陳星宇，劉美玲，朱恒怡，袁 軍，徐小平，錢廣生

(1.四川大學華西藥學院，四川 成都 610041;2.四川省食品藥品檢驗檢測院，四川 成都 611731)

0 引 言

復方氨酚苯海拉明片是由對乙酰氨基酚（BCS4類）、咖啡因（BCS3類）、鹽酸苯海拉明（BCS1類）和鹽酸麻黃堿（BCS3類）4種成分組成的復方制劑，共兩個規(guī)格，規(guī)格一中每片含對乙酰氨基酚300 mg、咖啡因30 mg、鹽酸麻黃堿7.5 mg、鹽酸苯海拉明7.5 mg，規(guī)格二中各主成分量為規(guī)格一含量的一半。該制劑具有良好的解熱鎮(zhèn)痛效果。臨床常用于治療傷風感冒引起的發(fā)熱、頭痛，且伴有咳喘癥狀者[1-2]。該品種的法定檢驗標準《國家藥品標準》（化學藥品地方標準上升國家標準）第十二冊[WS-10001-(HD-1152)-2002]中未收載溶出度檢查方法，且未檢索到該品種溶出曲線研究的文獻報道。體外溶出度試驗現(xiàn)已作為評價固體制劑內(nèi)在品質(zhì)的重要手段之一[3-4]。對不同廠家同一劑型溶出度的全面深入研究以及溶出曲線的準確客觀繪制，可揭示各制劑工藝的差別和內(nèi)在品質(zhì)的優(yōu)劣，也可初步為體內(nèi)生物利用率和生物等效性提供參考[5]。為了從體外試驗探究該制劑的臨床療效，本研究對7個企業(yè)生產(chǎn)的復方氨酚苯海拉明片中4種主成分的溶出曲線同時進行檢測并比較，對不同廠家藥品的內(nèi)在質(zhì)量進行評價，對影響溶出行為的處方、環(huán)境、包材因素進行研究分析，為臨床用藥和藥品質(zhì)量穩(wěn)定提供參考。

1 儀器與試藥

1.1 儀 器

Agilent Technologies 708-DS Dissolution Apparatus，配 8000 Dissolution Sampling Station（美 國Agilent公司）；Waters Acquity UPLC色譜儀（美國Waters公司）；ZKT-18F真空脫氣儀（天大天發(fā)科技有限公司）；Sartorius CP225D電子天平 (德國Sartorius公司)；SevenExcellece pH 計（瑞士 Mettler-Toledo 公司）；超純水機（ULUP-IV-20T）。

1.2 試 劑

對乙酰氨基酚（中國食品藥品檢定研究院，批號：100018-201409，含量：99.9%），咖啡因（中國食品藥品檢定研究院，批號：171215-201512，含量：99.9%），鹽酸麻黃堿（中國食品藥品檢定研究院，批號：171241-201007，含量：99.7%），鹽酸苯海拉明（中國食品藥品檢定研究院，批號：100066－200807，含量：99.9%）；復方氨酚苯海拉明片，規(guī)格一：每片含對乙酰氨基酚300 mg、咖啡因30 mg、鹽酸麻黃堿7.5 mg、鹽酸苯海拉明7.5 mg（A廠，黑龍江省，批號：20161124；B廠，吉林省，批號：20161103；C廠，吉林省，批號：20160901；D廠，吉林省，批號：20160901；E廠，吉林省，批號：20170109；F 廠，黑龍江省，批號：20170201），規(guī)格二：每片含對乙酰氨基酚150 mg、咖啡因15 mg、鹽酸麻黃堿3.75 mg、鹽酸苯海拉明3.75 mg（G廠，吉林省，批號：03-160909）；參照制劑酚麻美敏片（H 廠，上海市，批號：151015726）、乙腈、磷酸為色譜純，氯化鈉、鹽酸、冰醋酸、乙酸鈉、磷酸氫二鈉、磷酸二氫鉀均為分析純。

