量最大值為0.18 mg/kg，均低于我國制訂的粉唑醇在小麥中的最大殘留限量值0.5 mg/kg。

3 結論與討論

本文建立了氣相色譜－質譜法測定粉唑醇在土壤、小麥植株、麥粒及麥殼中殘留量的檢測方法，該方法簡單、便捷，靈敏度較高，粉唑醇的平均回收率在77.6% ～95.5%之間，RSD為4.4%～12.2%，符合農藥殘留分析的要求。粉唑醇在土壤中的中消解半衰期為1.8～7.4 d，在小麥植株中的消解半衰期為3.2～5.1 d，可見，粉唑醇屬易降解農藥［22］;根據(jù)最終殘留試驗結果，距最后1次施藥間隔30～45 d，麥粒樣本中粉唑醇的最終殘留量最大值為0.28 mg/kg，低于我國制定的粉唑醇在小麥中的最大殘留限量 (MRL)0.5 mg/kg，因此，建議使用250 g/L的粉唑醇懸浮劑防治小麥條銹病，以360 g.a.i/ha的施藥劑量，于小麥齊穗期噴霧施藥2～3次，施藥間隔期為10 d，推薦安全間隔期為45 d，可保證小麥的質量安全。