2 檢測方法

2.1 溶出方法的確定

2.1.1 溶出介質(zhì)的選擇

選擇4種不同pH值的溶出介質(zhì)來模擬消化道內(nèi)的體液[6]（pH1.2、pH4.0、pH6.8 的緩沖液及水），配制方法為：1）pH 1.2鹽酸溶液：稱取氯化鈉2.0 g，加水適量溶解，加鹽酸7 mL，再加水稀釋至1 000 mL，即得；2）pH4.0醋酸鹽緩沖液：稱取三水合醋酸鈉1.22 g，加入冰醋酸溶液2.337 mL，加水溶解并稀釋至1 000 mL，即得；3）pH6.8磷酸鹽緩沖液：稱取磷酸二氫鉀3.4 g和無水磷酸氫二鈉3.55 g，加水適量溶解并定容至1 000 mL，再稀釋一倍，即得；4）水：純化水。上述介質(zhì)在使用前均采用真空脫氣處理。

2.1.2 溶出方法的選擇

最常用的溶出方法為籃法或槳法，對于片劑的溶出考察，大多采用槳法[7]，本方法采用槳法。

2.1.3 溶出參數(shù)的選擇

轉(zhuǎn)速對制劑的溶出速率影響明顯[8]，通過預實驗發(fā)現(xiàn)50 r/min較75 r/min更有區(qū)分力，因此選擇50 r/min；人體消化道內(nèi)體液總體積接近于900 mL[9]，因此溶出介質(zhì)體積采用900 mL，為兼顧檢測方法，處方規(guī)格二采用500 mL溶出介質(zhì)。

2.1.4 取樣點的選擇

基于預實驗結(jié)果，選擇各溶出介質(zhì)中的取樣點分別為：1)pH1.2鹽酸溶液:5，10，20，30，45，60，90，120 min；2)pH4.0的醋酸鹽緩沖液：5，10，20，30，45，60，90，120 min；3)pH6.8 的磷酸鹽緩沖鹽：5，10，20，30，45，60，90，120 min；4)水：5，10，20，30，45，60，90，120 min。

2.1.5 參照制劑的選擇

未查詢到國外復方氨酚苯海拉明片上市制劑。因此選擇對乙酰氨基酚處方量相似的酚麻美敏片（規(guī)格：乙酰氨基酚325 mg，鹽酸偽麻黃堿30 mg，氫溴酸右美沙芬10 mg，馬來酸氯苯那敏2 mg）作為參照制劑進行溶出曲線研究。

2.2 測定方法的建立和驗證

對于復方制劑，首選液相方法同時對幾個有效成分進行溶出量的測定。本文建立了UPLC檢測方法，實現(xiàn)了快速分析測定4個主成分。

2.2.1 色譜條件

色譜柱：Waters ACQUITY UPLC BEH C18柱（2.1 mm×50 mm,1.7 μm）；流動相：水（A）（磷酸調(diào)pH 至2.5）-乙腈（B），梯度洗脫（0～1 min，5%B；1～2 min，5%～70%B；2～2.5 min，70%～5%B；2.5～3 min，5%B）；流量0.5 mL/min；檢測波長分別為216 nm（對乙酰氨基酚和鹽酸苯海拉明）和205 nm（咖啡因和鹽酸麻黃堿）；進樣量分別為2 μL（對乙酰氨基酚和咖啡因）和20 μL（鹽酸麻黃堿和鹽酸苯海拉明）；柱溫為30℃。該色譜條件下各成分的分離度良好，如圖1所示。

圖1 復方氨酚苯海拉明片中4種成分的UPLC分離色譜圖

2.2.2 對照品溶液的制備

分別精密稱取對乙酰氨基酚、咖啡因、鹽酸麻黃堿、鹽酸苯海拉明對照品適量，用溶出介質(zhì)溶解并稀釋制成含上述各成分約0.33 mg/mL，0.033 mg/mL，0.083 mg/mL，0.083 mg/mL的混合對照品溶液。

2.2.3 供試品溶液的制備

取各時間點下的溶出液用0.45 μm的濾膜過濾，棄去3mL初濾液后，取續(xù)濾液即得。

2.2.4 方法學驗證

1)專屬性試驗

分別取空白溶劑、空白輔料、對照品溶液和供試品溶液各20 μL，按2.2.1項下色譜條件進樣測定，結(jié)果如圖2所示，表明各介質(zhì)及空白輔料均不干擾主成分的檢出，專屬性強。

2)濾膜吸附試驗

于同一溶出杯中取兩份樣品，一份溶液用0.45 μm微孔濾膜依次棄去初濾液 0，1，2，3，4，5，6，7 mL，取續(xù)濾液進樣測定[10]。另一份溶液離心（10 000 r/min，10 min）后取上清液進樣測定。結(jié)果表明，棄去3 mL初濾液后，濾膜的吸附率均小于2.0%，對各有效成分的測定無影響。

3)線性范圍

分別精密稱取對乙酰氨基酚對照品33.33 mg置于10 mL量瓶中，咖啡因?qū)φ掌?6.65 mg置于50 mL量瓶中，鹽酸麻黃堿對照品20.75 mg置于25 mL量瓶中，鹽酸苯海拉明對照品20.75 mg置于25 mL量瓶中，加入2.1.1項下的4種溶出介質(zhì)使溶解并稀釋至刻度，搖勻，作為混合對照品貯備液；分別精密量取對照品貯備液適量，用相應(yīng)的溶出介質(zhì)稀釋制成5%、10%、20%、50%、70%、100%、120%系列濃度的混合對照品溶液，照2.2.1項下色譜條件進樣檢測，以4種主藥成分的濃度（mg/mL）對峰面積進行最小二乘法線性回歸擬合。結(jié)果表明，在4種溶出介質(zhì)中，對乙酰氨基酚、咖啡因、鹽酸麻黃堿、鹽酸苯海拉明分別在 16.50～400.00 μg/mL、1.65～40.00 μg/ml、4.15～99.60 μg/mL 和4.15～99.60 μg/mL濃度范圍內(nèi)與峰面積線性關(guān)系良好。

圖2 專屬性試驗色譜圖（a.對照品溶液；b.溶劑；c.空白輔料）

4)精密度試驗

分別取4種溶出介質(zhì)中對乙酰氨基酚、咖啡因、鹽酸麻黃堿、鹽酸苯海拉明濃度分別為0.33 mg/mL，0.033 mg/mL，0.083 mg/mL，0.083 mg/mL的混合對照品溶液，照2.2.1項下色譜條件連續(xù)進樣6次，記錄峰面積，計算RSD值。結(jié)果4種溶出介質(zhì)中各主藥成分峰面積的RSD值均小于2.0%，表明本方法精密度良好。

5)回收率試驗

按處方量比例的5%、50%、120%精密稱取4種主藥成分對照品各3份，加入處方量的輔料，加4種溶出介質(zhì)配制成低、中、高濃度的回收率試驗溶液，照2.2.1項下色譜條件進樣檢測，記錄峰面積。4種主成分在pH1.2、pH4.0、pH6.8介質(zhì)中回收率均在95.0%～105%范圍內(nèi)。在介質(zhì)水中，含羧甲基淀粉鈉輔料的廠家，鹽酸麻黃堿和鹽酸苯海拉明的回收率只有72.2%和62.5%（遠小于95%），所以，介質(zhì)水中只考察了不含羧甲基淀粉鈉輔料的廠家樣品的溶出曲線。

6)重復性試驗

精密稱取復方氨酚苯海拉明片粉末6份，加4種溶出介質(zhì)溶解，過濾，取續(xù)濾液進樣檢測，記錄峰面積。結(jié)果4種主成分含量RSD值均小于2.0%，表明方法的重復性良好。

7)穩(wěn)定性試驗

取2.2.2項下對照品溶液和2.2.3項下供試品溶液，分別于 0，2，4，6，8，12，18 h按 2.2.1 項下色譜條件測定，結(jié)果在18 h內(nèi)4種主成分在4種溶出介質(zhì)中峰面積的RSD均小于2%，表明對照品溶液和供試品溶液在18 h內(nèi)穩(wěn)定。

3 溶出曲線測定結(jié)果

按照第2節(jié)中確定的溶出曲線檢測方法，檢測了參照制劑和7個廠家生產(chǎn)的復方氨酚苯海拉明片的溶出曲線?，F(xiàn)將檢測結(jié)果匯總?cè)鐖D3、圖4所示（因數(shù)據(jù)較多，此處僅列出BCS分類4類且所占比重最大的對乙酰氨基酚的典型溶出曲線）。

3.1 各企業(yè)樣品在不同介質(zhì)中溶出曲線的典型圖譜（溶出量為6片的均值）

從圖3可以看出，在4種介質(zhì)中參照制劑中對乙酰氨基酚的溶出行為相似，溶出速率快，批內(nèi)差異小。而廠家E的樣品溶出行為差異較大，溶出速率慢。由于復方氨酚苯海拉明片各生產(chǎn)企業(yè)的樣品中4種主成分在pH1.2、pH4.0、pH6.8、水中6片樣品溶出量RSD值不滿足“第一個時間點組內(nèi)RSD小于20%，以后時間點組內(nèi)均小于10%”的要求[11]，批內(nèi)差異大，所以不再進行批間溶出行為比較。

3.2 相同溶出介質(zhì)中各企業(yè)樣品溶出曲線比較

由圖4可以看出，各生產(chǎn)企業(yè)的復方氨酚苯海拉明片在相同介質(zhì)中的溶出行為差異很大，如在pH1.2介質(zhì)中B廠家30 min達到完全溶出，而E廠家120 min才能達到完全溶出。提示各生產(chǎn)企業(yè)的樣品在人體內(nèi)吸收可能會有差異，療效也不同，不同生產(chǎn)企業(yè)的產(chǎn)品效果不能保證一致。

4 影響溶出行為的因素分析

針對復方氨酚苯海拉明片批內(nèi)溶出速率差異大，溶出較參照制劑緩慢，各生產(chǎn)企業(yè)樣品之間溶出行為差異大的現(xiàn)狀，本研究對影響本品溶出行為的因素進行了考察。

圖3 不同介質(zhì)中對乙酰氨基酚的溶出曲線

圖4 相同介質(zhì)中各企業(yè)樣品中對乙酰氨基酚的溶出曲線

4.1 高濕影響因素考察

選擇區(qū)分力較強的pH1.2溶出介質(zhì)，考察樣品(G廠家）在高濕（RH90%，25 ℃）條件下，不同包裝程度放置一段時間后，樣品中各主成分溶出行為的變化情況如圖5所示。結(jié)果表明，水分對樣品溶出有一定的影響，會使4個主成分的溶出速率和程度變緩，溶出行為差異變大。

4.2 片劑硬度考察

采用YPD-300C型智能片劑硬度測定儀對樣品硬度進行了測定，考察產(chǎn)品工藝穩(wěn)定性和與樣品溶出速率的關(guān)系。結(jié)果表明，各廠家生產(chǎn)的樣品硬度從12.56～130.22 N不等，差異較大，其中D廠家批間差異大(52.11～83.73 N)，其可能也是導致該企業(yè)樣品溶出行為差異較大的原因。

4.3 制劑處方考察

經(jīng)調(diào)研，7個生產(chǎn)廠家所使用的輔料種類相近，都使用了淀粉、蔗糖、硬脂酸鎂，僅在崩解劑的使用上存在差異。D、E、B、F 4個廠家都使用了羧甲基淀粉鈉，另外F廠家還使用了羥丙甲纖維素，A廠家使用了低取代羥丙纖維素，C廠家使用了預膠化淀粉，G廠家未使用任何崩解劑，該廠家樣品的溶出速率相比其他廠家較為緩慢。

圖5 高濕條件下市售廠家G溶出曲線變化趨勢圖

5 結(jié)束語

本文對復方氨酚苯海拉明中片中的4種成分進行UPLC 檢測，通過對復方氨酚苯海拉明片溶出方法、檢測方法、溶出曲線的考察，該方法的精密度和重復性的相對標準偏差均小于2.0%，對乙?；狈?、咖啡因、鹽酸麻黃堿和鹽酸苯海拉明的分離度和線性關(guān)系良好。回收率實驗中，含羧甲基淀粉鈉輔料的廠家，鹽酸麻黃堿和鹽酸苯海拉明在水中的回收率較低，說明了介質(zhì)水不適用于含羧甲基淀粉鈉樣品溶出行為的考察，同時藥品片與片之間在體內(nèi)的吸收速度和程度也會存在差異，高濕實驗也揭示了生產(chǎn)企業(yè)應(yīng)關(guān)注藥品包裝材料的質(zhì)量，從而確保藥品的穩(wěn)定性。